桃金娘果實(shí)提取物抗氧化活性研究

楊為海等

摘 要 以去除種子后的桃金娘果實(shí)為試驗(yàn)材料，分別采用等體積的水與體積分?jǐn)?shù)80%甲醇進(jìn)行提取，測(cè)定2種提取物的總酚與總黃酮含量，并對(duì)2種提取物的DPPH自由基與ABTS自由基清除能力以及總抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，桃金娘果實(shí)的2種提取物均具有不同程度的多酚含量與抗氧化活性，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取物的總酚與總黃酮含量、DPPH與ABTS自由基清除能力以及總抗氧化能力均顯著高于水提取物。研究結(jié)果表明，桃金娘果實(shí)多酚物質(zhì)具有良好的抗氧化活性。

關(guān)鍵詞 桃金娘果實(shí)；多酚；抗氧化活性；清除自由基

中圖分類號(hào) S667.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Antioxidant Activity of Rhodomyrtus tomentosa Fruit Extracts

YANG Weihai1，2， LIU Suifei3， ZOU Minghong1，2， ZENG Hui1，2，

ZHANG Hanzhou1，2， LU Chaozhong1，2*

1 South Subtropical Crops Research Institute， CATAS， Zhanjiang， Guangdong 524091， China

2 Key Laboratory of Tropical Fruit Biology， Ministry of Agriculture， Zhanjiang， Guangdong 524091， China

3 Jiang Xi Agricultural Engineering College， Zhangshu， Jiangxi 331200， China

Abstract The contents of the total phenolics and total flavonoids from the extracts of Rhodomyrtus tomentosa fruit without seeds were extracted with the same volume solvents water and 80% methanol and quantified. The antioxidant activities of the two extracts were screened using the total antioxidant capacity and the scavenging activities of DPPH and ABTS radicals. The results showed that both extracts of R. tomentosa fruit exhibited varying degrees of the polyphenol content and the antioxidant activity， the extractives from the 80% methanol exhibited significant higher contents of total phenolics， total flavonoids， stronger total antioxidant capacity and radical scavenging abilities on DPPH and ABTS than that from water. The results revealed that the polyphenol extractives from R. tomentosa fruit had good antioxidant activity.

Key words Rhodomyrtus tomentosa fruit；Polyphenols；Antioxidant activity；Radical scavenging

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.06.020

桃金娘[Rhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk]，又稱桃娘、崗稔、山稔、稔子、豆稔等，系桃金娘科（Myrtaceae）桃金娘屬（Rhodomyrtus）常綠小灌木，主要分布于中國(guó)廣東、廣西、福建、臺(tái)灣、海南等地。桃金娘的根、葉和果均可入藥，是一種重要的藥用野生植物資源，具有較高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

桃金娘果實(shí)為漿果，成熟時(shí)果皮呈紫黑色，果肉則呈紫紅色，肉質(zhì)多汁，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有良好的營(yíng)養(yǎng)與保健功能。研究表明，桃金娘果實(shí)不僅富含人體所需的維生素、氨基酸、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、糖類等營(yíng)養(yǎng)成分[1-3]，而且含有黃酮苷[4-5]、花色苷[6-9]以及植物多糖類[10]等生物活性物質(zhì)。然而，有關(guān)桃金娘果實(shí)酚類物質(zhì)的抗氧化活性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文以去除種子后的桃金娘果實(shí)為材料，采用水與體積分?jǐn)?shù)80%甲醇為溶劑獲得提取物，研究了2種提取物的總酚和總黃酮含量及其抗氧化活性的差異，旨在為開(kāi)發(fā)和利用桃金娘果實(shí)這一傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)保健食品資源提供理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試桃金娘果實(shí)：已成熟的桃金娘果實(shí)采自廣東省湛江市中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所種質(zhì)資源圃，將種子分離后，于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

主要儀器：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV-1200，上海美譜達(dá)儀器有限公司；電子分析天平ML204，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；高速冷凍離心機(jī)Heraeus Multifuge X1R，德國(guó)Thermo Fisher Scientific公司。

主要試劑：Folin-Cioealteu試劑、沒(méi)食子酸、蘆丁、Trolox（水溶性維生素E類似物）、DPPH、ABTS、TPTZ，均購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司。

