Ki—67、VEGF、Her—2在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義

摘要：目的 研究Ki-67、VEGF-2、Her-2在乳腺癌中的表達(dá)情況及臨床意義。方法 運(yùn)用免疫組化檢測(cè)74例乳腺癌和18例乳腺良性病變石蠟包埋切片Ki-67、VEGF 、Her-2的表達(dá)，并探尋其與臨床病理參數(shù)及其相互的關(guān)系。結(jié)果 ①Ki-67、VEGF、Her-2在乳腺癌表達(dá)率別為：66.2%， 78.4%及27.1%；良性病變中的表達(dá)率分別為：11.1%、38.9%、5.5%（P<0.05），分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；②Ki-67和VEGF在乳腺癌中隨著組織學(xué)分級(jí)的增高其表達(dá)率呈增高趨勢(shì)，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Ki-67、VEGF、Her-2的表達(dá)與有無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論 ①乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有Her-2、Ki-67、VEGF參與；②乳腺癌中腫瘤大小及年齡與Her-2、Ki-67、VEGF的表達(dá)無(wú)關(guān)。

關(guān)鍵詞：乳腺癌；細(xì)胞增殖抗原；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；Her-2；免疫組織化學(xué)

乳腺癌在女性人群當(dāng)中最為常見(jiàn)，發(fā)病率在逐年快速上升，由于乳腺癌的發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，即使早診斷，仍有不少患者死于復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。本研究Ki-67、VEGF、Her-2在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能具備重要的作用并具備相互作用的構(gòu)思，結(jié)合搜集到的乳腺癌患者的臨床病理特征臨床資料，得出它們?cè)谌橄侔┻M(jìn)展中的作用，以及它們之間的可能存在的聯(lián)系，為從腫瘤生物學(xué)方向上闡明乳腺癌發(fā)生發(fā)展、預(yù)測(cè)患者預(yù)后等重要難題提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集新疆醫(yī)科大學(xué)第二附醫(yī)院2007年1月～2012年12月符合入組標(biāo)準(zhǔn)的74例女性乳腺癌患者。術(shù)后石蠟包埋的標(biāo)本做實(shí)驗(yàn)組，并隨機(jī)抽取18例乳腺良性疾病組織的術(shù)后石蠟包埋的標(biāo)本作對(duì)照組。年齡29～69歲，平均年齡46歲。其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌52例，12例混合型癌，10例為浸潤(rùn)性小葉癌，共74例。據(jù)組織學(xué)分級(jí)情況：20例Ⅰ級(jí)、41例Ⅱ級(jí)，13例Ⅲ級(jí)。

1.2納入條件 術(shù)前未接受過(guò)化學(xué)藥物治療、增強(qiáng)免疫治療、內(nèi)分泌治療或放射治療等抗腫瘤治療，經(jīng)手術(shù)病理確診。臨床、病理資料齊備。無(wú)其他惡性腫瘤或既往惡性腫瘤病史。

1.3方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)二步法，分別對(duì)74例乳腺癌樣本，18例乳腺良性疾病樣本進(jìn)行Ki-67、VEGF、Her-2檢測(cè)，所有石蠟包埋標(biāo)本均5μm連續(xù)切片（每個(gè)標(biāo)本5張），分別做HE染色和免疫組化染色。以PBS代替一抗做陰性對(duì)照；以已知的試劑盒提供的Ki-67、VEGF陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照。

1.4免疫組化陽(yáng)性結(jié)果判定 Ki-67陽(yáng)性的癌細(xì)胞計(jì)數(shù)<10%計(jì)為1分，≥10%而≤50%計(jì)為2分，≥50%而≤75%計(jì)為3分，>75%計(jì)為4分。按染色強(qiáng)度，無(wú)色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，棕黃色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3分。兩項(xiàng)相加≥4分為陽(yáng)性。

VEGF染色顆粒陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以無(wú)著色計(jì)0分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于1/3計(jì)1分，1/3～2/3計(jì)2分和大于2/3計(jì)3分，每張切片以無(wú)著色0分、黃色1分、棕黃色2分和棕褐色3分，兩項(xiàng)相加≥4分為陽(yáng)性。

Her-2無(wú)著色為（-），任何比例的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色為（+），>10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中等強(qiáng)度、完整但不均勻、不連續(xù)的細(xì)胞膜棕黃著色或≤30%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜棕褐著色為（++），>30%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的完整的、連續(xù)的細(xì)胞膜棕褐著色為（+++）。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析，采用χ2檢驗(yàn)，非參數(shù)Spearman等級(jí)等相關(guān)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌組織與乳腺良性病變組織中Ki-67、VEGF、Her-2蛋白的表達(dá) 74例乳腺癌組織中Ki-67有49例（49/74）陽(yáng)性表達(dá)，而在對(duì)照組中僅有2例表達(dá)（2/18）（χ2=17.79，P<0.01）； VEGF有58例（58/74）陽(yáng)性表達(dá)，而在對(duì)照組中僅有7例表達(dá)（7/18）（χ2=10.889，P<0.01）， Her-2有20例（20/74）陽(yáng)性，而在對(duì)照組中僅有1例（1/18）（χ2=3.789，P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 Ki-67、VEGF、Her-2蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系 Ki-67表達(dá)Ⅰ級(jí)7例（7/20），Ⅱ級(jí)19例（19/29），Ⅲ級(jí)23例（23/25，Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)之間χ2=4.426（P<0.05），而在Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間χ2=5.447（P<0.05）；淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移分組，陽(yáng)性組為34例（34/44），陰性組為15例（15/30），χ2=5.931（P<0.05）Ki-67表達(dá)與組織學(xué)級(jí)別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；與年齡大小、腫塊大小無(wú)關(guān)。VEGF表達(dá)在Ⅰ級(jí)11例（11/20），Ⅱ級(jí)25例（25/29），Ⅲ級(jí)22例（22/25），Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)之間χ2=5.910（P<0.05），統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異，而在Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間χ2=0.025（P>0.05）無(wú)明顯差異。淋巴結(jié)陽(yáng)性組為38例（38/44），陰性組為20例（20/30），χ2=4.084（P<0.05），說(shuō)明與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，與年齡大小、腫塊直徑大小無(wú)關(guān)。Her-2在乳腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)級(jí)別、年齡大小、腫塊直徑大小均無(wú)相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，見(jiàn)表2。

