血栓與止血檢驗(yàn)研究進(jìn)展

摘要：隨著科技的不斷發(fā)展，對于血栓和止血檢驗(yàn)研究已經(jīng)獲得了很大的突破。其中，這方面的研究主要有該疾病的學(xué)科、止血機(jī)制以及凝血機(jī)制等。實(shí)際上，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的用處是多種多樣的，比如可以指導(dǎo)抗凝治療患者如何用藥；可以評價(jià)易栓癥；可以診斷出某些出血性疾病；可以對彌散性血管內(nèi)凝血，又叫做DIC，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)診斷；可以預(yù)測血栓前狀態(tài)等。因此，開展血栓與止血檢驗(yàn)研究在臨床方面有著不可小覷的作用。筆者就自身的從醫(yī)經(jīng)驗(yàn)以及查閱相關(guān)資料，對血栓與止血檢驗(yàn)研究進(jìn)展情況進(jìn)行分析，希望能對相關(guān)研究起到參考作用。

關(guān)鍵詞：止血；實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)；血栓；研究

1 常用的幾種先進(jìn)的血栓與止血檢驗(yàn)方式

在目前的階段來說，我們通常有以下的一些方法對血栓與止血實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)：①是生物芯片技術(shù)；②是生物化學(xué)法，這一方法又被叫做產(chǎn)色底物法；③是免疫學(xué)法；④是分子生物學(xué)技術(shù)；⑤是生物學(xué)方法，這一方法也被叫做凝固法；⑥是流式細(xì)胞術(shù)，也被簡稱為FCM；⑦是生物傳感器技術(shù)；⑧是質(zhì)譜技術(shù)；⑨是干化學(xué)技術(shù)；⑩是物理學(xué)方法。我們可以通過以下的一覽表簡要了解這些檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)項(xiàng)目和用途，并詳細(xì)介紹了幾種檢測方法，見表1。

2 新的檢驗(yàn)技術(shù)的出現(xiàn)

2.1生物芯片技術(shù) 這一技術(shù)主要是把抗原和抗體、寡核苷酸、基因組DNA、cDNA以及肽固定在類如玻璃片、硅片等一些固相介質(zhì)之上，這樣就組合為生物分子點(diǎn)陣，等到生物芯片當(dāng)中的探針分子和測物里面的生物分子產(chǎn)生相互作用或者雜交作用時(shí)，再開展分析雜交信號的工作，選用儀器室共聚焦顯微掃描儀。我們的分類標(biāo)準(zhǔn)是按照生物芯片之上的分子種類進(jìn)行劃分，一類是蛋白芯片，它能夠檢測蛋白水平，另一類則是基因芯片，它則能夠檢測基因水平。

Almavi進(jìn)行了一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，即對數(shù)量為198例深靜脈血栓患者以及697例正常對照的5、10-甲基四氫葉酸還原酶，C677T、凝血酶原（PRT）G20210A和FV-Leiden突變對于深靜脈血栓患者發(fā)病中產(chǎn)生的作用通過生物芯片技術(shù)開展研究。所得出的結(jié)果是：相比于MTHFRC677T突變來說，PRT G 20210以及FV-Leiden G 1691 A對于深靜脈血栓患者來說屬于一種危險(xiǎn)性更加高的因素[1]。

本著讓生物芯片在臨床上發(fā)揮更大的作用，Abbott創(chuàng)造性地開展了一項(xiàng)檢測，即對數(shù)量為296例的靜脈血栓患者以及數(shù)量為163例的正常對照的PRTG 20210A突變借助于微粒子酶免疫分析（MEIA）開展監(jiān)測，所用儀器是LCx分析儀。所檢測出的結(jié)果和被這一行業(yè)認(rèn)可的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性長度片段多態(tài)性，也被叫做（PCR-RFLP）的結(jié)果是相吻合的。這也就說明了精準(zhǔn)、迅速、敏感已經(jīng)是LCx MEIA非常顯著的優(yōu)點(diǎn)。針對DVT比較常見的PRTG20210A、MTHFRC677T以及FV一LeidenG169lA，Erali等通過羅氏公司名叫LightcydeSNP分析儀的芯片以及另一公司，即Nanogen公司的電子芯片開展檢驗(yàn)，所測驗(yàn)的結(jié)果顯示出電子芯片具有以下幾項(xiàng)有點(diǎn)：如重復(fù)性以及精確性等。