1.2 方法

1.2.1 提取物制備 將桃金娘果實(shí)去除種子后，于研缽中加液氮研磨成干粉狀，準(zhǔn)確稱量2.0 g樣品至50 mL離心管中，加入20 mL提取溶劑（蒸餾水或80%甲醇），80 ℃水浴中提取30 min后，于4 ℃下離心（2 200×g）15 min，取上清液。沉淀物再用20 mL提取溶劑重復(fù)提取一次，合并2次的上清液，定容至40 mL，即為等體積的水提取物和80%甲醇提取物。

1.2.2 總酚含量測(cè)定 總酚含量參照福林酚法[11]進(jìn)行測(cè)定，以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將0.5 mL提取物與2.5 mL 10% 的福林酚試劑混勻，黑暗中孵育5 min后，再加入2.0 mL 20%的Na2CO3，30 ℃水浴中避光反應(yīng)1 h，于765 nm處測(cè)吸光值。

1.2.3 總黃酮含量測(cè)定 總黃酮含量測(cè)定參照Benamar[12]的方法，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將0.5 mL提取物與0.5 mL 5%的NaNO2溶液混勻，反應(yīng)5 min后加入0.5 mL 10% 的AlCl3，靜置6 min后，再加入1.5 mL 1.0 mol/L NaOH，40 ℃水浴中避光孵育15 min，于510 nm處測(cè)吸光值。

1.2.4 抗氧化活性測(cè)定 DPPH自由基清除能力：參照Vieira等[13]的方法，稍加改動(dòng)。取2.9 mL現(xiàn)配的DPPH溶液，于517 nm下測(cè)定初始吸光值（t0），再加入0.1 mL提取物，于30 ℃水浴中避光反應(yīng)15 min后，立即測(cè)定其吸光值（t15）。樣品的DPPH自由基清除率（%）按[100 -（t15/t0）×100]計(jì)算，用Trolox為標(biāo)準(zhǔn)物制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其抗氧化活性（mmol TE/g FW）。

ABTS自由基清除能力：參照Re等[14]的方法，略作修改。將現(xiàn)配的ABTS反應(yīng)液用80%乙醇稀釋至734 nm處的吸光值為0.70±0.02，作為初始吸光值（t0）。取0.1 mL提取物與2.9 mL稀釋了的ABTS反應(yīng)液混勻，30 ℃水浴中避光反應(yīng)7 min后，立即測(cè)定其吸光值（t7）。樣品的ABTS自由基清除率（%）按[100-（t7/t0）×100]計(jì)算，以Trolox為標(biāo)準(zhǔn)物制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其抗氧化活性表示為mmol TE/g FW。

FRAP總抗氧化能力：參照Benzie等[15]的方法，略加改動(dòng)。取0.15 mL提取物與2.85 mL 現(xiàn)配的FRAP試劑混勻，37 ℃水浴中避光反應(yīng)20 min后，于593 nm下測(cè)定其吸光值。以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)物制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其總抗氧化能力，單位表示為Mmol FeSO4/g FW。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均以3個(gè)重復(fù)測(cè)定值的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并運(yùn)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件按方差分析（ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，各處理組間的差異比較用LSD法檢驗(yàn)，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 桃金娘果實(shí)不同提取物的總酚和總黃酮含量

以等體積的水和體積分?jǐn)?shù)80%甲醇為提取溶劑，測(cè)得從桃金娘果實(shí)中提取得到的總酚（沒(méi)食子酸等效物）和總黃酮（蘆丁等效物）含量見(jiàn)表1。表1結(jié)果表明，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取物的總酚和總黃酮含量均顯著高于水提取物（p<0.05），分別是后者的2.26倍和1.95倍，說(shuō)明體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶劑的提取效果好。

