復(fù)方大黃凈化液提取工藝研究

摘要：目的 優(yōu)選復(fù)方大黃凈化液提取工藝。方法 基于復(fù)方大黃凈化液組方原則，兼顧大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃素、大黃酚主要指標(biāo)成分含量和干浸膏收率，以加水倍數(shù)、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間和提取次數(shù)為考察因素，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方大黃凈化液提取工藝條件。結(jié)果 制劑最佳提取工藝為加水量為10倍量，浸泡30 min，提取時(shí)間1 h，提取次數(shù)3次。結(jié)論 該方法有效的優(yōu)選出復(fù)方大黃凈化液提取工藝，工藝合理穩(wěn)定，操作易行。

關(guān)鍵詞：復(fù)方大黃凈化液；正交試驗(yàn)；提取工藝

Abstract：Objective To optimize extracting techniques of compound Dahuangjinghua liquid. Methods Based on compound Dahuangjinghua liquid formula principle ，take the aloe-emodin， rhein， emodin， methyl ether， emodin， rhubarb phenol main index component content and water-soluble total Fried， with multiple water， soaking time， extracting time and extracting times to examine factors， optimizing compound rhubarb purification liquid extraction process by orthogonal experiment.Results The best condition is soaking 30 minutes， extracting 1 hour， extracting for 3 times， to add ten times of water. Conclusion The method is effective optimized compound Dahuangjinghua liquid extraction process， reasonable process stability， and easy to operate.

Key words：Compound Dahuangjinghua liquid； Orthogonal experiment； Extraction technology

慢性腎功能衰竭常常因?yàn)槟I臟疾病而發(fā)展導(dǎo)致，一般現(xiàn)慢性進(jìn)行性腎實(shí)質(zhì)損害，后來會演變成為尿毒癥，腎衰竭病情嚴(yán)重，病死率非常高，臨床上的治有相當(dāng)大的困難。人工腎及腎移植技術(shù)由于科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展顯現(xiàn)出比較好的療效，但花費(fèi)昂貴、存在技術(shù)難度大，不能很好普及。開發(fā)運(yùn)用中醫(yī)藥方法來治療慢性腎功能衰竭是熱門的研究方向，中醫(yī)藥治療方法具有良好發(fā)展趨勢。復(fù)方大黃凈化液（大黃、附子、桂枝等七味藥材）是繼承廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院腎內(nèi)科老專家豐富臨床經(jīng)驗(yàn)，遵循\"補(bǔ)腎與瀉濁\"、\"養(yǎng)血填精與活血化瘀\"相結(jié)合的辨證治療思路，經(jīng)由多年大量臨床實(shí)踐探究而研發(fā)出的方劑，其運(yùn)用\"瀉濁\" 原則來指導(dǎo)并通過結(jié)腸透析來進(jìn)行慢性腎功能衰竭治療。

本研究釆用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以干浸膏收率、大黃五種游離蒽醌含量作為評價(jià)指標(biāo)對提取時(shí)間、加水量、提取次數(shù)和浸泡時(shí)間四個因素進(jìn)行了優(yōu)化，確定了制劑提取工藝，為規(guī)范其提取制備工藝，發(fā)揮其最大臨床療效，提供試驗(yàn)依據(jù)。

1資料與方法

1.1儀器 LC-20AT高效液相色譜儀；GH-252電子分析天平；HH-W420數(shù)顯三用恒溫水箱；KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器；CD-UPT-II-10L超純水機(jī)；電爐。

1.2試藥 大黃、附子、桂枝等七味藥材均符合《中國藥典》2010年版一部各品種項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃素、大黃酚對照品（購自中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.3方法

1.3.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取浸泡時(shí)間、加水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)作為正交試驗(yàn)的考察因素，各取三水平，以大黃五種蒽醌總含量和干浸膏收率為評價(jià)指標(biāo)，所選因素水平，見表 1。

1.3.2樣品的制備 試驗(yàn)方法：分別按處方比例稱取全方藥材九份，按正交設(shè)計(jì)表L9（34）項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，藥液分別濃縮定容至1000 mL，備用。

