黃瓜和甜瓜中噻苯隆殘留量檢測方法研究

陸道訓(xùn)

摘要[目的]建立高效液相色譜法測定黃瓜和甜瓜中噻苯隆殘留量的方法。[方法]樣品經(jīng)勻漿處理后用乙腈提取，弗羅里硅土柱層析凈化，用高效液相色譜儀測定。[結(jié)果]該方法的最低檢測濃度為0.01 mg/kg，在0.01～0.50 mg/kg加標(biāo)濃度范圍內(nèi)方法的回收率在75.7%～91.1%，變異系數(shù)0.54%～8.02%。[結(jié)論]該方法具有較高的靈敏度，其準(zhǔn)確度和精密度均可滿足農(nóng)藥殘留分析要求。

關(guān)鍵詞噻苯隆；殘留分析；黃瓜；高效液相色譜

中圖分類號S481+.8文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）36-13070-02

Abstract[Objective] The aim was to establish an HPLC detection method of Thidiazuron residue in cucumber and melon. [Method] The samples of cucumber and melon after homogenates were extracted by acetonitrile， purified by Florisil column， and detected by HPLC. [Result] The minimum detectable concentration of the method was 0.01 mg/kg， and the recovery was 75.7%-91.1% at the concentration from 0.01 to 0.50 mg/kg， and the coefficient of variation was 0.54%-8.02%. [Conclusion] The method has high sensitivity， and its accuracy and precision can satisfy the demand of pesticide residue analysis.

Key wordsThidiazuron； Residue analysis； Cucumber； HPLC

農(nóng)藥的使用對消除農(nóng)作物病、蟲、草害，提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量作出巨大貢獻(xiàn)。但是，隨著農(nóng)藥使用量的不斷加大，農(nóng)藥殘留問題也日益突出。隨著生活水平的提高，人們對農(nóng)藥殘留問題也越來越重視，許多國家制定了農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品中的最高殘留限量（MRLs）。噻苯隆屬苯基脲類衍生物，是近年來國外發(fā)現(xiàn)的一種新型高效植物生長調(diào)節(jié)劑，不僅在棉花種植上用作落葉劑[1-2]，也用作瓜果的膨大劑，提高瓜果的產(chǎn)量及貯運(yùn)性[3-5]。瓜果生產(chǎn)中使用噻苯隆后，瓜果中噻苯隆的殘留問題勢必受到人們的關(guān)注。因此，開展瓜果中噻苯隆的殘留檢測方法研究具有重要的實(shí)際意義。

為此，筆者建立了高效液相色譜法測定黃瓜和甜瓜中噻苯隆殘留量的方法，以期為該農(nóng)藥的殘留檢測提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品與試劑。

噻苯?。兌?6.5%）；乙腈、甲醇為色譜純，乙酸乙酯、正己烷、氯化鈉、無水硫酸鈉、弗羅里硅土等均為分析純。

1.1.2儀器。

高效液相色譜儀（Agilent 1200型，美國Agilent公司）、多功能食品加工機(jī)（SQ2199N型，上海帥佳電子科技有限公司）、調(diào)速多用振蕩器（ZD2型，江蘇金壇國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）、離心機(jī)（TDZ5WS型，湖南長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N1100型，上海愛朗儀器有限公司）。

1.2方法

1.2.1樣品制備。

黃瓜和甜瓜樣品經(jīng)切碎后用多功能食品加工機(jī)勻漿成糊狀。

1.2.2樣品的提取。

稱取制備好的樣品20.00 g于100 ml的離心管中，加入40 ml乙腈，超聲萃取10 min，然后加入500 g氯化鈉，4 000 r/min離心5 min，吸出上層乙腈相，無水硫酸鈉脫水并轉(zhuǎn)入250 ml濃縮瓶中，殘?jiān)僦貜?fù)提取2次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（45 ℃）濃縮至干，待凈化。

1.2.3樣品凈化。

采用柱層析法。層析柱從下往上依次裝入2 cm無水硫酸鈉、5.00 g弗羅里硅土、2 cm無水硫酸鈉，用10 ml甲醇預(yù)淋后，5 ml甲醇轉(zhuǎn)移上樣，用40 ml乙酸乙酯-正己烷（1∶9，V/V）淋洗液淋洗，收集全部淋洗液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（35 ℃）濃縮至干，最后用5 ml甲醇溶解定容，待進(jìn)樣分析。

