他汀類藥物對(duì)心梗后心房神經(jīng)分布的影響

摘要：目的 探討瑞舒伐他汀對(duì)心肌梗死（MI）后心房神經(jīng)分布的影響。方法 開(kāi)胸后結(jié)扎前降支制作兔MI模型，24h后將存活兔分為心梗組（MI，n=7）、藥物干預(yù)組（Rt，n=8），并設(shè)假手術(shù)組（S，n=9）。瑞舒伐他汀藥物干預(yù)8w后處死動(dòng)物，觀察心房自主神經(jīng)分布改變。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，心肌梗死組TH與膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（choline acetyltransferase，CHAT）表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度增加，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與心肌梗死組比較， 藥物干預(yù)組TH與CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度減少，差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且藥物干預(yù)組與假手術(shù)組相比較，TH與CHAT表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 瑞舒伐他汀對(duì)MI后心房神經(jīng)再分布具有抑制效應(yīng)。

關(guān)鍵詞：瑞舒伐他汀；心肌梗死；心房神經(jīng)重構(gòu)

他汀類藥物又名羥甲基戊二酸單酰輔酶A （HMG-GoA）還原酶抑制劑是臨床上最廣泛的調(diào)脂藥物，近年來(lái)隨著對(duì)其研究的深入，發(fā)現(xiàn)其還有許多獨(dú)立于調(diào)脂作用的生物學(xué)效應(yīng)，即他汀藥物的“多效應(yīng)”，如抗炎、抗氧化應(yīng)激、改善內(nèi)皮功能、抗血栓、保護(hù)心肌、抗心律失常等多重效應(yīng)。其中他汀類藥物抗心律失常及防止心臟重構(gòu)的作用已得到普遍關(guān)注，成為研究的熱點(diǎn)之一[1-2]。此外，MI后除發(fā)生室性心律失常外，房性心律失常尤其是房顫（atrial fibrillation， AF）的發(fā)生亦較常見(jiàn)[3]，他汀類藥物對(duì)這些房性心律失常具有防治作用[4]，但其機(jī)制尚未完全闡明。本研究擬通過(guò)觀察兔MI后心房肌神經(jīng)重構(gòu)變化及瑞舒伐他汀對(duì)神經(jīng)重構(gòu)影響，旨在為他汀類藥物防治MI后房性心律失常的機(jī)制提供某種合理解釋。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立及分組 選購(gòu)28只健康新西蘭大白兔（普通級(jí)），體質(zhì)量（2.2±0.3）kg。參照Fujita M等[5]報(bào)道建立兔心肌梗死模型。應(yīng)用3%戊巴比妥鈉（45mg/kg）經(jīng)耳緣靜脈緩慢注射麻醉，術(shù)前30min給予青霉素（10萬(wàn)/kg）肌注。麻醉后將兔固定于小手術(shù)臺(tái)上，術(shù)前常規(guī)行心電圖檢查。保持兔自然呼吸，備皮、消毒后緊貼胸骨左緣3、4肋間縱行切開(kāi)皮膚、游離出3～4cm縱行切口，小心撥開(kāi)縱膈胸膜，充分暴露心臟，仔細(xì)觀察兔左冠狀動(dòng)脈及其分支（或左室支）的解剖位置。于前降支中上1/3處結(jié)扎。直視下可見(jiàn)左心室前壁和心尖部心肌顏色逐漸變暗乃至蒼白，搏動(dòng)減弱。心電圖可見(jiàn)Ⅰ、aVL導(dǎo)聯(lián)ST段逐漸抬高，表明心肌梗死形成。術(shù)后逐層關(guān)胸。心肌梗死模型制作完畢24h后將兔隨機(jī)分為心梗組和藥物干預(yù)組。假手術(shù)組左前降支下穿線，但不結(jié)扎。自術(shù)后第1d開(kāi)始，藥物干預(yù)組給予瑞舒伐他?。?0mg/kg，阿斯利康制藥生產(chǎn)）灌胃8w，心梗組及假手術(shù)組以等量生理鹽水灌胃8w。手術(shù)中及手術(shù)后死亡兔共4只，最終獲得具有完整實(shí)驗(yàn)資料的兔共24只，心梗組（MI， n=7）、藥物干預(yù)組（Rt， n=8）、假手術(shù)組（S， n=9）。

1.2 標(biāo)本采集 灌胃8w后稱取體重，應(yīng)用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉后再次開(kāi)胸，迅速取出心臟，分離出左房分成兩部分，一部分組織凍存于液氮中，另一部分組織放入4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片。

1.3 免疫組化法測(cè)定酪氨酸羥化酶及膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶 常規(guī)石蠟脫水，浸蠟，包埋，連續(xù)切片（厚度3～4μm），脫蠟，水化，抗原修復(fù)，清除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。滴加一抗（抗TH抗體采購(gòu)自PL Laboratories，抗CHAT抗體采購(gòu)自美國(guó)abcam公司）4℃過(guò)夜，第2d取出切片于37℃復(fù)溫30min后滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（北京中山金橋公司）。每一操作步驟間均用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）沖洗，最后用DAB試劑盒顯色（顯示棕色顆粒為陽(yáng)性）。分別對(duì)各組兔心房肌組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)（Image Pro Plus）計(jì)算神經(jīng)密度（density）。每張切片檢測(cè)5個(gè)神經(jīng)纖維密度最高的區(qū)域，用陽(yáng)性神經(jīng)纖維在選區(qū)中所占的面積比值表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩兩比較采用單向方差分析檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

