單純皰疹病毒Ⅱ型抗體室內(nèi)質(zhì)控血清制備及臨床應(yīng)用評價

摘要：目的 探討自制外部弱陽性質(zhì)控血清在檢測血清單純皰疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）試劑盒中應(yīng)用的可行性，并與康潤公司質(zhì)控血清進(jìn)行結(jié)果比對。方法 試驗采用對比檢測研究，使用美國Trinity Biotech Plc公司提供抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒分別檢測自制和康潤公司質(zhì)控血清 ，采用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。不同月份和不同批號試劑盒間質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性的比較采用均數(shù)的t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果 自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為（2.56±0.611），CV值11.95%；康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值（2.38±0.48），CV值為10.08%，兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康潤公司抗HSVⅡIgG型質(zhì)控血清S/CO值為（3.275±0.822），CV值為12.55%，兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異P>0.05。結(jié)論 自制外部弱陽性質(zhì)控血清在實際檢測中精密度、穩(wěn)定性符合國家對質(zhì)控物的要求，基層醫(yī)院檢驗科有能力制備，值得推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：質(zhì)控血清；單純皰疹病毒；生殖器皰疹

生殖器皰疹（GH）是皮膚性病科常見的一種由單純皰疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）感染引起的性傳播疾病，常與生殖道致病微生物如淋球菌，支原體，衣原體，梅毒螺旋體混合感染或其他性病治愈后而發(fā)病；此病典型臨床表現(xiàn)為生殖器部位的密集水泡，臨床診斷相對容易；部分病例由于臨床癥狀不典型或臨床醫(yī)師認(rèn)識不足常漏診，因此檢測血清HSVⅡ抗體（IgG型和IgM型）可輔助臨床確診此??；尤其是 IgM型抗-HSVⅡ在血清中出現(xiàn)早，上升快，但在血液中存在時間短，可協(xié)助臨床早期診斷。為了保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，精密度和可靠性，每次實驗均須有內(nèi)部對照質(zhì)控血清（陽性及陰性血清）和外部對照質(zhì)控血清，以外部對照質(zhì)控血清進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。為了避免商品化質(zhì)控血清可能存在的基質(zhì)效應(yīng)，我們利用檢測病例中抗 HSVⅡ陽性標(biāo)本分別制備了IgG和IgM型弱陽性外部對照質(zhì)控血清，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1試劑與儀器 ①試劑：抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒由美國Trinity Biotech Plc公司提供，批號050，有效期2014-11；外部質(zhì)控血清IgG型和IgM型（4NCU/ml），廣州康潤生物制品有限公司提供，批號20131202，有效期20141201；②儀器：BIO-RAD680酶標(biāo)儀及ZL-5洗板機(jī)。

1.2抗HSVⅡIgG型和IgM型檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，以吸光度值/cut-off值（S/CO）判定檢測結(jié)果，S/CO≥1.1為陽性；S/CO≤0.9為陰性；S/CO值介于0.9～1.1間為檢測灰區(qū)。

1.3弱陽性外部質(zhì)控血清制備 我們將皮膚性病門診確診為生殖器皰疹病例16例，其中9例為IgG抗體陽性；7例IgM抗體陽性病例再次抽血5ml，并分離血清；同時使用10例健康體檢者血清（肝炎標(biāo)志物，抗HIV，梅毒抗體均陰性并無脂血、溶血、黃疸）；分別將上述血清混勻，經(jīng)高速離心20min去除蛋白質(zhì)等沉淀，56℃加熱30min備用。用處理后的健康人血清對IgG陽性血清和IgM陽性血清進(jìn)行倍比稀釋，檢測吸光度并計算S/CO值。選擇陽性質(zhì)控血清濃度（以吸光度OD值表示）為cut-off值的2～3倍上下的稀釋度血清為室內(nèi)質(zhì)控血清，過濾除菌并加入0.01%硫柳汞混勻，按50ul用量分裝后，-70℃冷凍保存。

