RP—HPLC法測(cè)定纈沙坦含量

摘要：目的 建立HPLC測(cè)定纈沙坦原料的含量。方法 供試品溶液與對(duì)照品溶液稀釋相同倍數(shù)后經(jīng)過(guò)精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、測(cè)定定量項(xiàng)、樣品測(cè)定等步驟。結(jié)果 在進(jìn)樣濃度為5.0～75.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性良好，r=0.9999（n=18），平均回收率為100.9%（RSD%=0.49%，n=9）。結(jié)論 該方法專屬性好，準(zhǔn)確，靈敏，用于纈沙坦含量的測(cè)定結(jié)果可靠。

關(guān)鍵詞：纈沙坦；含量；高效液相色譜；定量分析

纈沙坦（Valsartan），化學(xué)名為（S）-N-戊?；?N-{[2'-（1H-5-四氮唑-基-1，1'-聯(lián)苯）-4-基]-甲基}-纈氨酸。纈沙坦結(jié)構(gòu)中含1個(gè)手性碳原子，產(chǎn)品為S-構(gòu)型。本文所研究的纈沙坦由湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司研制生產(chǎn)。

1儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；UV-762 紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；BS110S 電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。纈沙坦對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為100651-201203，含量99.8%；纈沙坦原料6批（批號(hào)20121001～20121003，20121101～20121103）。甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸氫二鈉為分析純；水為二次重蒸水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm；流速為1.0 mL/min。理論板數(shù)按纈沙坦峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，纈沙坦與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液制備 取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成約含纈沙坦0.05 mg/mL的樣品溶液；另取纈沙坦對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成約含纈沙坦0.05 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3線性關(guān)系及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱定纈沙坦10 mg，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，分別精密量取2.5 mL，2.5 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7.5 mL置100 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL、20 mL量瓶中，制成5 μg/mL、25 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL、60 μg/mL、75 μg/mL 6個(gè)濃度范圍，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取各溶液10 μL，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=7.266x+0.0627，r=0.9999。纈沙坦在5～75 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，分別于第2 d、第3 d重復(fù)上述操作。主峰峰面積的RSD=1.1%（n=18）。說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5重復(fù)性試驗(yàn) 取\"2.2\"項(xiàng)下方法制備的同一份供試品溶液5份，分別再次重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算含量，RSD=1.4%。說(shuō)明方法的重復(fù)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度制成中含0.05 mg/mL的溶液。取上述液作為供試品溶液，置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10、12 h時(shí)，測(cè)定峰面積，RSD=0.6%。說(shuō)明樣品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7回收率試驗(yàn) 精密稱取纈沙坦約20 mg、25 mg、30 mg，分別置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相30 mL，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取纈沙坦對(duì)照品適量（以干燥品計(jì)），精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成中約含0.05 mg/mL的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中纈沙坦的含量，計(jì)算平均回收率。結(jié)果纈沙坦高、中、低3個(gè)加入量的回收率（n=3）分別為99.96%（RSD=1.2%）、100.12%（RSD=1.6%）、100.08%（RSD=1.4%），平均值（n=9）為100.06%。

2.8定量項(xiàng) 取線性試驗(yàn)項(xiàng)下濃度為5μg/ml溶液，逐級(jí)稀釋對(duì)照品溶液，測(cè)定樣品峰的峰高，同時(shí)測(cè)定相同條件下的色譜基線噪聲，取基線噪聲的10倍值為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，因此本品定量限為0.5 ng（0.1%）。

2.9樣品測(cè)定 取6個(gè)批次的樣品各2份，分別按照\(chéng)"2.2\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件測(cè)定，見(jiàn)表1。

同時(shí)，取以上樣品，按照中國(guó)藥典（2010年版）纈沙坦含量測(cè)定方法進(jìn)行酸堿滴定，見(jiàn)表2。

3討論

3.1高效液相色譜分辯率高于其它色譜法[1-2]；速度快；重復(fù)性高；自動(dòng)化操作，分析精確度高。酸堿滴定法是基于酸堿反應(yīng)的滴定分析方法，其操作誤差主要與滴定條件、指示劑、終點(diǎn)判斷以及操作水平等影響因素有關(guān)。

3.2丁?；i沙坦是纈沙坦原料中主要控制雜質(zhì)之一。其與纈沙坦主要區(qū)別在于正丁酰基。在進(jìn)行滴定法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，易使含量測(cè)定結(jié)果偏高。采用高效液相色譜進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，纈沙坦與丁酰基纈沙坦有效分離，含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，方法專屬性高，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

參考文獻(xiàn)：

[1]Drug Standards of China （國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)）.YBH01882012.

[2]Drug Standards of USP35-NF30 Page 4997. Pharmacopeial Form： Volume No.33（3） Page 467.

編輯/肖慧