我國(guó)H9N2亞型禽流感流行現(xiàn)狀分析

尹燕博

自從1994年在我國(guó)首次分離到H9N2亞型禽流感病毒以來，該病已經(jīng)在我國(guó)廣泛流行，可以說我國(guó)凡是有雞的地方，就有H9N2亞型禽流感流行。除此之外，又有不斷從豬、鴕鳥、鴨、鵝等動(dòng)物分離到H9N2病毒的報(bào)道。

更值得關(guān)注的是，H5N2、H7N9等病毒致病力及動(dòng)物嗜性的變化均與H9N2有關(guān)：2013年11月農(nóng)業(yè)部通報(bào)的河北H5N2流行毒株，為7.2群的H5N1流行毒株與H9N2流行毒株的基因重排毒株，其HA和M基因來源于7.2群H5N1，NA及其他內(nèi)部基因來源于H9N2流行株；H7N9的6個(gè)內(nèi)部基因片段與上海、浙江、江蘇等地雞群流行的H9N2相似，非結(jié)構(gòu)蛋白基因（NS）可能來源于江蘇周邊雞群，而其他5個(gè)片段來源于上海、浙江附近雞群，且H7N9不斷與H9N2內(nèi)部基因發(fā)生重排，并在不斷感染人。由此可見H9N2病毒在持續(xù)推動(dòng)著高致病流感病毒的變異。

H9N2禽流感在我國(guó)的流行，以2007年為界，可分為兩個(gè)階段：在此之前，臨床癥狀主要以呼吸道癥狀為主，激發(fā)大腸桿菌病，產(chǎn)蛋雞引起生殖系統(tǒng)病變并導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降，少有毒株致死雞胚并在實(shí)驗(yàn)室條件下復(fù)制出典型的臨床病變；在此之后的流行株，除能引起呼吸道和生殖系統(tǒng)典型病變外，還可引起典型的腎臟腫大、出血、尿酸鹽沉積等泌尿系統(tǒng)病變，不僅能致死雞胚的毒株所占的比例越來越大，而且在實(shí)驗(yàn)室攻毒試驗(yàn)中可復(fù)制出典型發(fā)病，并致死SPF雞。上述情況表明，H9N2禽流感臨床分離株的致病力有不斷增強(qiáng)的趨勢(shì)。

從臨床實(shí)踐看，H9N2亞型禽流感已經(jīng)成為養(yǎng)雞業(yè)、特別是肉雞養(yǎng)殖業(yè)的重要傳染病，其造成的損失緊隨高致病流感之后，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過新城疫、傳染性支氣管炎等疾病。針對(duì)這種情況，我們從以下幾個(gè)方面開展了較為系統(tǒng)的研究：

1 臨床發(fā)病情況調(diào)查

我們?cè)?008年1月～2012年6月期間，對(duì)不同地區(qū)送檢的5001份病料中有2425份可檢出NDV、IBV和AIV（H9）中的一種或多種，陽(yáng)性率高達(dá)48.49%；其中NDV陽(yáng)性率為13.10%，IBV陽(yáng)性率為9.24%，AIV（H9）陽(yáng)性率為26.15%，說明該段時(shí)間NDV、IBV和AIV（H9）3種病毒在北方主要養(yǎng)雞地區(qū)中普遍存在，且以AIV（H9）感染最為嚴(yán)重，見圖1。

H9N2禽流感屬條件致病性病原，對(duì)氣溫和空氣濕度變化特別敏感。當(dāng)雞舍過度通風(fēng)，溫度不穩(wěn)定、特別是突然降低，空氣相對(duì)濕度低于40%時(shí)，H9N2易出現(xiàn)典型發(fā)病，但其臨床表現(xiàn)會(huì)因毒株致病特點(diǎn)及環(huán)境條件的不同存在明顯差異。有的以呼吸系統(tǒng)病變?yōu)橹鳎械膭t主要表現(xiàn)為腎腫、腎出血?？偟恼f來主要表現(xiàn)鼻腔、氣管和支氣管粘膜環(huán)狀出血，十二指腸和泄殖腔粘膜出血，盲腸扁桃體腫大、出血。

干冷氣候條件下，很多病例出現(xiàn)纖維蛋白滲出形成的支氣管堵塞，而且空氣濕度越低，堵塞的位置越趨向支氣管下端，這種情況極易出現(xiàn)大批死亡。

胰腺通常表現(xiàn)邊沿部出血，但有的病例也出現(xiàn)高致禽病流感才有的斑點(diǎn)狀或片狀、半透明、液化性壞死。

發(fā)病雞肺臟常出現(xiàn)水腫、淤血，色彩斑駁或紫黑色。很多病例在H9N2基礎(chǔ)上激發(fā)大腸桿菌病，出現(xiàn)纖維素性氣囊炎、心包炎、肝包膜炎和腹膜炎。如果家禽臨床上廣泛出現(xiàn)典型且難治愈的大腸桿菌病病變，則其背后肯定有一個(gè)病毒性因素在起作用，而H9N2則是最常出現(xiàn)的病毒性因素。

2 H9N2亞型禽流感病毒分離株對(duì)雞胚及雞的致病力研究

2.1 2007年以來H9N2臨床分離株不同雞胚死亡時(shí)間的毒株所占比例統(tǒng)計(jì)分析 為了研究H9N2亞型禽流感病毒，本實(shí)驗(yàn)室持續(xù)采集臨床樣本分離病毒，從2006～2013年春季，共采集近6千份臨床樣本，經(jīng)分離鑒定出750余株H9N2亞型禽流感病毒，涉及我國(guó)華東、華北，東北和西北的大部分重點(diǎn)肉仔雞養(yǎng)殖地區(qū)。