2.2 桃金娘果實(shí)不同提取物的抗氧化活性

2.2.1 DPPH自由基清除能力 DPPH自由基是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的有機(jī)自由基，其醇溶液為特征的紫色團(tuán)吸收峰，具有孤對(duì)電子，能夠與抗氧化劑提供的電子配對(duì)結(jié)合，使DPPH的特征紫色變淺，因此可用于抗氧化劑清除自由基能力的評(píng)價(jià)。本研究中，以標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑Trolox為等效物的桃金娘果實(shí)2種溶劑提取物的DPPH自由基清除能力如表2所示。表2表明，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取物的DPPH自由基清除能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.52倍。

2.2.2 ABTS自由基清除能力 ABTS經(jīng)氧化后生成相對(duì)穩(wěn)定的藍(lán)綠色的ABTS+水溶性自由基?？寡趸瘎┡cABTS自由基反應(yīng)后使其溶液褪色，特征吸光值降低。溶液褪色越明顯，則表明所檢測(cè)物質(zhì)的總抗氧化能力越強(qiáng)。本研究以Trolox為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算桃金娘果實(shí)2種溶劑提取物的ABTS自由基清除能力，結(jié)果見(jiàn)表2。表2表明，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取物的ABTS自由基清除能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.40倍。

2.2.3 總抗氧化能力 FRAP法是一種快速簡(jiǎn)便、易于操作、重復(fù)性好的測(cè)定總抗氧化能力的方法。在一定條件下，待測(cè)生物活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+的能力越大，其抗氧化活性越強(qiáng)。本研究是以Fe2+當(dāng)量計(jì)算桃金娘果實(shí)不同提取物的總抗氧化能力，結(jié)果見(jiàn)表2。表2表明，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取物的總抗氧化能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.51倍。

3 討論與結(jié)論

活性氧代謝失調(diào)是自由基大量產(chǎn)生的主要途徑。自由基生物學(xué)研究認(rèn)為，許多疾病的發(fā)生與自由基導(dǎo)致的大分子功能障礙如蛋白質(zhì)修飾、脂質(zhì)過(guò)氧化以及DNA損傷等有關(guān)[16]。植物多酚類物質(zhì)是天然的抗氧化劑，具有抗氧化、抑菌、抗致突變、抗衰老、抗炎癥等活性[17]。攝取天然抗氧化劑可有效地協(xié)助維持體內(nèi)自由基代謝的平衡，減少或防止相關(guān)疾病的發(fā)生[18]。Geetha等[19-20]研究了桃金娘葉片的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)桃金娘葉片的乙醇提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，桃金娘果實(shí)提取物中含有較高的總酚與總黃酮含量，含量分別達(dá)到1.74～3.94 mg GaA/g FW與1.14～2.22 mg RU/g FW，說(shuō)明桃金娘果實(shí)提取物含有較為豐富的多酚類化合物，并且對(duì)DPPH與ABTS自由基具有較好的清除效果，分別達(dá)到26.66～40.40 μmol TE/g FW與32.57～45.76 μmol TE/g FW，同時(shí)通過(guò)總抗氧化能力的測(cè)試，均能表明桃金娘果實(shí)提取物具有較好的抗氧化活性。然而，對(duì)于桃金娘果實(shí)提取物中的活性成分及其作用機(jī)理，還有待于進(jìn)一步研究。

不同溶劑制備的提取物，其抗氧化活性顯著不同，這主要是與提取劑的極性有關(guān)[21]。不同溶劑對(duì)桃金娘果實(shí)中抗氧化物質(zhì)的溶解能力不同，所獲得的提取物中總酚和總黃酮含量顯著不同，以致不同溶劑提取物的清除DPPH和ABTS自由基能力以及總抗氧化能力的差異顯著。本研究結(jié)果表明，以體積分?jǐn)?shù)80%甲醇為提取溶劑獲得的桃金娘果實(shí)提取物在總酚與總黃酮含量以及清除DPPH和ABTS自由基能力、總抗氧化能力等方面均顯著高于以水為提取溶劑獲得的提取物，說(shuō)明體積分?jǐn)?shù)80%甲醇比水能更好地從桃金娘果實(shí)中獲取抗氧化物質(zhì)。此外，桃金娘果實(shí)提取物的抗氧化活性高低與其所含的酚類物質(zhì)含量有關(guān)，至于相關(guān)的顯著性如何，還有待于進(jìn)一步測(cè)試。

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責(zé)任編輯：黃 艷