DC—CIK治療晚期惡性腫瘤的研究

摘要：目的 分析DC-CIK細胞治療晚期惡性腫瘤的臨床意義。方法 對我院治療的50例Ⅲ、Ⅳ期惡性腫瘤患者化放療后1個月行DC-CIK細胞治療患者資料進行回顧性分析，對接受DC-CIK治療4周期前后患者的癥狀、腫瘤負荷及T細胞亞群結果進行隨訪觀察，評價治療有效率。結果 DC-CIK治療前后腫瘤客觀緩解率（ORR）為23.8%，CD3、CD4、CD8、CD16、CD56均有明顯的升高，生活質量評分顯著改善，僅少數(shù)患者輸注過程中出現(xiàn)發(fā)熱，未見其他不良反應。結論 采用DC-CIK細胞治療晚期惡性腫瘤患者能改善患者免疫功能，改善患者生活治療，延長生存期，具有一定的臨床使用價值。

關鍵詞：晚期惡性腫瘤；DC-CIK；過繼免疫治療

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2012年9月～2013年10月在我院行放化療治療后1個月的晚期惡性腫瘤患者，Karnofsky評分>60分。

1.2 DC-CIK細胞制備與治療

1.2.1 CIK細胞的制備 采集PBMC，經人淋巴細胞分離液密度梯度分離（2 000 r/min，離心20 min）。取白膜層細胞， 以生理鹽水洗滌3次，懸浮于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，調整細胞濃度為2×106/mL，第0 d加入IFN-γ 1000 U/mL，37℃5%CO 孵箱中培養(yǎng)。24 h后加入鼠抗人CD3單克隆抗體50 ng/mL、IL-1 100 U/mL、IL-2 500 U/mL，繼續(xù)培養(yǎng)。每3 d半量換液，補足細胞因子。

1.2.2 DC細胞的制備 在1.2.1獲得的貼壁的單個核細胞中加入含GM-CSF 1000 U/mL、rhIL-4 1000 U/mL的AIM2V培養(yǎng)基，在37℃、體積分數(shù)為5% 的CO2中培養(yǎng)，換液1次/3 d。第3 d將腫瘤抗原加入DC培養(yǎng)液內，第5 d加入腫瘤壞死因子2α（TNF2α）1000 U/rnl，共培養(yǎng)7～10 d。DC細胞皮下注射地1、3、5、7 d，CIK細胞回輸?shù)?、7 d。DC-CIK細胞治療4周期，1次/月。

1.3 T細胞亞群分析 空腹取5 mL靜脈血抗凝，利用流式細胞儀進行T細胞亞群檢測。

1.4 隨訪 所有入組病例全部隨訪，至2013年10月，隨訪6～12個月，中位隨訪10個月。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準誤（x±s）表示，比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗；生存資料分析采用Kaplan-Meier法及Log rank檢驗。檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1 DC-CIK細胞治療前后免疫指標的變化 患者治療前外周血CD3、CD4、CD8 等免疫指標均明顯降低，顯示晚期惡性腫瘤患者存在著嚴重細胞免疫功能缺陷。經DC-CIK治療后上述指標數(shù)值顯著提高（P<0.05），見表1。

2.2治療后實體瘤療效評價 50例患者均可評價療效。其中1例 CR（腎癌患者），9例PR （非小細胞肺癌4例，乳腺癌2例，胃癌1例，結腸癌1例，鼻咽癌1例），35例SD，5例PD （肝癌3例，小細胞肺癌1例，胰腺癌1例），ORR為20.0%。

2.3不良反應情況 絕大部分患者輸注DC-CIK過程中無明顯不良反應，僅5例出現(xiàn)一過性發(fā)熱，體溫最高為38.8℃，經處理后很快緩解，未影響治療。

2.4癥狀改善情況 研究組平均提高17分，其中改善30例，穩(wěn)定15例，進展5例。生物治療后kamofsky評分總提高率分別為90.0%。

3討論

細胞因子誘導的殺傷細胞是繼淋巴因子激活的殺傷細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞后的新型細胞，其增殖能力和殺傷活性顯著高于LAK細胞，主要效應細胞是CD3+CD56+細胞，是一種安全的輔助治療手段[1]。

DC作為體內功能強大的專職抗原遞呈細胞，在細胞毒性T細胞的活化過程中發(fā)揮著重要的作用[2]。CIK細胞和DC聯(lián)合應用，不僅可增強免疫效應細胞的抗腫瘤活性，還可以使效應細胞對腫瘤靶細胞的殺傷更具特異性。

體外及動物研究證實CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對正常骨髓造血前體細胞毒性小等多種優(yōu)勢。單獨應用CIK等免疫效應細胞進行過繼免疫治療時，部分患者的治療效果不太理想，這可能與腫瘤患者功能性DC細胞缺乏有關。DC作為體內功能最強大的抗原遞呈細胞，能誘導出抗原特異性細胞毒T淋巴細胞反應（Cytotoxic T lymphocyte，C，IIJ），在人抗腫瘤免疫的治療中發(fā)揮了重要的作用。將CIK細胞和DC細胞聯(lián)合起來治療惡性腫瘤，將有助于解除部分腫瘤患者T細胞的免疫無能，從而最大程度發(fā)揮其協(xié)同抗腫瘤作用[3-4]。

術后輔助化療后，體內化療敏感的殘存腫瘤細胞大部分得到清除，但化療會在一定程度上造成機體免疫功能的低下，因此化療結束后是免疫治療的較好時機。術后化療后進行CIK細胞治療可改善患者免疫功能，延長患者生存期。

晚期惡性腫瘤患者由于機體一般狀態(tài)差，KPS評分低，無法耐受手術、放療、化療等治療手段，而單純的姑息治療效果又不理想，因此尋找更有效、安全的治療手段成為目前研究關注的焦點。在眾多的治療手段中，生物治療憑借其獨特的作用逐漸發(fā)展成為腫瘤綜合治療的第四大模式，作為手術、放療、化療的有益補充。在這其中以DC-CIK細胞治療最具代表性，臨床應用也最廣泛。本研究中90%晚期惡性腫瘤患者經DC-CIK治療后生活質量明顯改善，生存期延長。

綜上所述：DC-CIK治療作為一種新的抗腫瘤方法，有一定的應用前景和推廣價值，值得進行更廣泛的臨床研究。

參考文獻：

[1]Schmidt-Wolf IG，Lefterova P，Mehta BA，et al.Phenotypic characterization and identification of effector cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer cells[J]. Exp Hematol，1993，21（13）：1673-1679.

[2]Avigan D.Dendritic cells： development，function and potention use for cancer immunotherapy[J].Blood Rev，1999，13：51-64.

[3]Scheffold C， Brandt K， Johnston V， et al.Potential of autologous immunologic effector cells for bone marrow purging in patients with chronic myeloid leukemia[J].Bone Marrow Transplant，1995，15（1）：33-39.

[4]Verneris MR，Kornacker M，Mailander V et al.Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fas-mediated apoptosis[J].Cancer Immunol Immunother，2000，49（6）：335-345.

編輯/肖慧