唾液酸酶法與常規(guī)鏡檢法的臨床應(yīng)用比較

摘要：目的 通過唾液酸酶檢測法和白帶常規(guī)鏡檢法的結(jié)果進(jìn)行對比分析，探討唾液酸酶法在細(xì)菌性陰道病（BV）中的診斷價值，為臨床快速診斷BV提供可靠的方法。方法 將480例患者按年齡分為四組（<30歲、31～40歲、41～50歲、>50歲），同時應(yīng)用唾液酸酶法和常規(guī)鏡檢法檢測，對比分析結(jié)果。結(jié)果 唾液酸酶法的陽性率為17.91%，白帶常規(guī)鏡檢法的陽性率8.75%，兩種方法檢測細(xì)菌性陰道病的陽性率的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。BV陽性率隨年齡增長有上升趨勢，以>50歲組的陽性率為最高（25.68%）。結(jié)論 唾液酸酶法操作簡便、快速，提高了陽性檢出率和準(zhǔn)確度，適合臨床推廣。

關(guān)鍵詞：細(xì)菌性陰道病；陰道分泌物；白帶常規(guī)鏡檢法；唾液酸酶法

Abstract：Objective To investigate the significance of sialidase test in diagnosis of bacterial vaginosis by comparing sialidase test with conventional microscopy， and provide rapid and reliable methods for diagnosis BV in clinic. Methods Sialidase test and conventional microscopy were used to determine 480 samples （<30 years old group，31～40 years old group，41～50 years old group and >50 years old group） and the results were analyzed comparatively. Results The positive rate of sialidase test for diagnosis BV was 17.91%%， and the positive rate of routine microscopic examination was 8.75%.There was significance difference（P<0.05） . BV positive rate increased with age，and the highest rate was 25.68% when the age was>50 years old. Conclusions Sialidase test improves the accuracy and positive detection rate.So the sialidase test is suitable for clinical application and be generally applied.

Key words：Bacterial vaginosis； Vaginal secretion； Routine microscopic examination； Sialidase test

細(xì)菌性陰道?。╞acterial vaginosis，BV），是育齡婦女常見的陰道疾病，感染率在15%～50%[1]。BV是由于陰道加德納菌和厭氧菌增多，乳酸桿菌減少，陰道內(nèi)生態(tài)系統(tǒng)改變而引起的一種疾病[2]。BV患病率高于滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎，對患者和胎兒的危害極大。BV患者易發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒子宮內(nèi)感染、胎膜早破，亦可引發(fā)子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、不孕癥及婦科腫瘤等疾病[3]。婦科陰道分泌物檢測（簡稱白帶常規(guī)）是女性泌尿生殖道健康水平的一項(xiàng)重要醫(yī)學(xué)檢查項(xiàng)目，主要用于監(jiān)測女性泌尿生殖道感染與否以及種類。目前國內(nèi)普遍應(yīng)用懸滴法進(jìn)行白帶常規(guī)檢測，該法能簡便快速地查出滴蟲、真菌等，但是顯微鏡檢存在諸如經(jīng)驗(yàn)要求高、主觀性強(qiáng)等缺點(diǎn)，在顯微鏡質(zhì)量及涂片的均勻等方面受限，而且僅從形態(tài)學(xué)上來鑒別，在靈敏度和特異性方面也存在嚴(yán)重的問題，漏診率高，檢出率較低[4]，不利于建立質(zhì)控制度，臨床應(yīng)用結(jié)果不甚滿意。近年來，國內(nèi)外一些科研單位有將酶學(xué)方法應(yīng)用于白帶常規(guī)檢測的研究，其為白帶常規(guī)檢測技術(shù)的發(fā)展起到了巨大的推動作用。唾液酸酶法是檢測BV患者陰道致病菌分泌的特異性唾液酸酶，其活性與BV病情的嚴(yán)重程度成正比。

