乳鐵蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)方式分析

摘要：目的 探討宮頸癌組織中乳鐵蛋白（LF）基因及蛋白的表達(dá)情況。 方法 采用免疫組化法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分別對(duì)40例子宮頸癌組織與20例正常宮頸組織中的LF蛋白和基因進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比分析LF蛋白及基因在兩種組織中的表達(dá)情況差異。結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示乳鐵蛋白主要定位于細(xì)胞漿，在宮頸癌組織中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為：15.1±0.2，明顯低于正常宮頸組織陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：59.3±0.5，兩者比較P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示乳鐵蛋白基因在宮頸癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為：0.003±0.001，明顯低于正常宮頸組織中乳鐵蛋白基因的表達(dá)量：0.105±0.032，兩者比較P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 乳鐵蛋白基因及蛋白表達(dá)情況在宮頸癌組織中及正常宮頸組織中存在顯著差異。

關(guān)鍵詞：乳鐵蛋白；宮頸癌

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。隨著人們對(duì)健康重視度的提高以及宮頸癌飾查的逐漸普及，對(duì)于宮頸癌的早期診斷和治療有了很大的進(jìn)步。找到一種新型的檢測(cè)宮頸癌的標(biāo)志對(duì)于提高宮頸癌檢測(cè)顯得很有意義。乳鐵蛋白是一種具有廣譜抗菌，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的蛋白[2]。我們的研究正是通過(guò)研究40例子宮頸癌組織與20例正常宮頸組織中的LF蛋白和基因的表達(dá)情況，來(lái)探尋宮頸癌組織中乳鐵蛋白（LF）基因及蛋白的表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取40例已經(jīng)確診宮頸癌患者的宮頸組織，以及20例正常婦女宮頸組織。其中40例宮頸癌患者的病理分期均為2期，病理分型均為中分化。

1.2 方法

1.2.1免疫組織化學(xué)檢測(cè)LF蛋白在組織中表達(dá)情況 將各組織切片按常規(guī)制作成為石蠟切片然后依次脫蠟，抗原修復(fù)，消除組織中粒細(xì)胞等存在的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，然后使用小牛血清封閉。加入按1：100稀釋的LF一抗150μl，在4℃過(guò)夜，第2d上午用PBS沖洗3次，10min/次，隨后每張切片加入150μl羊抗兔二抗（工作濃度為1：300），室溫濕盒中放置120 min。洗滌3次后加入ABC試劑，孵育120min，然后再次在PBS中洗滌3次，用DAB顯色。鏡下觀察顯色結(jié)果并控制顯色吋間，陽(yáng)性部位出現(xiàn)現(xiàn)特異性顯色而背景無(wú)著色時(shí)，以PBS沖洗中止顯色反應(yīng)。然后使用蘇木素復(fù)染，最后脫水封片鏡下觀察。

1.2.2實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)LF表達(dá)情況 首先設(shè)計(jì)出LF所需引物序列，并由上海生工生物公司合成。然后提取待檢組織中總的RNA，并使用分光光度計(jì)檢測(cè)所提取RNA純度。然后合成cDNA，并利用PCR系統(tǒng)，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR最后進(jìn)行PCR結(jié)果分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包，對(duì)各組數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用（x±s）來(lái)表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1在正常組織及宮頸癌組織中乳鐵蛋白的表達(dá)情況 宮頸癌組經(jīng)過(guò)免疫組化染色后出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為15.1±0.2，正常宮頸組經(jīng)過(guò)免疫組化染色后出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為59.3±0.5。兩組標(biāo)本陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)存在顯著差異（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2在正常組織及宮頸癌組織中乳鐵蛋白基因的表達(dá)情況 宮頸癌組標(biāo)本經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)后得到結(jié)果發(fā)現(xiàn)LF mRNA為0.003±0.001，正常宮頸組標(biāo)本經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)后得到結(jié)果發(fā)現(xiàn)LF mRNA為0.105±0.032。兩組標(biāo)本陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)存在顯著差異（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

宮頸癌是一種常見(jiàn)的婦科腫瘤嚴(yán)重影響廣大婦女健康，其發(fā)生于高危型HPV感染相關(guān)性較高[3]。隨著社會(huì)發(fā)展，及人們對(duì)于健康的重視度加強(qiáng)，人們進(jìn)行體檢的次數(shù)越來(lái)越多，如何找到一種簡(jiǎn)單迅速而又特異性高的檢測(cè)方法顯得尤為重要。乳鐵蛋白LF是一種多功能蛋白，是一種產(chǎn)生于胞漿中的蛋白，它不僅參與鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)，還調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，并具有廣譜抗菌的效果[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道[5]LF蛋白對(duì)于多種病毒有抑制其復(fù)制抗炎癥的作用，并且LF蛋白還在多種腫瘤組織中表達(dá)明顯減低。不僅如此，還有文獻(xiàn)報(bào)道LF蛋白具有抑制腫瘤細(xì)胞分裂的作用。而我們的研究也再次證明LF蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)水平也相對(duì)于正常組織有差異。但是我們的研究沒(méi)有分析不同病理分型，臨床分期的宮頸癌組織中LF的表達(dá)水平。我們希望在接下來(lái)的研究中繼續(xù)上述課題。

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編輯/許言