摘要:目的 探究培養(yǎng)、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床作用。方法 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR檢測(cè),統(tǒng)計(jì)結(jié)果后進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果 臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR(4d)、增菌PCR(7d)的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%;35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性,PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例(5.71%)假陽性(P<0.05)。結(jié)論 增菌PCR檢測(cè)法對(duì)于結(jié)核分枝桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性,可有效輔助診斷肺結(jié)核病。
關(guān)鍵詞:肺結(jié)核;PCR;涂片;培養(yǎng)
肺結(jié)核是肺部;受到結(jié)核桿菌影響而引起的肺部感染性疾病,已對(duì)人類健康造成重大威脅。傳播途徑為呼吸道,傳染源為肺結(jié)核患者。感染肺結(jié)核桿菌的健康人群不一定會(huì)發(fā)病,當(dāng)其免疫力降低的時(shí)候才可能發(fā)病。根據(jù)每年的世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)可知,每年世界上約會(huì)發(fā)生結(jié)核病800~1000萬,大約會(huì)死亡300萬,已經(jīng)成為單一傳染病中死亡率最高的[1]。對(duì)于肺結(jié)核病而言,只要發(fā)現(xiàn)早治療合適還是可以治愈的,因此對(duì)肺結(jié)核的診斷尤為重要,本文對(duì)培養(yǎng)、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床作用進(jìn)行對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn)增菌PCR對(duì)結(jié)核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性,現(xiàn)詳細(xì)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1一般資料 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增液PCR四種方法進(jìn)行檢測(cè)。臨床確診的患者均經(jīng)過確診;疑似結(jié)核病患者均為我院門診及住院患者;非肺結(jié)核病患者均為肺炎、肺癌、慢性支氣管炎患者等。
1.2 方法
1.2.1培養(yǎng)和培養(yǎng) 參照(結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程)[2]利用NaOH液化痰標(biāo)本,用PBS離心處理2次,取出沉淀后用PBS溶解,隨后分別吸取0.1ml進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR檢測(cè)。
1.2.2 PCR擴(kuò)增 參照標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行操作。設(shè)置條件為94℃變性5min,94℃1min;68℃1min;72℃1min;35次循環(huán);72℃延伸5min。利用PCR-ELISA對(duì)擴(kuò)增物進(jìn)行鑒定[3]。
1.2.3增菌PCR 取上述經(jīng)液化、離心洗滌處理后的標(biāo)本沉淀物0.1ml接種在1ml液體培養(yǎng)基上,在37℃溫度下培養(yǎng)4d和7d,參照PCR方法進(jìn)行檢查。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn) 本文數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件處理,用例數(shù)、百分?jǐn)?shù)(n,%)進(jìn)行數(shù)據(jù)表示,組間數(shù)據(jù)用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料,P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
四種檢測(cè)方法的結(jié)果,臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR(4d)、增液PCR(7d)的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為23.1%、33.4%、56.1%、66.3%、88.3%;35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、19.3%、29.1%、38.3%、53.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性,PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例(5.71%)假陽性(P<0.05)。見表1。
3 討論
治療結(jié)核病最重要的便是提早診斷盡早治療。因此結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)檢查在診斷早期具有重要意義?,F(xiàn)在全球范圍內(nèi)使用最廣泛最基本的細(xì)菌學(xué)檢查方法是痰涂片抗酸染色檢查,具有簡便快捷、價(jià)廉的優(yōu)點(diǎn),但是敏感性低、特異性差。細(xì)菌培養(yǎng)法靈敏度高于痰涂片法,檢查整體耗時(shí)長,約4~8w[4]。因此PCR就以其高靈敏度高特異性的優(yōu)點(diǎn)成為了最有價(jià)值的診斷手段。本文為探究PCR的臨床診斷價(jià)值,在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增液PCR四種方法進(jìn)行檢測(cè),統(tǒng)計(jì)結(jié)果后進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn):臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR(4d)、增菌PCR(7d)的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%;35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性,PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例(5.71%)假陽性(P<0.05)??傻贸鼋Y(jié)論:增菌PCR檢測(cè)法對(duì)于肺結(jié)核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性,可有效輔助診斷肺結(jié)核病。
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編輯/哈濤