3 討論

腫瘤細(xì)胞的增殖行為在腫瘤的發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起相當(dāng)關(guān)鍵的作用。細(xì)胞增殖是所有正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞延續(xù)生命存在的行為過(guò)程。而兩者增殖的主要區(qū)別是前者增殖受調(diào)控，后者增殖是失去控制的。Ki-67是Gerdes等[1]發(fā)現(xiàn)的是一種增殖細(xì)胞的核抗原。研究顯示Ki-67的表達(dá)與乳腺癌的病理學(xué)分級(jí)及臨床分期有一定相關(guān)性[2]，同時(shí)也與乳腺癌的組織學(xué)分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)[3]?，F(xiàn)在已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的最可靠指標(biāo)之一[4]。Ki-67是一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞增殖的標(biāo)記物，能廣泛的在常規(guī)病理研究中運(yùn)用，方法簡(jiǎn)單可行，結(jié)果可靠。部分國(guó)外學(xué)者認(rèn)為它與Her-2并列位于繼組織學(xué)級(jí)別、ER、PR之后重要的乳腺癌指標(biāo)。文獻(xiàn)報(bào)道，乳腺癌患者Ki-67表達(dá)率約為60%～80%[5]。

腫瘤是血管依賴性病變，實(shí)體腫瘤很大程度上依靠持續(xù)的、不可控制的血管生成而生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。VEGF參與促內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加血管通透性、促進(jìn)血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡、免疫抑制等作用。對(duì)于當(dāng)原發(fā)灶已經(jīng)被切除，機(jī)體中尚殘留有活性的腫瘤細(xì)胞的患者，血清中測(cè)得的VEGF濃度，動(dòng)態(tài)觀察這部分患者的VEGF變化和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，可能獲得更多的信息，這也是以后需要進(jìn)一步進(jìn)行的研究[6]。

原癌基因HER-2參與抑制細(xì)胞調(diào)亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活，上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和金屬蛋白酶，血管通透性因子（VPF），促進(jìn)腫瘤新生血管生成有關(guān)。在乳腺癌中HER-2的高表達(dá)是其癌基因擴(kuò)增的結(jié)果，Her-2的高表達(dá)常提示腫瘤惡性程度高，常預(yù)后差，易復(fù)發(fā)[7]。

近30年來(lái)，除了手術(shù)方式的改進(jìn)，新的化療藥物的應(yīng)用，及新的檢測(cè)手段外，多基因的檢測(cè)也成為提高乳腺癌生存率提供必要的手段，而且基因檢測(cè)彌補(bǔ)了其他方式不可替代可能，如早期診斷，判斷預(yù)后等方面。但仍有許多不足之處，可能與乳腺癌生物學(xué)行為是多種因素綜合引起有關(guān)。聯(lián)合檢測(cè)女性乳腺癌中Ki-67、VEGF、Her-2表達(dá)情況和內(nèi)在關(guān)聯(lián)可能為臨床判斷乳腺癌患者選擇合理化的綜合治療方案，制定隨訪周期，判斷預(yù)后提供幫助。

參考文獻(xiàn)：

[1]Gerdes JU， Schwab H， Lemke K， et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation[J]Cancer，1983.31（1）：13-20.

[2]Urruticoechea A， Smith IE， Dowsett M， et al. Proliferation marker Ki-67 in early breast cancer[J]Clin Oncol，2005，23（28）：7212-7220.

[3]Evandro DA， Fatima C， De CG， et al. Ki-67 as prognostic marker in early breast cancer：a meta-analysis of published studies involving 12155 patients[J]Br J Cancer，2007，96（10）：1504-1513.

[4]Cheang MC， Chia SK， Voduc D， et al. Ki-67 index Her-2 status and prognosis of patientswith Luminal B breast cancer[J]Natl CancerInst，2009，101 （10）：736-750，

[5]朱學(xué)強(qiáng)，任剛，胡洪林.乳腺癌組織中VEGF，C-erbB-2，P53，Ki-67的表達(dá)及臨床意義[J].西部醫(yī)學(xué)，2009，21（3）：427-429.

[6]Nichols DW， Wolf DJ， et al. A testing algorithm for detennination Of C-erb-2 status in Patients with breast cancer[J]Ann Clin Lab Sci，2002，（32）：3-11.

[7]Mari P， Ozreti P， Levanat S， et al. Tumor markers in breast cancer evaluation of their clinical usefulness[J]Coll Antropol，2011，35（1）：241-247.

編輯/哈濤