通過表1、圖4分析發(fā)現(xiàn)：2007年以來，臨床上分離到的H9N2亞型禽流感病毒，能致死雞胚的毒株所占的比例在2007年之后逐年大幅增加，到2012年達(dá)到高峰，但在2013年又明顯降低，到今年8月底雖有小幅增加，但也明顯低于2012年。

2.2 兩株H9N2亞型禽流感病毒對(duì)SPF雞致病力研究 隨機(jī)選取5周齡SPF白來航雞45只，平均分為三組，每組15只雞。兩組作為攻毒組，一組作為對(duì)照組。將A/CK/SD827/09和A/CK/LN103/10兩株H9N2亞型禽流感病毒尿囊液原液無菌過濾后，每只雞靜脈注射0.2ml病毒原液。在攻毒12h后，CK/SD827/09和CK/LN103/10攻毒組分別死亡10只和9只。剖檢發(fā)現(xiàn)肺臟周圍充滿滲出液，肺臟充血、水腫，盲腸扁桃體充血、出血、腫脹，腎臟充血腫脹，肝臟有出血點(diǎn)。沒有死亡的雞出現(xiàn)張口呼吸、閉眼、縮頭、呆立等癥狀，這些癥狀在攻毒后第4天基本消失，直至攻毒后第10天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)再無其他雞死亡。

2.3 按照OIE規(guī)定新城疫毒力標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)部分H9N2分離株的致病力 將6周齡SPF白來航雞隨機(jī)分成10組，每組20只，其中9組雞作為攻毒組，每組雞對(duì)應(yīng)一株毒，剩余一組作為對(duì)照組。將H9N2亞型禽流感毒株用PBS稀釋10倍后，每只雞翅靜脈注射0.1ml。

研究結(jié)果表明，2008年以來流行的H9N2亞型禽流感毒株以毒力較強(qiáng)的毒株為主，H9N2亞型禽流感在攻毒3～5d后，在體內(nèi)復(fù)制達(dá)到高峰，這時(shí)期排毒量較大。致病性較強(qiáng)的H9N2亞型禽流感病毒在SPF雞體內(nèi)有較強(qiáng)的復(fù)制能力，并引起發(fā)病雞比較嚴(yán)重的組織病理學(xué)變化。致病力較強(qiáng)的毒株能在腎臟中有效的復(fù)制，與目前臨床發(fā)現(xiàn)H9N2亞型禽流感引起的腎臟病變相一致，H9N2病毒感染造成的病理變化見表2。

H9N2亞型禽流感病毒的變異速度越來越快，不斷出現(xiàn)HA基因差異較大的變異毒株，進(jìn)化樹上幾乎每年都有新的亞群出現(xiàn)，見圖5。同一時(shí)間、同一地點(diǎn)，有不同分支的病毒在流行。HA基因的變異可能會(huì)引起病毒抗原性的改變。從分離到的H9N2亞型禽流感毒株中，我們從進(jìn)化樹的每個(gè)分支中挑選一個(gè)能夠體現(xiàn)該分支毒株與其他分支毒株間氨基酸序列的規(guī)律性變化的，且HA蛋白氨基酸序列存在顯著差異的12株代表性分離株（用紅色下劃線標(biāo)出），分別制備單因子血清，進(jìn)行交叉血凝抑制（HI）及雞胚中和試驗(yàn)，并計(jì)算出他們之間的抗原相關(guān)系數(shù)。H9N2 HA蛋白氨基酸差異與病毒抗原性差異的相關(guān)性研究毒株選擇情況進(jìn)化樹見圖6。

HA蛋白氨基酸差異與病毒抗原性差異基本上呈正相關(guān)，當(dāng)病毒間的HA蛋白氨基酸序列差異在3.6%以內(nèi)時(shí)，病毒的抗原性無明顯差異；當(dāng)病毒間的HA蛋白氨基酸序列差異在3.6%～7.0%之間時(shí)，病毒之間的抗原性可能存在差異，此區(qū)域?qū)儆谝粋€(gè)過渡性區(qū)域；當(dāng)病毒間的HA蛋白氨基酸序列差異大于7.0%時(shí)，毒株間均存在較大抗原性差異。

這提示在H9亞型禽流感病毒的免疫工作要注意流感病毒的變異，可對(duì)H9亞型禽流感病毒HA蛋白氨基酸序列的差異性進(jìn)行測(cè)定，估算抗原性的改變，針對(duì)性地選擇疫苗毒株生產(chǎn)疫苗進(jìn)行免疫。

此試驗(yàn)結(jié)論的得出是經(jīng)HA蛋白氨基酸差異與病毒抗原性差異試驗(yàn)數(shù)據(jù)的不完全歸納，不排除例外的情況出現(xiàn)。

4 目前H9N2禽流感免疫中存在的問題

4.1 毒株問題 有些雞場(chǎng)同時(shí)流行不同的毒株，單價(jià)疫苗免疫效果有時(shí)存在漏洞。

4.2 免疫程序問題 主張大日齡（10～15日齡）免疫，但要根據(jù)具體情況定；兩次免疫比一次免疫效果好（1日齡和15日齡）。

4.3 母源免疫問題 種雞的免疫要跟著商品雞走，商品雞流行什么樣的病，種雞就免疫什么樣的疫苗。用母源免疫把商品雞的發(fā)病日齡推到20日齡之后，商品雞的防疫就主動(dòng)多了。

4.4 飼養(yǎng)管理問題 H9N2亞型禽流感病毒，在大多數(shù)情況下屬條件致病性病原，所有使雞群抵抗力下降的因素，都會(huì)放大H9N2所造成的損失！