EGFR、HER2在胃癌中的狀態(tài)及臨床意義研究

摘要：目的 探討胃癌中EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)分子EGFR、HER2的表達(dá)情況及二者之間的相互關(guān)系，研究免疫組織化學(xué)方法（IHC）檢測(cè)胃癌HER2蛋白表達(dá)和熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測(cè)HER2基因狀態(tài)的一致性。方法 隨機(jī)選取胃腺癌根治術(shù)后的切除標(biāo)本58例和15例癌旁正常腺上皮組織，應(yīng)用IHC法檢測(cè)EGFR的表達(dá)；IHC法及FISH法分別檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)和HER2基因狀態(tài)，并進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 EGFR在胃癌的表達(dá)明顯高于癌旁正常腺上皮（46.5%vs13.3%，P<0.05），HER2在胃癌表達(dá)率為24.1%，正常腺上皮不表達(dá)；EGFR與腫瘤浸潤(rùn)深度、脈管累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，HER2與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度正相關(guān)；HER2蛋白為陽(yáng)性的患者中，HER2基因擴(kuò)增符合率為71.4%（10/14）；HER2蛋白為陰性的患者中，HER2基因非擴(kuò)增符合率為100%。兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 EGFR、HER2在胃癌中表達(dá)可能與其發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并有可能成為靶向治療的靶點(diǎn)。IHC檢測(cè)HER2蛋白與FISH檢測(cè)HER2基因結(jié)果一致性較高。

關(guān)鍵詞：胃癌；免疫組化；熒光原位雜交

中圖分類號(hào)：R735.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

分子靶向治療是近年來(lái)在治療血液系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體瘤中涌現(xiàn)出的新治療手段。隨著對(duì)胃癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中分子生物學(xué)機(jī)制的研究，這種治療手段也逐步應(yīng)用于胃癌治療的臨床實(shí)踐[1]。

EGFR、HER2屬于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體成員，是EGFR受體信號(hào)通路中的中的相關(guān)分子，研究顯示它們位于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐位置，成為有效的靶點(diǎn)[2]。本研究同時(shí)觀察EGFR和HER2在胃癌中的表達(dá)，分析其臨床意義，為胃癌的靶向治療提供進(jìn)一步的依據(jù)。

目前國(guó)際公認(rèn)的用于檢測(cè)HER2的方法有兩種：免疫組化法（IHC）和熒光原位雜交技術(shù)（FISH）。免疫組化法是目前臨床上常用的檢測(cè)HER2受體蛋白表達(dá)的方法，它針對(duì)HER2的特異性抗體來(lái)檢測(cè)細(xì)胞表面HER2的表達(dá)情況。FISH用于檢查17號(hào)染色體著絲粒和HER2基因擴(kuò)增情況[3]。不少研究結(jié)果認(rèn)為FISH的敏感性和特異性較高，應(yīng)作為一線檢測(cè)方法。然而，IHC操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉，適于初篩，但多數(shù)IHC檢測(cè)方法并未最佳化，而且蛋白表達(dá)與基因擴(kuò)增兩者本應(yīng)具有一致性。本研究比較了FISH和IHC兩種方法的一致性，尋找兩者的最佳結(jié)合方式。

1資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取2010～2012年在我院胃遠(yuǎn)端腺癌根治術(shù)后的切除標(biāo)本58例，所有患者術(shù)前未進(jìn)行任何放療、化療或其他抗癌治療。隨機(jī)選擇15例距腫瘤組織至少5 cm的正常組織標(biāo)本作為對(duì)照。

1.2試劑 EGFR、HER2單克隆抗體、免疫組化MaxVisionTM試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。HER2 DNA探針試劑盒購(gòu)自Vysis PathVysion公司，內(nèi)含GLP HER2/CSP17（CSP17為對(duì)照）探針。

1.3方法 IHC法：采用EnVision二步法，均以公司提供的已知標(biāo)本為陽(yáng)性對(duì)照，以0.01 mol/L PBS代替一抗作陰性對(duì)照。FISH法：標(biāo)本預(yù)處理、雜交儀變性雜交、復(fù)染等操作程序嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4結(jié)果判定 IHC結(jié)果判斷 以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。按Hercep Test參考評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4]：0 完全陰性，1+ 超過(guò)10%的癌細(xì)胞胞膜染色，2+ 超過(guò)10%的癌細(xì)胞胞膜弱到中度陽(yáng)性，3+超過(guò)10%的癌細(xì)胞胞膜強(qiáng)陽(yáng)性；0～1+判為陰性；2+為弱陽(yáng)性，3+為強(qiáng)陽(yáng)性。FISH結(jié)果判斷 選擇細(xì)胞核大小一致，胞核邊界完整、染色均一、細(xì)胞核無(wú)重疊、綠色CSP17信號(hào)清晰的細(xì)胞，隨機(jī)計(jì)數(shù)至少20個(gè)癌細(xì)胞核中雙色信號(hào)。判讀標(biāo)準(zhǔn)[5]：紅色信號(hào)總數(shù)與綠色信號(hào)總數(shù)比值<1.8提示無(wú)擴(kuò)增；比值>2.2提示HER2基因擴(kuò)增；若比值位于1.8～2.2，則需再計(jì)算20個(gè)細(xì)胞核中的信號(hào)或由另外一個(gè)分析者重新計(jì)數(shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：χ2檢驗(yàn)比較差異性， Kappa檢驗(yàn)評(píng)價(jià)IHC和FISH的一致性。