1.2.4分析測定。

液相色譜檢測條件：色譜柱Agilent HCC18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：乙腈-水（40∶60，V/V），流速0.8 ml/min；檢測波長288 nm；進(jìn)樣體積20 μl。

2結(jié)果與分析

2.1提取溶劑的選擇

由于噻苯隆在甲醇和乙腈中的溶解度都很大，所以分別比較該2種提取劑的效果。結(jié)果表明，分別用相同體積（40 ml）的甲醇和乙腈提取3次，甲醇提取液中雜質(zhì)明顯比乙腈提取液多，色素顏色很深，且經(jīng)過柱層析凈化后仍有很多雜質(zhì)，干擾和影響噻苯隆的定量分析。而乙腈提取液經(jīng)過凈化后，基本沒有干擾分析測定的雜質(zhì)，且回收率均在75%以上。因此，選擇乙腈為提取劑。

2.2凈化方法的確定

樣品凈化方法有多種，常用的是柱層析凈化，因此，重點(diǎn)考查柱層析凈化方法。以弗羅里硅土為吸附劑，以乙酸乙酯和正己烷混合溶液為淋洗劑，比較不同比例（4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶10）的乙酸乙酯和正己烷混合溶液對樣品凈化效果和回收率的影響。結(jié)果表明，當(dāng)乙酸乙酯和正己烷比例為1∶9時，凈化效果好且回收率高（大于75%）。乙酸乙酯和正己烷比例大于1∶9時凈化效果較差，色譜圖中有干擾分析測定的雜峰；乙酸乙酯和正己烷比例為0∶10時，色譜圖中雜質(zhì)峰較少，但噻苯隆的回收率低（小于50%）。因此，選擇乙酸乙酯和正己烷比例為1∶9的淋洗劑。

2.3色譜條件的確定

紫外掃描結(jié)果表明噻苯隆的最大吸收波長為288 nm，因此，選擇288 nm為測定波長。以乙腈和水為流動相，比較流動相

不同比例和流速對色譜分離的影響。結(jié)果表明，

當(dāng)乙腈和水比例為40∶60（V/V）、流速為0.8 ml/min時，目標(biāo)化合物噻苯隆的保留時間為13.1 min左右，其色譜響應(yīng)較高（圖1），目標(biāo)化合物與雜質(zhì)的分離也較好，雜質(zhì)峰不干擾噻苯隆的定量（圖2）。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別配制0、0.05、0.10、0.20、1.00 mg/L的噻苯隆標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“1.2.4”色譜條件下進(jìn)樣測定。以濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。噻苯隆在0～1 mg/L濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度成良好的線性關(guān)系（圖3）。

2.5方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

從表1可見，分別在勻漿后的空白黃瓜和甜瓜樣品中添加0.01、0.10、0.50 mg/kg噻苯隆，用上述方法提取、凈化、測定，計算回收率和變異系數(shù)。結(jié)果表明，噻苯隆的最低檢出量為0.2 ng，最小檢測濃度（LOQ）為0.01 mg/kg。目前，我國尚無黃瓜和甜瓜中噻苯隆的MRL值限量標(biāo)準(zhǔn)，歐盟規(guī)定水果、蔬菜中噻苯隆的MRL值為0.02 mg/kg；韓國規(guī)定葡萄中噻苯隆的MRL值為0.20 mg/kg[6]。該方法的最低檢測濃度均低于上述限量標(biāo)準(zhǔn)，可見，該方法具有較高的靈敏度。

在加標(biāo)濃度范圍內(nèi)，該方法的回收率在75.7%～911%，變異系數(shù)0.54%～8.02%。方法的回收率較高，變異系數(shù)較小。因此，方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析要求。

3結(jié)論

建立了高效液相色譜法測定黃瓜和甜瓜中噻苯隆殘留量的方法。黃瓜和甜瓜樣品經(jīng)勻漿處理后用40 ml乙腈超聲提取3次，提取液濃縮干后，用弗羅里硅土柱層析凈化，淋洗液為40 ml乙酸乙酯∶正己烷（1∶9，V/V）。淋洗液濃縮干后用甲醇定容，用高效液相色譜儀測定。

加標(biāo)回收試驗(yàn)表明，該方法的最低檢測濃度為0.01 mg/kg，在0.01～0.50 mg/kg加

標(biāo)濃度范圍內(nèi)，方法的回收率在75.7%～91.1%，變異系數(shù)054%～8.02%。方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析要求。

參考文獻(xiàn)

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