中藥羅漢果對小鼠急性毒性和致突變性研究

艾麗萍　高順

摘要 [目的]研究羅漢果水提取物在小鼠體內(nèi)的急性毒性及致畸變性效應(yīng)，為羅漢果臨床用藥安全提供理論依據(jù)。[方法]對小鼠進(jìn)行羅漢果水提取物最大給藥量急性毒性試驗(yàn)，觀察小鼠給藥后的體征及生理變化，進(jìn)行血液檢查以及剖檢；采用小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)進(jìn)行致畸變性檢測。[結(jié)果]在最大給藥量90 000 mg/kg劑量下，小鼠無明顯中毒癥狀，生理指標(biāo)、血液與空白對照組無顯著差異，內(nèi)臟器官解剖無病理變化；微核試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。[結(jié)論]羅漢果水提取物無急性毒性以及致突變性。

關(guān)鍵詞 羅漢果水提取物；最大給藥量；急性毒性；微核試驗(yàn)

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）03-00774-02

Abstract [Objective] To study the acute toxicity and mutagenicity of Siraitia grosvenorii extract in mice. [Method] Mice stomach was irrigated with the maximum dosage in testing acute toxicity of Siraitia grosvenorii extract. The influence of Siraitia grosvenorii extract on the sign and physiology in mice after administration was observed and recorded. Autopsy and blood tests were done in mice. Micronucleus test in polychromatophil cells was performed to test mutagenicity of Siraitia grosvenorii extract. [Result] In the maximum dosage （90 000 mg/kg）， the mice had not obvious symptoms of poisoning and pathological changes of internal organs. Physiological and blood indexes was normal compared to the control group. Micronucleus test was the negative reaction. [Conclusion] The Siraitia grosvenorii extract did not show the acute toxicity and mutagenicity.

Key words Siraitia grosvenorii extract； Maximum dosage； Acute toxicity； Micronucleus test

使用抗生素控制畜禽疾病不僅容易產(chǎn)生抗藥性，而且藥物在食品中的殘留可威脅到人類健康，中藥因其毒性低、殘留量少等優(yōu)點(diǎn)成為近年來飼料添加劑的研究熱點(diǎn)[1]。中藥羅漢果性涼、味甘，歸肺、大腸經(jīng)，有清熱解毒、潤肺止咳、涼血滑腸的功效。研究表明羅漢果提取物具有抑菌作用[2-3]、增強(qiáng)免疫力[4-5]、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)[6-8]、抗氧化[9]、保護(hù)肝臟[10]、鎮(zhèn)咳平喘[11-12]等功能，臨床上可用于治療高血壓、肺結(jié)核、哮喘等多種呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)疾病。筆者通過羅漢果水提取物急性毒性和微核試驗(yàn)，研究羅漢果對小鼠的毒性和致畸變性，旨在為中藥羅漢果在飼料添加劑中的應(yīng)用和臨床用藥安全提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。小鼠由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，昆明種，體重18～22 g，雌雄各半。購回后適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.2

試驗(yàn)材料。羅漢果購自天津中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。

1.2 方法

1.2.1

樣品的制備。干燥羅漢果破碎后稱取120 g加入400 ml蒸餾水，沸水浸提30 min，濾布過濾煎液，藥渣中再次加入400 ml蒸餾水煎煮20 min，合并2次煎液，濃縮體積至120 ml，煎液最終濃度為1 g/ml（1 g生藥/ml）。

1.2.2

急性毒性試驗(yàn)。

1.2.2.1

預(yù)試驗(yàn)?！?.2.1”中樣品用蒸餾水配制成1.0和0.1 g/ml濃度溶液。20只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)平均分為2組。禁食（不禁水）12 h后，分別用1.0 g/ml高濃度和0.1 g/ml低濃度溶液灌胃給藥1次，給藥體積均為0.03 ml/g。給藥后各組小鼠均常規(guī)飼養(yǎng)7 d，觀察并記錄小鼠在10%和100%的藥物濃度下死亡數(shù)。如果小鼠無死亡，急性毒性試驗(yàn)中可使用最大給藥量。

1.2.2.2

最大給藥量試驗(yàn)。小鼠40只，雌雄各半，常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后按照體重與性別均分為試驗(yàn)組與空白對照組。首次灌胃前禁食（不禁水）12 h。試驗(yàn)組小鼠以羅漢果提取物最大濃度1 g/ml、最大體積0.03 ml/g灌胃，每隔4 h給藥1次，共3次?？瞻讓φ战M給予等體積生理鹽水。給藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察記錄7 d內(nèi)小鼠體重、進(jìn)食、活動(dòng)、精神等反應(yīng)情況。7 d后測定小鼠血液指標(biāo)，剖解觀察主要臟器（肝、心、脾、腎）的變化。取心、肝、脾、腎，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干后稱重，計(jì)算各臟器指數(shù)（各臟器重量與體重之比）。

1.2.3

微核試驗(yàn)。小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)平均分為5組。分別設(shè)羅漢果水提取物1.0、0.5、0.1 g/kg 3個(gè)劑量組。陽性對照組腹腔注射環(huán)磷酰胺，注射體積50 mg/kg。陰性對照組灌服同體積蒸餾水。給藥2 次，間隔24 h。第2次給藥后6 h，將各組小鼠處死，迅速取后肢股骨，小牛血清沖洗骨髓腔，濾膜過濾取濾液制骨髓涂片，自然晾干后甲醇固定10 min，姬姆薩染色20 min，細(xì)胞涂片置于油鏡下觀察。每只小鼠計(jì)數(shù)1 000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞中含微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅漢果水提取物的急性毒性試驗(yàn)

以1 g/ml羅漢果水提液按照最大給藥體積對小鼠灌胃后，未觀察到明顯的中毒癥狀，無小鼠死亡。因?yàn)闊o法測定半數(shù)致死量，所以急性毒性試驗(yàn)可使用最大給藥量，小鼠最大給藥量（折合成生藥）為90 000 mg/kg。

2.2 一般體征觀察

3次給藥后，除給藥當(dāng)天小鼠少動(dòng)且進(jìn)食、飲水稍有減少外，在7 d的觀察期內(nèi)試驗(yàn)組小鼠活動(dòng)正常、反應(yīng)靈敏、進(jìn)食飲水、尿便等均正常，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，與空白對照組無明顯差異。試驗(yàn)組與空白對照組小鼠體重均呈增長趨勢，無顯著性差異（P>0.05）（表1）。

3 結(jié)論與討論

羅漢果具有較大的綜合開發(fā)潛力，應(yīng)對羅漢果根、莖、葉等組織進(jìn)行全面研究和開發(fā)利用，最大限度地發(fā)揮其醫(yī)藥價(jià)值，不應(yīng)僅局限于果實(shí)。該試驗(yàn)中羅漢果水提取物在最大給藥劑量90 000 mg/kg下未導(dǎo)致小鼠死亡，因?yàn)榘霐?shù)致死量（LD50）>5 g /kg時(shí)藥物實(shí)際屬于無毒性物質(zhì)，表明羅漢果急性毒性極低，這與以前研究報(bào)道相符[6]；致突變試驗(yàn)結(jié)果呈陰性，說明羅漢果水提取物無致突變性，但仍要考慮其潛在的遺傳毒性[13]、慢性毒性和胚胎發(fā)育毒性[14-15]，關(guān)于羅漢果的安全性評價(jià)有待進(jìn)一步研究。綜上所述，羅漢果無急性毒性，可較安全地應(yīng)用于臨床治療試驗(yàn)，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。

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