1.4室內(nèi)質(zhì)控方法 ①繪制質(zhì)控圖：在常規(guī)條件下，連續(xù)檢測抗HSVⅡIgG型和IgM型自制血清20批次，得到20個S/CO值，計算平均值（x）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、變異系數(shù)（cv），以S/CO值為縱坐標(biāo)，以檢測批次日期為橫坐標(biāo)，繪制質(zhì)控圖，每次外部對照質(zhì)控血清的結(jié)果（S/CO）依次填入該質(zhì)控圖中；②自制質(zhì)控血清的精密度和穩(wěn)定性觀察：每次取自制50ul質(zhì)控血清與標(biāo)本同時測定抗HSVⅡIgG和IgM；持續(xù)檢測9個月后統(tǒng)計S/CO的x、SD、CV，并分析各月與第1個月的檢測結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)差異；③用三個不同批號試劑盒檢測室內(nèi)質(zhì)控血清，并持續(xù)9個月后統(tǒng)計S/CO的x、SD、CV，并分析本批質(zhì)控血清用不同批號試劑盒間檢測結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)差異。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。不同月份和不同批號試劑盒間質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性的比較采用均數(shù)的t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1抗HSVⅡIgM、IgG型弱陽性質(zhì)控血清檢測 自制抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清和康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清連續(xù)檢測20d的結(jié)果：自制血清吸光度值（S）均在CO值3倍左右，達(dá)到了外部質(zhì)控血清的要求，與康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清S值基本相似。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果如下（以x±s表示）：自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為（2.56±0.611），CV值11.95%；康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值（2.38±0.48），CV值為10.08%，兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值（3.57±0.98），CV值13.78%；康潤公司抗HSVⅡIgG型質(zhì)控血清S/CO值為（3.275±0.822），CV值為12.55%，兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學(xué)差異P>0.05。

2.2自制質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性觀察 每月檢測自制血清抗HSVⅡIgM、IgG型S/CO值的X、S、CV結(jié)果變化分別見表1；康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型結(jié)果表2。按照室內(nèi)質(zhì)控要求，以第1個月的結(jié)果（S/CO）為基準(zhǔn)，以后每月與第1個月的檢測結(jié)果比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。進(jìn)行16～20次/月檢測，持續(xù)檢測9個月，自制質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO的均值2.493，CV值為13.30%，每月的cv值均小于20%，沒有超出試劑盒規(guī)定的質(zhì)控范圍。

2.3三個不同試劑批號檢測抗HSVⅡIgM型精密度、穩(wěn)定性檢測結(jié)果 用三個不同批號的試劑盒檢測自制質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM，每個批號檢測20次，持續(xù)檢測3個月結(jié)果的CV值均<20%（表3），不同批號試劑盒檢測結(jié)果比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），表明本批自制質(zhì)控血清的精密度和穩(wěn)定性符合質(zhì)控要求。

3 討論

人體免疫系統(tǒng)對致病微生物可產(chǎn)生體液免疫或細(xì)胞免疫。在產(chǎn)生體液免疫時，在感染的窗口期后可以在血液中檢測到特異性抗體，HSVⅡIgM型抗體分子量大，出現(xiàn)早，一旦檢測結(jié)果為陽性，再結(jié)合臨床資料有不潔性接觸史或其他接觸途徑，盡管臨床檢查無癥狀或不明顯，可診斷為HSVⅡ早期感染的生殖器皰疹（GH）；當(dāng)HSVⅡIgG和IgM抗體均陽性時，此時臨床癥狀明顯，可明確診斷為生殖器皰疹（GH）；當(dāng)僅有HSVⅡIgG抗體陽性，可結(jié)合臨床資料是否有藥物治療史，可診斷為既往HSVⅡ感染的生殖器皰疹[1]。

可見血清抗體檢測在臨床診斷生殖器皰疹（GH）重要性，認(rèn)真進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制是保證檢測結(jié)果穩(wěn)定及可靠的要素之一；室內(nèi)質(zhì)控目的是控制實驗室每天檢測結(jié)果的可靠性，是實驗室管理的基本措施。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和試劑盒反映批間或批內(nèi)差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，而弱陽性對照最能反映檢測結(jié)果的差異，即能顯示半定量分析或定性分析上的假陰性結(jié)果或誤差[2]。盡管試劑盒中設(shè)有陰陽性對照，但從實際檢測中我們發(fā)現(xiàn)其陽性對照質(zhì)控的吸光度值是試劑盒CO值的10倍及以上，僅能說明試劑盒的有效性和可靠性。當(dāng)血清中抗體濃度較高時，檢測結(jié)果是符合臨床預(yù)期的；當(dāng)濃度在CO值左右時，如果不同時檢測外部弱陽性質(zhì)控血清，很容易忽視該檢測結(jié)果，一般報告陰性結(jié)果，形成漏診的可能性極大[3]。

所以我們采用健康人血清稀釋抗HSVⅡIgM、IgG型陽性血清制備弱陽性質(zhì)控血清，避免了用其他類稀釋劑稀釋陽性血清而必然存在的基質(zhì)效應(yīng)[4]。根據(jù)與外購康潤公司質(zhì)控血清檢測結(jié)果對比，自制弱血清質(zhì)控效果和穩(wěn)定性也符合國家對質(zhì)控物的要求，基層醫(yī)院檢驗科有能力制備，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

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[2]孔祥沙，季穎，張?，?，等.甲型肝炎病毒抗體室內(nèi)質(zhì)控血清制備及評價[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，36：1146-1147.

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[4]曹向紅，董玉林，徐敏，等. 酶聯(lián)免疫吸附試驗的干擾因素和對策[J].實用醫(yī)技雜志，2011，18：1321-1322.編輯/哈濤