脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

目前心腦血管疾病是造成人類死亡的主要疾病。預(yù)防、檢測(cè)和治療心腦血管疾病一直是全世界醫(yī)學(xué)工作者努力不懈的目標(biāo)。而心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)就是動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化是一種炎性反應(yīng)性疾病，炎性細(xì)胞及其釋放的產(chǎn)物已經(jīng)被認(rèn)為是最主要的促動(dòng)脈粥樣硬化的因素，故在粥樣斑塊形成、進(jìn)展和最終破裂的過(guò)程中均有炎性反應(yīng)介質(zhì)的參與。目前，動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)指標(biāo)有很多種，包括各種血液生化，包括脂類，心肌酶譜，CRP，Lp-PLA2等，而國(guó)際上已經(jīng)把脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）作為一種新的炎性反應(yīng)標(biāo)志物。

1 Lp-PLA2 分子結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性 Lp-PLA2被發(fā)現(xiàn)于1980年，是一種非鈣離子依賴性磷脂酶[1]。Lp-PLA2由PLA2G7基因編碼，又被稱為血小板活化因子乙酰水解酶（platelet activating factor-AH，PAF-AH），是一種非鈣離子依賴性磷脂酶[2]。盡管相對(duì)于其他磷脂酶它表現(xiàn)出不同的特性，但它仍然屬于磷脂酶家族一員，Lp-PLA2具體作用于PAF或其他氧化脂肪酸殘基而其它磷脂酶則具體作用于具有兩個(gè)長(zhǎng)鏈?；牧字琜3]。盡管其在細(xì)胞內(nèi)外表現(xiàn)為常見(jiàn)類型，但它具有多種不同亞型。細(xì)胞內(nèi)Lp-PLA2具有兩種類型，I型 和II型，而腦組織則表達(dá)為另一種亞型：Lp-PLA2-Ib [4]。Lp-PLA2II型由含有40k堿基的多肽鏈組成，它和抗氧化性相關(guān)[5]。細(xì)胞外Lp-PLA2存在于血漿當(dāng)中，絕大多數(shù)結(jié)合在LDL上（80%～85%），很少結(jié)合在HDL上（15%～20%），其活性與膽固醇濃度相關(guān)[6，7]?，F(xiàn)在已經(jīng)從人血漿，紅細(xì)胞，牛腦，肝和精漿，豚鼠腹膜透析液和血漿，小鼠血漿和血小板，培養(yǎng)的大鼠枯否細(xì)胞和肝細(xì)胞中提取出Lp-PLA2，并受炎性介質(zhì)的調(diào)節(jié)，如γ干擾素和脂多糖抑制其分泌，血小板活化因子（platelet-activating factor，PAF）促進(jìn)其分泌[8-10]。

2 Lp-PLA2的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2.1檢測(cè)方法 2010年美國(guó)一家公司首先推出ELISA試劑盒，其原理是：已知Lp-PLA2濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Lp-PLA2和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Lp-PLA2的濃度呈比例關(guān)系。此方法敏感度：1.0ug/L，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。而諾爾曼公司最近又推出了一種新的檢測(cè)方法，免疫增強(qiáng)比濁法其檢測(cè)原理是樣本中的LP-PLA2在磷酸鹽緩沖系統(tǒng)中與試劑中鼠抗人LP-PLA2 單克隆抗體的致敏乳膠顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，在促聚劑聚乙二醇作用下產(chǎn)生凝集以使?jié)岫壬仙?，?46 nm 波長(zhǎng)檢測(cè)反應(yīng)液吸光度的變化，其變化程度與樣本中的LP-PLA2含量成正比。此方法靈敏度：在546nm處，光徑1cm時(shí)，當(dāng)樣本中LP-PLA2含量在116nm時(shí)5min內(nèi)的吸光度變化為：0.010-0.055。變異系數(shù)小于8%.

2.2參考值范圍 研究顯示，研究對(duì)Lp-PLA2水平的影響很小。尚未見(jiàn)不同種族人群Lp-PLA2水平及其差異的報(bào)到。諾爾曼公司給出的血清，血漿，全血的參考范圍均是<175ng/ml。

3 Lp-PLA2與臨床疾病的關(guān)系

3.1 Lp-PLA2與AS Lp-PLA2是一種與突發(fā)心血管事件相關(guān)的新穎標(biāo)志物，Lp-PLA2的生物學(xué)特性已得到廣泛研究.它被描述為血小板激活因子乙酰水解酶（PAF-AH），由于Lp-PLA2能水解PAF，而PAF是一種炎癥因子，所以過(guò)去曾被認(rèn)為具有抗動(dòng)脈粥樣硬化效應(yīng)[11，12]。但現(xiàn)在研究認(rèn)為其能促進(jìn)AS的形成，在人體中Lp-PLA2主要與低密度脂蛋白膽固醇顆粒（LDL-C）相結(jié)合，其在LDL-C氧化前，一直處于無(wú)活性狀態(tài)，LDL-C氧化后，Lp-PLA2立即將氧化型磷脂酰膽堿分解為溶血型磷脂酰膽堿和氧化型游離脂肪酸這兩種生物活性化合物后二者是強(qiáng)烈的致炎因子，它們可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化，引發(fā)單核細(xì)胞聚集，巨噬細(xì)胞增殖，平滑肌增生，內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)升高以及內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂[13-16]。正因如此，Lp-PLA2被認(rèn)為可直接導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。Kolodgie等[17]研究表明Lp-PLA2明顯表達(dá)于受損或破裂粥樣斑塊壞死中心或周圍的巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)AS的形成。

3.2幾種冠心病預(yù)測(cè)因子之間的相互關(guān)系 Lp-PLA2，CRP，纖維蛋白原和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均被評(píng)估為冠心病事件的風(fēng)險(xiǎn)因子，CRP水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)和纖維蛋白原水平顯著相關(guān)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和纖維蛋白原水平之間也顯示強(qiáng)正相關(guān)性。與CRP顯著相關(guān)的其它風(fēng)險(xiǎn)因子包括：年齡，收縮壓，血漿甘油三酯，LDL，HDL。白細(xì)胞計(jì)數(shù)與血漿甘油三脂正相關(guān)，與HDL負(fù)相關(guān)。在吸煙者中CRP，纖維蛋白原和白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高。Lp-PLA2與纖維蛋白原呈弱正相關(guān)，與CRP，白細(xì)胞計(jì)數(shù)基本無(wú)關(guān)。此外Lp-PLA2不受患者吸煙狀況影響。

4 結(jié)語(yǔ)

Lp-PLA2是一種血管特異性炎癥酶，其與臨床疾病的關(guān)系倍受關(guān)注，與其他炎性因子如CRP等相比，其優(yōu)點(diǎn)是與其他危險(xiǎn)因素的相關(guān)性非常小，Lp-PLA2與CRP二者相聯(lián)合可以更好地預(yù)測(cè)心腦血管事件的血清學(xué)指標(biāo)，對(duì)Lp-PLA2水平的檢測(cè)可以識(shí)別心腦血管病高危個(gè)體。此外由于各試劑公司的檢測(cè)方法，參考值不同，因而Lp-PLA2檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化，確定診斷不同病因的心血管疾病的最佳臨界值也是今后應(yīng)予解決的課題。

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編輯/哈濤