2結(jié)果

2.1 EGFR、HER2蛋白在胃癌組織中的表達(dá) EGFR及HER2均表達(dá)于胃癌的細(xì)胞膜，陽(yáng)性表達(dá)率分別為46.5%（27/58）、24.1%（14/58）；EGFR在胃的陽(yáng)性率顯著高于正常胃粘膜，兩組間表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；HER2在正常黏膜不表達(dá)。

2.2 EGFR、HER2表達(dá)與胃癌患者臨床各病理特征間的關(guān)系 EGFR與患者年齡、性別、腫瘤分化無(wú)關(guān)，與腫瘤浸潤(rùn)深度、脈管累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；HER2與年齡、性別、脈管累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，與腫瘤分化、浸潤(rùn)深度有關(guān)，見(jiàn)表1。

2.3 IHC與FISH檢測(cè)結(jié)果的符合情況 IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)（0）39例標(biāo)本中，基因0例擴(kuò)增；HER2表達(dá)（+）5例標(biāo)本中；0例擴(kuò)增；HER2表達(dá)（++）6例標(biāo)本中，3例擴(kuò)增（50%）；HER2表達(dá)（+++）8例標(biāo)本中，7例擴(kuò)增。HER2蛋白表達(dá)為（0-+）和（+++）時(shí)，基因擴(kuò)增符合率分別為100%（39/39）、100%（5/5） 和87.5%（7/8），IHC和FISH兩種方法檢測(cè)結(jié)果總符合率為93.1%（54/58），兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果經(jīng)χ2檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Kappa檢驗(yàn)，κ=0.99，一致性相當(dāng)好？

3討論

本研究顯EGFR在胃癌中的表達(dá)率為46.5%，與Lieto E報(bào)道的結(jié)果一 致[6]，并與腫瘤浸潤(rùn)深度、脈管累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示EGFR促進(jìn)腫瘤的形成、發(fā)展，并參與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程。因此，采用有效的靶向藥物抑制EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路將可以抑制胃癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。目前，在肺癌、肝癌、大腸癌等惡性腫瘤中已廣泛應(yīng)用針對(duì)EGFR的靶向治療的藥物。

HER2的過(guò)表達(dá)常常預(yù)示腫瘤患者預(yù)后不良[7]。相關(guān)研究提示胃癌組織中HER2的陽(yáng)性表達(dá)率為38.9%，同樣與胃癌細(xì)胞的分化程度，腫瘤病灶的侵襲和其它部位的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8]。說(shuō)明HER2同樣可以促進(jìn)胃癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，是胃癌預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)[9]。張杰等人通過(guò)對(duì)123例胃癌組織的研究認(rèn)為HER2基因擴(kuò)增或過(guò)表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后有明顯關(guān)系，特別是有該基因擴(kuò)增的患者，其術(shù)后死亡率高生存期短預(yù)后差[10]。本研究顯示HER2表達(dá)隨腫瘤分化越高表達(dá)越強(qiáng)，還顯示HER2陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的侵襲有關(guān)，和文獻(xiàn)基本一致。

關(guān)于在胃癌組織中FISH與IHC方法檢測(cè)HER2基因狀態(tài)的對(duì)比的大樣本實(shí)驗(yàn)還比較少。Yano等[11]研究了200例手術(shù)切除標(biāo)本，認(rèn)為兩者符合率86.7%。Hofmann等分析了168個(gè)病例，IHC與FISH的一致性達(dá)93.5%。國(guó)內(nèi)宋巖等[12]報(bào)道HER2蛋白過(guò)表達(dá)的病例中76%存在基因擴(kuò)增？本研究結(jié)果顯示：兩種方法統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異，當(dāng)IHC結(jié)果為陰性（0/+）和（+++），F(xiàn)ISH檢測(cè)HER2基因非擴(kuò)增和擴(kuò)增時(shí)二者的一致性較好，IHC能夠作為HER2狀態(tài)初步篩查的方法；當(dāng)IHC為（++）時(shí)，一致性有差別，這可能與本實(shí)驗(yàn)食管鱗癌IHC、FISH檢測(cè)的HER2陽(yáng)性率較低有關(guān)。兩種方法檢測(cè)果的差異，主要原因有組織固定和操作過(guò)程的不同、市面所售的抗體敏感性和特異性不同及觀察者間的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的不同等？

本研究結(jié)果表明EGFR、HER2在胃癌中有較高的陽(yáng)性表達(dá)率，為分子靶向藥物在胃癌綜合治療中的運(yùn)用提供了理論依據(jù)。目前針對(duì)胃癌以EGFR、HER2作為治療靶點(diǎn)的分子靶向治療研究尚不成熟和完善，需要大量的臨床試驗(yàn)以確定療效。相信不久的將來(lái)，有更多的患者可以因此受益。

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編輯/肖慧