秋水健脾散中β—谷甾醇和鳥苷的HPLC法測(cè)定

段偉偉 何勝利

【摘 要】目的：采用HPLC法測(cè)定秋水健脾散中β-谷甾醇和鳥苷的含量。方法：Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m）；流速：0.8 mL·min-1；流動(dòng)相為甲醇-0.2%醋酸（75：25），檢測(cè)波長：254 nm。結(jié)果：β-谷甾醇和鳥苷分別在0.0412～0.8240μg（r=0.9994）、0.0138～0.2840μg（r=0.9995）進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率分別為96.72%、98.63%，RSD（n=6）分別為1.21%、1.50%。結(jié)論：該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好。

【關(guān)鍵詞】秋水健脾散；β-谷甾醇；鳥苷；梯度洗脫法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0741-02

秋水健脾散為中藥復(fù)方制劑，源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第九冊(cè)，由姜半夏、蓮子等十六味藥物組成。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)個(gè)別藥味進(jìn)行了顯微鑒別，未對(duì)方中的任何藥味進(jìn)行含量測(cè)定，為保證產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效[1-2]，本文采用HPLC法對(duì)秋水健脾散中β-谷甾醇和鳥苷進(jìn)行含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、可靠、方便、快速。

1 試藥與儀器

LC-10ATVP型高效液相色譜儀；ANASTAR色譜數(shù)據(jù)工作站；β-谷甾醇對(duì)照品（批號(hào)為110851-200605）購于中國食品藥品檢定研究院；鳥苷對(duì)照品（批號(hào)為110722-200309，純度≥98%）購于上海醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司；秋水健脾散（規(guī)格：每瓶裝3g；批號(hào)為130906，1300915，130919）購于泉州中僑（集團(tuán)）股份有限公司藥業(yè)公司；甲醇、醋酸均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 β-谷甾醇和鳥苷的含量測(cè)定[3-7]

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m）；流動(dòng)相為甲醇-0.2%醋酸（75：25）；檢測(cè)波長：254 nm；流速為0.8 mL·min-1。在此條件下β-谷甾醇和鳥苷與其他組分分離效果良好，以鳥苷計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于2000。

2.1.2 對(duì)照品混合溶液的制備

精密稱取β-谷甾醇對(duì)照品和鳥苷對(duì)照品各適量，加65%甲醇制成對(duì)照品混合溶液（β-谷甾醇為0.0412 mg·mL-1，鳥苷為0.0138 mg·mL-1）。

2.1.3 供試品溶液的配制

取本品適量，研細(xì)，取約4.0 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加65%甲醇至刻度，超聲處理（300W，20kHz）15 min， 用65%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按秋水健脾散處方比例稱取適量除姜半夏的其余藥味，按秋水健脾散的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺姜半夏的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺姜半夏的陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取10 uL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與β-谷甾醇對(duì)照品和鳥苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰。

2.1.5 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品混合溶液1，5，10，15，20 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，β-谷甾醇、鳥苷量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。β-谷甾醇：Y=1.6891×106X-562.4，r=0.9994；鳥苷：Y=5.0164×106X+169.8，r=0.9995。結(jié)果表明β-谷甾醇在0.0412～0.8240μg進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好；鳥苷在0.0138～0.2840μg進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.6 精密度考察

取對(duì)照品混合溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，按以上色譜條件測(cè)定β-谷甾醇和鳥苷的峰面積，結(jié)果表明，儀器具有良好的精密度，β-谷甾醇和鳥苷的RSD分別為0.39%、0.42%。

2.1.7 重復(fù)性考察

取同一批樣品，按上述方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定其含量，β-谷甾醇和鳥苷的RSD分別為0.63%、0.66%。結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.1.8 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，在放置0，1，2，4，6，8 h后精密吸取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積值，β-谷甾醇和鳥苷的RSD分別為0.55%、0.81%，供試品溶液8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量（β-谷甾醇含量0.53 mg·g-1、鳥苷含量0.18 mg·g-1） 的同一批樣品適量，研細(xì)，取約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加對(duì)照品混合溶液25mL、65%甲醇25mL，超聲處理（300W，20kHz）15 min，， 用65%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得加樣供試品溶液。精密吸取加樣供試液10 μL，按上述含量測(cè)定方法測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率，β-谷甾醇和鳥苷平均加樣回收率分別為96.72%、98.63%，RSD（n=6）分別為1.21%、1.50%。結(jié)果表明本方法回收率良好。

2.2 樣品測(cè)定

取3批樣品按上述測(cè)定方法測(cè)定β-谷甾醇和鳥苷的含量，β-谷甾醇分別為0.53、0.47、0.56mg·g-1，鳥苷分別為0.18、0.17、0.21mg·g-1。

3 討論

檢測(cè)波長的選擇：分別取β-谷甾醇對(duì)照品和鳥苷對(duì)照品各適量，加流動(dòng)相溶解制成每1 mL含0.05 mg的溶液，按紫外一可見分光光度法在200～400 nm波長處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果大葉茜草素和羥基茜草素對(duì)照品均在254 nm處有最大吸收，故選取254 nm作為秋水健脾散中β-谷甾醇和鳥苷含量測(cè)定的檢測(cè)波長。

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