2.2流式細(xì)胞術(shù)（FCM） 除了生物芯片技術(shù)，流式細(xì)胞術(shù)在血栓與止血性疾病方面的研究也是同樣不甘落后的，它的研究內(nèi)容主要有兩大方面，一方面是血管內(nèi)皮細(xì)胞，另一方面是血小板。值得一提的是，流式細(xì)胞術(shù)在這方面的研究熱點(diǎn)也有兩大方面，分別是血小板的功能和血小板的結(jié)構(gòu)。隨著血小板的研究獲得的更大發(fā)展以及單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)獲得的進(jìn)一步發(fā)展，使得流式細(xì)胞術(shù)在血小板的研究方面越來越廣泛[2]。以前流式細(xì)胞術(shù)只用于血栓和止血性疾病的科研型研究，現(xiàn)在這種研究已經(jīng)臨床應(yīng)用研究。時(shí)至今日，血栓和止血性疾病中應(yīng)用了許多新的參數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)診斷，比如說這對于GPnb/Illa位點(diǎn)定量分析，再如血小板微顆粒（PMP）等。

3 血栓與止血檢驗(yàn)研究的發(fā)展情況

3.1血凝分析儀呈現(xiàn)新的發(fā)展趨勢 老的方法大多數(shù)是通過手工操作開展血栓與止血檢驗(yàn)的，這種方法有著較多的缺陷，已經(jīng)逐漸退出人們的視線。在現(xiàn)在，血凝分析儀成為了這方面的新寵。我國先后引進(jìn)了數(shù)量眾多的技術(shù)領(lǐng)先的血栓與止血檢驗(yàn)儀器，所引進(jìn)的儀器有著簡便、精確的優(yōu)點(diǎn)，很好地適應(yīng)了臨床治療的需求，對于我國的血栓與止血檢驗(yàn)研究有著非常大的幫助作用。

血凝分析儀有下述幾個(gè)發(fā)展特點(diǎn)：首先是趨于全自動(dòng)化方向發(fā)展。凝血分析工作站系統(tǒng)：這一套系統(tǒng)主要由以下幾方面儀器組成：①是MDA180全自動(dòng)凝血分析儀；②是離心器；③則是移動(dòng)式機(jī)器人。這種發(fā)展趨勢能夠大大節(jié)省檢驗(yàn)的人力物力，還能提高效率和準(zhǔn)確性。

其次是趨于多功能化方向發(fā)展。在現(xiàn)代，很多的血凝分析儀都已經(jīng)可以通過不同原理的方式同時(shí)開展分析，比如說可以在開展檢測的時(shí)候同時(shí)運(yùn)用如下的方法方法進(jìn)行檢測：如免疫學(xué)、干化學(xué)、生物學(xué)、超聲分析以及物理化學(xué)等。

再次是趨于自動(dòng)化方向發(fā)展?，F(xiàn)在的血凝分析儀已經(jīng)能夠自動(dòng)化處理一系列動(dòng)作，不管是標(biāo)本的前處理，還是分析檢測檢測結(jié)果，亦或是完成檢測之后對標(biāo)本進(jìn)行自動(dòng)拆卸，或者是對儀器進(jìn)行清理，都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。

最后是趨于智能化方向發(fā)展。自動(dòng)血凝分析儀不僅能夠同時(shí)檢測各個(gè)不同的項(xiàng)目，還可以對這些項(xiàng)目開展任意的組合，這就使得標(biāo)本的隨時(shí)插入成為現(xiàn)實(shí)，檢測也變得更加簡便。除此之外，儀器當(dāng)中還含有質(zhì)量控制系統(tǒng)，這能夠提升檢測結(jié)果的精確度。

3.2血栓與止血檢驗(yàn)臨床應(yīng)用有新特點(diǎn) 就現(xiàn)在來說，我們可以總結(jié)出血栓與止血檢驗(yàn)臨床應(yīng)用有著以下幾方面的特點(diǎn)。