心房肌TH與CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維再生現(xiàn)象：實(shí)驗(yàn)8周后免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖1）：假手術(shù)組兔心房肌TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維較少，心梗組TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維較多，而藥物干預(yù)組較少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果示：心肌梗死組兔的心房TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度明顯高于假手術(shù)組，而藥物干預(yù)組的TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度明顯低于心梗組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；藥物干預(yù)組上述指標(biāo)與假手術(shù)組水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），表1。

3 討論

既往研究[7]表明，心肌梗死后心房顫動(dòng)發(fā)生可能與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)有關(guān)，但具體機(jī)制仍不十分清楚。對(duì)于心律失常的研究目前較為廣泛的集中在心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)方面，且仍不能夠全面解釋其他心臟疾病易出現(xiàn)心律失常的原因。所以，我們應(yīng)該對(duì)神經(jīng)重構(gòu)在心律失常中的作用做進(jìn)一步研究。TH存在于腎上腺素能神經(jīng)纖維的胞漿內(nèi)，是去甲腎上腺素（NE）生成的限速酶，其表達(dá)水平影響心肌NE分布，從而影響心臟電生理特性；同時(shí)它能夠作為交感神經(jīng)纖維標(biāo)記物以探討心律失常發(fā)生的神經(jīng)機(jī)制[8-9]。目前認(rèn)為CHAT是反映迷走神經(jīng)分布及在分布的標(biāo)志，是膽堿酯酶存在的特異性標(biāo)志酶。

本研究說(shuō)明瑞舒伐他汀具有抑制心房自主神經(jīng)重構(gòu)的作用，此結(jié)果與我們以往的實(shí)驗(yàn)[10]和Liu[11]等的研究相一致。目前他汀類藥物在心血管疾病中的應(yīng)用已相當(dāng)廣泛，這可能與其多效性有關(guān)，如改善心臟重構(gòu)及抗心律失常，這些作用有益于改善心肌梗死患者的預(yù)后。具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，他汀類藥物能夠影響MI兔心房神經(jīng)再分布，其發(fā)生機(jī)制尚不明確，但這為他汀類藥物在臨床的應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Abuissa H， O’keefe J H， bykee K A. Statins as anti-arrhythmics： a systematic review part II： effects on risk of ventricular arrhythmias[J]. Clin cardiol， 2009， 32（10）： 549-552.

[2]Pedersen T R， Faergeman O， Kastelein J J， et a1. For the Incremental Decrease in End Points Through Aggressive Lipid Lowering（IDE-AL） Study Group. High-dose atorvastatin vs usual-dose simvastatin for secondary prevention after myocardial infarction.The IDEAL Study：a randomized controlled trial[J]. JAMA， 2005， 294： 2437.

[3]Ole Dyg Pedersen. Increased risk of sudden and non-sudden cardiovaseular death in patients with atrial fibrillation/flutter following acute myocardial infarction[J]. Eur Heart J， 2006， 27： 290-295.

[4]Kumagai K， Nakashima H， Saku K. The HMG-CoA reductase inhibitor atorvasttin prevents atrial fibrillation by inhibiting inflammation in a canine sterile pericarditis model[J]. Cadiovasc Ras， 2004， 62（1）： 105-111.

[5]Fujita M， Morinoto Y， Ishihara M， et al. A new rabbit model of myocardial infarction without endotracheal intubation[J]. Surg Res， 2004， 116： 124-128.

[6]Yuan M J， Huang C X， Tang Y H， et al. A novel peptide ghrlin inhibits neural remodeling after myocardia infarction in rats[J]. Eur J Pharmacol， 2009， 618（1-3）： 52-57.

[7]Hwang HJ， Ha JW， Joung B， et al. Relation of inflammation and left atrial remodeling in atrial fibrillation occurring in early phase of acute myocardial infarction[J]. International journal of cardiology，2011，146（1）：28-31.

[8]Chen P S， Chen L S， Cao J M， et al. sympathetic nerve sprouting， electrical remodeling and the mechanisms of sudden cardiac death[J]. Cardiovasc Res， 2001，50： 409-416.

[9]Zhou S， Cao JM， Tebb ZD，et al. Modulation of QT interval by cardiac sympathyetic nerve sprouting and the mechanisms of verntricular arrhythmia in a canine model of sudden cardiac death[J]. Cardiovascu Electrophysiol， 2001， 12： 1068-1073.

[10]王衛(wèi)杰， 張玉嬌， 高梅等. 瑞舒伐他汀對(duì)心肌梗死兔心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的影響[J]. 山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2012， 50（4）： 29-32.

[11]Liu YB，Lee YT， Pak HN，et al.Effects of simvastatin on cardiac neural and electrophysiologic remodeling in rabbits with hypercholesterolemia[J]. Heart Rhythm， 2009， 6（1）： 69-75.編輯/蘇小梅