p27Kipl在肝細(xì)胞癌中表達(dá)及臨床意義的研究

【摘要】：目的：分析HCC中p27Kipl基因的表達(dá)及其臨床意義。方法：收集HCC組織及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本各42例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SP)法，檢測p27Kipl蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果：21.4％(9/42)的肝癌組織表達(dá)p27Kipl蛋白，而癌旁組織的陽性表達(dá)率為76.1％(32/42）。兩者比較差異有顯著性意義 (P<0.05)。結(jié)論：p27Kipl在肝癌組織中選擇性表達(dá)，與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、血管浸潤等惡性生物學(xué)行為有關(guān)，與HCC的發(fā)展過程中起重要作用。

關(guān)鍵詞 ：肝細(xì)胞肝癌；p27Kipl蛋白；免疫組織化學(xué)原發(fā)性

【中圖分類號】R4【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1671-8801（2014）06-0107-01

細(xì)胞周期的調(diào)控是一個(gè)極其復(fù)雜的過程， 涉及到多因子多層次上的作用， 其中有兩個(gè)主要調(diào)控點(diǎn): 一個(gè)處于G1 /S 轉(zhuǎn)折點(diǎn)， 另一個(gè)處于G2 /M 轉(zhuǎn)折點(diǎn)，而p27Kipl主要調(diào)控G1 /S 轉(zhuǎn)折點(diǎn)。因此，p27Kipl異常表達(dá)，細(xì)胞失去了正常增殖周期中凋亡“開關(guān)”的限制，造成細(xì)胞異常增殖，致癌癥的發(fā)生。

1資料與方法

1．1標(biāo)本來源

收集河南省人民醫(yī)院2008年12月至2013年12月手術(shù)患者經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為肝細(xì)胞癌標(biāo)本42例，包括肝癌組織以及癌旁組織。癌旁組織取材時(shí)為距癌結(jié)節(jié)邊緣2cm以外肝組織，避開壞死區(qū)?；颊咝g(shù)前均未接受任何化療及其他治療。男32例，女10例，年齡32～80歲，平均64.7歲。25例有肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，26例有完整包膜，16例包膜不完整或無包膜； 小肝癌(≤5cm )17例， 大肝癌(>5cm)25例。

1.2主要試劑

兔抗人p27Kip多克隆抗體武漢博士德生物試劑有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

分別用免疫組織化學(xué)鏈霉卵白素一生物素一辣根過氧化物酶復(fù)合物(streptavidin peroxidase conjugated method，SP)法檢測p27Kip蛋白表達(dá)，以試劑盒中已知陽性切片為陽性對照，以PBS液(PH=7.4)代替一抗為陰性對照?？筽27Kip抗體稀釋度為 1：20，操作步驟按試劑盒說明書要求步驟進(jìn)行。

1.4 P27kip1蛋白的陽性表達(dá)的判定

p27Kipl的陽性表達(dá)主要細(xì)胞核，以腫瘤細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，在200倍400倍光鏡下至少觀察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中腫瘤陽性細(xì)胞＞5％定義為陽性表達(dá)，≤5％為陰性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X(—)±S）表示，采用SPSS軟件11.0行單因素方差分析、X檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)а=0.05

2結(jié)果

2.1 P27kip1蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)

在21.4﹪(9/42)的肝癌組織內(nèi)可見p27Kipl呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)顆粒主要位于細(xì)胞核，在同一組織標(biāo)本中p27Kipl表達(dá)呈均一性且隨腫瘤惡性程度的增加，肝癌組織中p27Kipl蛋白的表達(dá)明顯下降，而癌旁組織的表達(dá)明顯高于肝癌組織。

2.2 P27kip1蛋白的表達(dá)與肝癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系

P27kip1的表達(dá)與患者性別、年齡無顯著相關(guān)性，而與腫瘤大小及有無肝內(nèi)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

3討論

p27kip1是細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，主要抑制Cy-cline-CDK2和CyclinD-CDK4等G1期激酶復(fù)合物阻滯細(xì)胞于G1期防止細(xì)胞過度增殖并與細(xì)胞凋亡有著密切的聯(lián)系，是細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子的典型代表，是公認(rèn)的抑癌基因[1]。WangS 等[2]研究發(fā)現(xiàn) p27kipl通過磷酸化 Statl 抑制 Ras 系統(tǒng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制CDK，進(jìn)而抑制細(xì)胞從Gl 期到S 期的轉(zhuǎn)變。Ito等[4]在研究HCC中G1-S期調(diào)控因子的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)HCC中p27Kipl平均LI明顯高于癌旁組織及正常肝組織，以早期HCC中LI最高，而在進(jìn)展期肝癌中p27Kipl 明顯下降，認(rèn)為p27Kipl可能在HCC發(fā)生早期起負(fù)調(diào)控作用。彭志海等[5]研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中p27Kipl蛋白表達(dá)低者，端粒酶陽性率明顯增高，腫瘤的惡性程度也較高，與不良預(yù)后有關(guān)。王科等[6]檢測33例原發(fā)性肝癌和5例正常肝組織標(biāo)本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)P27蛋白表達(dá)的減少和原發(fā)性肝癌的進(jìn)展、惡性程度、腫瘤的大小有顯著相關(guān)性。我們的結(jié)果顯示，p27Kipl在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為21.4%(9/42)，而在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為76.1%(32/42)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。故可以說明，p27Kipl蛋白表達(dá)的降低，對肝癌細(xì)胞的負(fù)調(diào)控作用減弱，使得腫瘤細(xì)胞得以生長。

參考文獻(xiàn)：

[1] Solbach C， Roller M， Fellbaum C et al. PTTG mRNA expression in primary breast cancer: a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence[J]. Breast， 2004， 13(1): 80-81.

[2] Wang S， Raven JF， Durbin JE， et a1. Statl phosphorylation determines Ras oncogenicity by regulating p27kip1[J]. PlosOne， 2008， 3(10):3476.

[3] 彭志海，劉道永，唐華美，等.肝細(xì)胞癌端粒酶活性與細(xì)胞周期抑制蛋白p27Kipl的相關(guān)性研究.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2001，18（4）：321-322.

[4] 王科，王學(xué)浩，張峰，等. p27Kipl蛋白在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)及意義.肝膽外科雜志，2002，2(10):71-73.

通訊作者：薛煥洲