首先是新的參數(shù)以及致病基因正在陸續(xù)地涌現(xiàn)出來。Hamilton等曾經(jīng)進(jìn)行過研究，發(fā)現(xiàn)若是血小板中沒有足夠的蛋白酶激活受體4的話，則會造成出血時(shí)間延長的后果，除此之外還會血栓的形成產(chǎn)生阻礙作用。造成這種狀況主要有以下幾方面的原因：①蛋白酶激活受體4的作用是在血小板中對它本身和凝血酶的信號傳導(dǎo)進(jìn)行介導(dǎo)，若是蛋白酶激活受體4含量不足，那么血小板將不再會對凝血酶做出應(yīng)答反應(yīng)；②蛋白酶激活受體4還有另外一個(gè)作用，那就是其還是血管細(xì)胞壁對于凝血酶反映的信號進(jìn)行傳導(dǎo)的時(shí)候參與其中，這個(gè)過程使得止血以及血栓都會受其影響。

其次是傳統(tǒng)參數(shù)有了新的參考意義。我們知道，血小板檢測有很多項(xiàng)數(shù)據(jù)，其中的一項(xiàng)重要的傳統(tǒng)參數(shù)就是平均血小板體積，也稱MPV。這一數(shù)據(jù)的作用是對平均血小板體積的大小做出反應(yīng)。在近段時(shí)間，有很多的研究表明平均血小板體積心腦血管疾病有著非常緊密的聯(lián)系。研究結(jié)果顯示：平均血小板體積能夠作為心肌梗死這一疾病的獨(dú)立的預(yù)測標(biāo)志物，心肌梗死患者的平均血小板體積要比正常人的值要高出比較多的數(shù)值（P<0.001）（OR=2.6，95%CI1.3～5.1）；除此之外，研究者還選取了新西蘭、澳大利亞等10個(gè)國家的3000多名人員隨機(jī)進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①腦血管疾?。X卒中）患者的平均血小板體積相比于要比正常人的值要高出相當(dāng)多的數(shù)值（P<0.001）（OR=2.6，95%Cl1.3～4.1）；②腦血管患者的平均血小板體積大幅度升高和其本身預(yù)后較差有著很大的關(guān)系。因此，平均血小板體積能夠作為腦卒中這一疾病的獨(dú)立的預(yù)測標(biāo)志物。

3.3對尚不成熟的技術(shù)提出質(zhì)疑 曾經(jīng)有研究人員聯(lián)合了意大利、美國等多個(gè)國家以及很多的中心評估了血小板功能分析儀（PFA-100）所具有的實(shí)際臨床應(yīng)用價(jià)值。這項(xiàng)研究結(jié)果顯示：血小板功能分析儀固然能夠?qū)σ徊糠值难“寮膊〉漠惓＝Y(jié)果做出顯示，它同樣能夠?qū)ρ“宓暮Y查具備相當(dāng)程度的特異度以及靈敏度。然而，血小板分析儀阻塞時(shí)間作用在治療檢測血小板疾病之上，目前還沒有確切的結(jié)論。研究人員所得出的結(jié)論為：血小板分析儀阻塞時(shí)間可以有選擇性地作為評估血小板功能以及血小板疾病的參考數(shù)據(jù)，這一數(shù)據(jù)能不能產(chǎn)生治療血小板疾病中對血小板進(jìn)行檢測的作用，這到目前還不能得出確切的結(jié)論。

4 結(jié)論

綜上所述，我們可以清楚地看到血栓與止血檢驗(yàn)研究獲得了很大的進(jìn)步，在臨床應(yīng)用上也有了新的突破，特別是檢測技術(shù)和方法越來越先進(jìn)，檢驗(yàn)項(xiàng)目也趨于多樣化，甚至檢驗(yàn)過程也逐漸向簡易化、自動(dòng)化方向發(fā)展?？偠灾?，這方面的檢驗(yàn)水平分子化趨勢越來越明顯，伴隨此變化的還有臨床應(yīng)用的系統(tǒng)化以及定量化，這些進(jìn)步受到世人關(guān)注[3]。然而，我們也必須要面對一個(gè)問題，那就是在血栓和止血檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)化方面還存在著一些明顯的問題，比如說儀器不同，但是所檢測的項(xiàng)目相同，那么所檢測出的不同結(jié)果進(jìn)行對比，也會存在一定的問題。這個(gè)問題還需要相關(guān)的人員進(jìn)行進(jìn)一步研究解決。

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編輯/哈濤