1資料與方法

1.1樣本采集 選取2013年9月～12月上海復(fù)旦大學(xué)婦產(chǎn)科醫(yī)院門診患者480例，排除月經(jīng)、未婚，就診前48 h無性生活史。用2根無菌棉拭，采集患者陰道壁下1/3分泌物，放入無菌試管，分別進(jìn)行白帶常規(guī)檢測和唾液酸酶檢測。

1.2儀器試劑 OLYMPUS CH30顯微鏡；細(xì)菌性陰道?。ㄍ僖核崦阜ǎ┰\斷試劑盒由中山市天洋電子生物傳感器有限公司提供

1.3方法 白帶常規(guī)鏡檢法，白帶常規(guī)的檢查一般包括5項(xiàng)。

1.3.1 pH值青春期后由于卵巢性激素的刺激，使粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)含有豐富的動物淀粉，經(jīng)陰道桿菌分解作用后變成乳酸，以致陰道內(nèi)分泌物呈弱酸性，可防止致病菌在陰道內(nèi)繁殖，這是陰道的自凈作用?；?yàn)時常用pH值來表示酸堿度，正常時pH為4.5，患有滴蟲性或細(xì)菌性陰道炎時白帶的pH值上升，可大于5～6。

1.3.2陰道清潔度可分為4級，見表1。

其中：Ⅰ～Ⅱ?yàn)檎?。Ⅲ～Ⅳ為異常，可能為陰道炎，同時?？砂l(fā)現(xiàn)病原菌、真菌、陰道滴蟲等，作清潔度檢查時應(yīng)同時作滴蟲、真菌檢查。

1.3.3霉菌與滴蟲白帶經(jīng)過處理后在顯微鏡下可以根據(jù)其形態(tài)發(fā)現(xiàn)有無滴蟲或霉菌，如存在滴蟲或霉菌不論其數(shù)量多寡均用\"+\"來表示，\"+\"這一符號只說明該婦女感染了滴蟲或霉菌，并不說明其感染的嚴(yán)重程度。

1.3.4胺試驗(yàn) 患細(xì)菌性陰道病的白帶可發(fā)出魚腥味，它是由存在于白帶中的胺通過氫氧化鉀堿化后揮發(fā)出來所致。

1.3.5線索細(xì)胞 線索細(xì)胞是指細(xì)菌性陰道炎患者有許多桿菌凝聚在陰道上皮細(xì)胞邊緣，在懸滴涂片中見到陰道上皮細(xì)胞邊緣呈顆粒狀或點(diǎn)畫狀致使模糊不清者即為線索細(xì)胞，鏡下見線索細(xì)胞占全部上皮>20%，即線索細(xì)胞陽性，判斷BV陽性。

1.4唾液酸酶法 常規(guī)法取陰道分泌物于樣本稀釋液中，洗滌棉拭子后將采樣拭子丟棄，加入2～3滴顯色液混勻，觀察結(jié)果。顏色由無色變黃色為陽性，變橘黃色為強(qiáng)陽性，不變色為陰性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用配對資料四格法、χ2檢驗(yàn)進(jìn)行資料統(tǒng)計(jì)

2結(jié)果

2.1白帶常規(guī)鏡檢法與唾液酸酶法比對結(jié)果 同時采用2種方法檢測480份樣本的比對結(jié)果，見表1。唾液酸酶法檢測出86例BV陽性，陽性率為17.91%，常規(guī)鏡檢法檢測出42例BV陽性，陽性率為8.75%，經(jīng)配對資料χ2檢驗(yàn)，χ2=161.1，P<0.01差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2各年齡組BV陽性率比較 采用唾液酸酶法對不同年齡段婦女進(jìn)行檢測，結(jié)果，見表2。隨著年齡增長，BV陽性率不斷增高。

