血性體液細(xì)胞學(xué)涂片及包埋方法的改進(jìn)

摘要：目的 探討血性體液細(xì)胞學(xué)涂片及包埋方法。方法 選取新鮮血性體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本編號后隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組，對照組將編號的新鮮血性體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本靜置片刻后，取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機(jī)以3000 r/min離心10 min，不加任何處理，直接涂片備用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。實(shí)驗(yàn)組在對照組的基礎(chǔ)上離心后，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振蕩儀上振蕩10 min，再次以3000 r/min離心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表層部分沉渣涂片，用酒精燈烤干涂片冷卻后放入90%酒精固定備用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。觀察兩組涂片處理效果。結(jié)果 對照組染色效果不佳，出現(xiàn)嚴(yán)重的非特異性背景染色，致陽性定位不清；實(shí)驗(yàn)組染色清晰，非特異性背景染色少，對腫瘤細(xì)胞、間皮細(xì)胞等陽性定位準(zhǔn)確。結(jié)論 本方法避免了傳統(tǒng)涂片的不足，陽性檢出率高，試劑配制簡單，成本低，具有較高的應(yīng)用價(jià)值，值得推廣。

關(guān)鍵詞：血性體液細(xì)胞學(xué)涂片；冰醋酸；包埋切片；陽性定位；非特異性背景

細(xì)胞學(xué)檢查診斷胸、腹水等惡性腫瘤已成為病理科一項(xiàng)常規(guī)檢查項(xiàng)目，其具有取材方便、易行、患者痛苦少等優(yōu)點(diǎn)。日常工作中，胸腹水等細(xì)胞診斷難度很大，尤其是腺癌、間皮瘤和間皮增生的鑒別診斷。提高細(xì)胞制片質(zhì)量，做出穩(wěn)定可靠的細(xì)胞片，是保證診斷準(zhǔn)確性的前提條件。但多數(shù)體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中含有大量紅細(xì)胞，難以制作優(yōu)良的細(xì)胞涂片，常影響結(jié)果觀察，采取何種方法除去紅細(xì)胞？獲得良好的細(xì)胞學(xué)涂片及包埋制片，以提高陽性檢出率。為此，我科經(jīng)過長期反復(fù)摸索，對傳統(tǒng)的血性體液細(xì)胞學(xué)涂片及包埋方法進(jìn)行了改進(jìn)，將血性體液細(xì)胞離心后，加入10%冰醋酸振蕩處理，除去紅細(xì)胞，再行沉渣涂片及包埋制片，收到了滿意的效果，現(xiàn)將方法介紹如下。

1資料與方法

1.1一般資料 2013年1月～2014年5月安徽省中醫(yī)院病理科血性胸腹水、尿等體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本。

1.2方法 實(shí)驗(yàn)組將編號的新鮮血性體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本靜置片刻后，標(biāo)本中有形細(xì)胞受重力影響大部沉于底部，故取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機(jī)以3000 r/min離心10 min，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振蕩儀上振蕩10 min，再次以3000 r/min離心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表層部分沉渣涂片，用酒精燈烤干涂片冷卻后放入90%酒精固定備用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。對照組將編號的新鮮血性體液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本靜置片刻后，取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機(jī)以3000 r/min離心10 min，不加任何處理，直接涂片備用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。

2結(jié)果

對照組未處理的涂片，背景一片紅染，模糊不清，細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示不清晰，見圖1。由于大量紅細(xì)胞存在，易造成涂片厚薄不均，染色效果不佳，甚至涂片在染色水洗過程中脫片，大量紅細(xì)胞遮擋或覆蓋腫瘤細(xì)胞、間皮細(xì)胞、炎細(xì)胞等有診斷價(jià)值細(xì)胞，造成漏診或誤診；沉渣包埋切片由于紅細(xì)胞過多，加做的免疫酶標(biāo)及特殊染色的，出現(xiàn)嚴(yán)重的非特異性背景染色，致陽性定位不清，見圖2。