1.3.3蒽醌含量測定[2] 分別制備供試品溶液和對照品溶液，確立色譜條件：流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，采用外標(biāo)法分別計(jì)算大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃酸等大黃蒽醌含量。

1.3.4干浸膏收率測定 精密吸取各正交試驗(yàn)樣品液20 mL，水浴蒸干后迅速精密稱定重量，計(jì)算干浸膏收率。

1.3.5評分標(biāo)準(zhǔn) 將測定大黃五種蒽醌含量作為主要確定提取效率的總體優(yōu)化指標(biāo)；另增加干浸膏收率作為一個工藝優(yōu)化的總體指標(biāo)。以兩項(xiàng)指標(biāo)的綜合評分，規(guī)定綜合評分滿分為1，總蒽醌含量綜合評分權(quán)重系數(shù)分別定為0.7，以總蒽醌含量最高為定為0.7；干浸膏收率綜合評分權(quán)重系數(shù)分別定為0.3，以最高者定為0.3。

2結(jié)果

2.1提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果見表1，方差分析見表2。

2.2影響因素 數(shù)據(jù)表明極差中C>B>A>D，說明因素C提取次數(shù)為主要因素，因素B提取時(shí)間其次，因素A加水倍數(shù)量影響比較小，因素D浸泡時(shí)間對本實(shí)驗(yàn)的影響最小。即總蒽醌含量和干浸膏收率受煎煮次數(shù)影響最大，煎煮時(shí)間其次，受加水量影響較小，而受浸泡時(shí)間影響最小。

2.3各列水平情況 第一列因素A加水倍數(shù)量K3>K2>K1；第二列因素B提取時(shí)間K3>K2>K1；第三列因素C提取次數(shù)K3>K2>K1；第四列因素D浸泡時(shí)間K1>K2>K3。所以，煎煮提取條件優(yōu)選各因素水平為A3B3C3D1，即加水10倍量，浸泡30 min，煎煮90 min，提取3次。

2.4方差分析 C因素煎煮次數(shù)具有顯著性， A因素加水量、B因素煎煮時(shí)間、D因素浸泡時(shí)間等因素不具顯著性。因此，為節(jié)約水、電和工時(shí)，降低成本，確定水煎煮提工藝方案為A3B2C3D1，即加10倍量水， 浸泡30 min，提取3次，60 min/次，見表3。

2.5驗(yàn)證試驗(yàn) 為了驗(yàn)證正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以保證復(fù)方大黃凈化液的煎煮提取工藝的合理可靠，按照正交試驗(yàn)優(yōu)化的提取工藝條件進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果表明采用優(yōu)選的工藝條件進(jìn)行水煎煮提取，這三份藥材的提取效率均達(dá)到了較高水平，且工藝穩(wěn)定，適用于大生產(chǎn)，見表4。

3討論

正交設(shè)計(jì)是一種高效、快速的多因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，可用最少的試驗(yàn)次數(shù)篩選出最佳試驗(yàn)條件。本實(shí)驗(yàn)采用三水平四因素的正交實(shí)驗(yàn)，以大黃五個蒽醌總量和干浸膏收率為評價(jià)指標(biāo)對制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果中表明浸泡時(shí)間為30 min時(shí)提取率最高，加水量為8倍量時(shí)提取率最高，提取時(shí)間為60 min時(shí)提取率最高，提取次數(shù)為4次時(shí)提取率最高，這與優(yōu)化提取工藝條件加10倍量水，浸泡30 min，提取3次，60 min/次大體相一致，結(jié)合最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)以及中試產(chǎn)品生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)表明，正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選煎煮提取工藝條件合理、穩(wěn)定，工藝條件較易控制，具有良好的連續(xù)性、穩(wěn)定性，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用設(shè)備為普通常用生產(chǎn)設(shè)備，符合復(fù)方大黃凈化液大生產(chǎn)實(shí)際需要。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/張燕