3討論

健康婦女陰道內(nèi)存在著多種正常微生物群落。清潔度在Ⅰ度～Ⅱ度為正常，Ⅲ度～Ⅳ度為異常[5]。在常規(guī)鏡檢中，主要依靠白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、陰道桿菌及雜菌的多少劃分清潔度。本實(shí)驗(yàn)中，常規(guī)鏡檢法度清潔度判斷偏低考慮可能是加入過量生理鹽水稀釋，導(dǎo)致視野中細(xì)胞、雜菌數(shù)減少所致。生理情況下，陰道內(nèi)有各種厭氧菌及需氧菌，其中乳酸桿菌為優(yōu)勢菌群。細(xì)菌性陰道病時，陰道內(nèi)乳酸桿菌減少而厭氧菌大量繁殖（如陰道加德納菌、類桿菌屬、動彎桿菌屬等）。這些厭氧菌產(chǎn)生大量唾液酸酶，使得患者陰道分泌物中唾液酸酶活性顯著增高。唾液酸酶能與特定的底物反應(yīng)，釋放無色的顯色基團(tuán)及唾液酸。無色的顯色基團(tuán)遇特殊物質(zhì)后能發(fā)生由無色變黃色（陽性顏色）的變化。且顏色深淺與唾液酸含量呈正比，而正常婦女陰道中無唾液酸，滴加顯色液后為無色。有研究表明84%的BV患者陰道內(nèi)唾液酸酶增高，其活性與疾病嚴(yán)重程度成正比[6]。應(yīng)用唾液酸酶法可根據(jù)顏色的變化情況可反映細(xì)菌性陰道病的嚴(yán)重程度。

BV是常見的陰道感染性疾病，陰道加德納菌（陰道棒桿菌）是引起B(yǎng)V的主要病原菌。國外報(bào)道將其列為性傳播疾病，國內(nèi)有報(bào)道認(rèn)為BV發(fā)病與宮頸糜爛密切相關(guān)。醫(yī)學(xué)證明，BV是導(dǎo)致組織性絨毛膜炎、羊水感染、剖宮產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎及其他妊娠不良和妊娠并發(fā)癥的危險(xiǎn)因素[7-8]。由此提示對陰道分泌物不但要進(jìn)行常規(guī)霉菌、滴蟲檢查，還應(yīng)對BV做常規(guī)檢查，以達(dá)到早期診斷及早期治療的目的。陰道乳酸桿菌為主的陰道菌群異常改變被認(rèn)為是臨床診斷BV最具價值的形態(tài)學(xué)檢查指標(biāo)。濕片法找線索細(xì)胞已在全國《醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)》教材中提出，并且準(zhǔn)確性已得到證實(shí)[9]。本科室用唾液酸酶法試劑盒與白帶常規(guī)鏡檢法比較陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文的實(shí)驗(yàn)中鏡檢法檢測BV陽性率較唾液酸酶法試劑盒低，鏡檢法一般是通過尋找線索細(xì)胞（>20%）來診斷BV，判斷時容易受主觀因素及生理鹽水稀釋白帶造成細(xì)胞不易觀察等影響，易造成漏檢。唾液酸酶法試劑盒主要通過測定陰道分泌物中唾液酸酶的活性來診斷BV其結(jié)果準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定性好、價格合理，對BV鑒別、診斷、篩查有一定的意義。

隨著年齡的增長，BV患病率有上升的趨勢。年齡在30～50歲，BV感染率為14.89%～18.12%；而>50歲感染率達(dá)到25.68%。原因可能是由于缺乏雌激素，陰道鱗狀上皮細(xì)胞變薄，細(xì)胞內(nèi)糖原減少，陰道內(nèi)乳酸桿菌減少，pH值升高。這些生理性變化導(dǎo)致年齡較大的婦女易受厭氧菌感染引發(fā)BV。

綜上所述，唾液酸酶法試劑盒將傳統(tǒng)的陰道分泌物常規(guī)形態(tài)學(xué)檢查提高到特異性生化標(biāo)志物檢測避免了傳統(tǒng)檢測方法的人為主觀因素、標(biāo)本保存條件、環(huán)境溫度要求造成的檢出率低的問題，提高了檢出率和準(zhǔn)確性，適合臨床廣泛使用。

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編輯/肖慧