實(shí)驗(yàn)組經(jīng)10%冰醋酸處理沉渣的涂片中紅細(xì)胞幾乎消失或淡染，背景干凈，腫瘤細(xì)胞、間皮細(xì)胞、炎細(xì)胞等核膜、染色質(zhì)、核仁結(jié)構(gòu)清晰，染色分明，細(xì)胞無變形，亦無脫片掉片現(xiàn)象，見圖3；沉渣包埋切片加做免疫酶標(biāo)及特殊染色，非特異性背景染色少，對腫瘤細(xì)胞、間皮細(xì)胞等陽性定位準(zhǔn)確。陽性率明顯提高，見圖4。

3討論

胸腹水是臨床上多種腫瘤的常見伴隨癥狀，而且是多種腫瘤的首發(fā)癥狀，在腫瘤的診斷及治療中具有重要意義[1]。長期以來，對提高細(xì)胞學(xué)陽性率和準(zhǔn)確性的研究，一直是細(xì)胞病理工作者研究的重點(diǎn)，國內(nèi)外主要集中在兩個方面：①對細(xì)胞學(xué)制片方法的改進(jìn)的研究；②如何鑒別良惡性細(xì)胞的主觀判斷。病理工作者一直都在尋找和研究更加客觀的新技術(shù)方法和診斷指標(biāo)。而\"許多診斷困難的涂片，實(shí)際上是涂片制作質(zhì)量不佳造成的\"，質(zhì)量優(yōu)良的涂片細(xì)胞必須清楚，核膜，染色質(zhì)、核仁等結(jié)構(gòu)必須清晰[2]。涂片中有效細(xì)胞量的多少也是涂片質(zhì)量的重要方面，細(xì)胞太少，容易漏診，細(xì)胞量太多，涂片太厚，容易造成染色水洗時掉片外，還影響讀片效果，本方法可以明顯提高涂片質(zhì)量。通過吸取底層少量細(xì)胞涂片，不會涂片太厚，避免掉片。

血性體液標(biāo)本，離心后沉渣經(jīng)過10%冰醋酸處理，低滲冰醋酸可使部分紅細(xì)胞迅速破裂溶解[3]。冰醋酸能固定核蛋白，使細(xì)胞核形態(tài)清晰，便于辨 認(rèn)[4]。涂片中紅細(xì)胞幾乎消失，腫瘤細(xì)胞染色清晰，結(jié)構(gòu)保存完好；剩余沉渣做包埋后常規(guī)石蠟切片，增加了細(xì)胞量，避免細(xì)胞涂片由于細(xì)胞量少，造成漏診現(xiàn)象。

《阿克曼外科病理學(xué)》中提到腹水細(xì)胞學(xué)診斷存在兩個最困難的問題，①反應(yīng)性間皮和腫瘤性間皮的鑒別，②惡性間皮瘤與轉(zhuǎn)移癌的鑒別。并指出免疫組化應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，以期提高診斷的準(zhǔn)確性[5-6]。診斷誤區(qū)常常在于將反應(yīng)性改變的間皮細(xì)胞誤判為惡性細(xì)胞，因此，診斷轉(zhuǎn)移惡性細(xì)胞的關(guān)鍵是鑒別反應(yīng)性間皮細(xì)胞。轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞一般都具有惡性的基本特征，它們是\"長著惡性面孔的外來者\(yùn)"，周圍常能見良性的間皮細(xì)胞；當(dāng)反應(yīng)性間皮細(xì)胞酷似轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞時，需借助其他手段（如免疫化學(xué)染色）進(jìn)行鑒別[7-9]。由于石蠟切片可以連續(xù)大量切片及長期保存的特性，可加做免疫組化及特殊染色，無紅細(xì)胞背景干擾，有利于腫瘤診斷和鑒別診斷，提高了診斷依據(jù)及準(zhǔn)確性。

綜上所述，本方法避免了傳統(tǒng)涂片的不足，陽性檢出率高，試劑配制簡單，成本低，具有較高的應(yīng)用價(jià)值，值得推廣，但在操作過程中需要注意：①標(biāo)本離心涂片后，立即用酒精燈烤干冷卻后固定，固定時間不少于10 min，否則影響染色效果。②冰醋酸濃度不宜過高，低滲的冰醋酸才能去除紅細(xì)胞。③所有玻片必須清潔干凈，必要時可用防脫載玻片。

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[9]Agarwal PK.Cytologic examination of hemorrhagic fluid by capillary centrifugation： a new technique[J].Acta Cytologica，2009，53（5）：527-532.編輯/張燕