止嗽青果丸中黃芩苷含量的HPLC法測定

張秀麗 王玉紅

【摘 要】目的：制定止嗽青果丸質(zhì)量控制方法。方法：色譜柱為KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇-0.2%磷酸（50：50），流量為1.0m l·min-1；檢測波長280nm；柱溫為28℃。結(jié)果：黃芩苷進(jìn)樣量在0.04044～0.8088μg （r=0.9999）范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均回收率99.14%，RSD=0.24%（n=6）；結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于止嗽青果丸的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)健詞】HPLC法；止嗽青果丸；黃芩苷

【中圖分類號】R286 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）04-2042-01

Simultaneous Determination of Baicalin in Zhishuoqingguo pills by HPLC

Zhang Xiuli， Wang Yuhong

（Chaoyang Institute for Food and Drug Control，Chaoyang，122000）

【Abstract】Objective：To establish an HPLC method for the determinadtion of Baicalin in Zhishuoqingguo pills.Method：A Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm） column was used with methanol-0.2%phosphoric acid（50：50），The flow rate was 1.0ml·min-1 ， The detection wavelength was set 280nm，and the column temparature was 28℃；Rusult：Baicalin showed good linearity in the range of Baicalin was0.04044～0.8088μg （r=0.9999），The average recovery rates were 99.14%， RSD=0.24%（n=6）；Conclusion：The method is accurate with a good reproducibility ，and suitable for quality control of Zhishuoqingguo pills。

【Key words】HPLC；Zhishuoqingguo pills；Baicalin

止嗽青果丸收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊[1]，本品為丸劑，主要成分為西青果 麻黃 苦杏仁、黃芩、石膏等14味藥，用于由風(fēng)寒引起的咳嗽痰盛，胸悶氣滿，氣短作喘，口干舌燥等癥。具有宣肺化痰，止咳定喘等作用。由于原標(biāo)準(zhǔn)久未更新，無法控制藥品質(zhì)量，故筆者建立了用高效液相色譜法[2-7]測定黃芩苷的含量的方法。

1儀器與試藥

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（包括LC-2010型紫外檢測器， LC solution色譜工作站），島津UV-2550紫外分光光度儀，黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-200815）；止嗽青果丸（批號：130311， 130312， 130511）甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2實驗方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為KromasilC18（4.6mm×250mm；5μm）；流動相為甲醇-0.2%磷酸（50：50）；流量1.0mL·min-1；柱溫為28℃；檢測波長280nm；，進(jìn)樣量為10μl；理論板數(shù)按黃芩苷計算不低于4000。

2.2對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品經(jīng)五氧化二磷減壓干燥18小時，精密稱取10.11mg置50 ml容量瓶中，加70%乙醇30ml超聲使溶解，再加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1 ml至10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含黃芩苷20.22μg的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備 取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，取約0.4g，精稱，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50ml，稱定重量，超聲處理（260HZ，30W）30分鐘，放至室溫，再稱定重量，用70%乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過即得供試品溶液。

2.4陰性對照溶液的制備 取缺黃芩的陰性對照樣品，按“2.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.5方法專屬性實驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μl，按“2.1”色譜條件注入液相色譜儀，依照“2.1”色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果黃芩苷峰形對稱，其它雜質(zhì)無干擾，見圖1。

2.6線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述黃芩苷對照品溶液（20.22μg ·g-1）1μl，5μl， 10μl，15μl，20μl，注入液相色譜儀。按照“2.1”色譜條件進(jìn)行測定測定峰面積，以對照品進(jìn)樣量（X）對峰面積積分值（Y）進(jìn)行線性回歸處理，得黃芩苷回歸方程為Y=3342208X-15731，r=0.9999。黃芩苷在0.04044～0.8088μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7精密度試驗 精密吸取濃度為20.22μg ·g-1的黃芩苷對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測定黃芩苷平均峰面積為1342484，RSD為0.21%，表明該方法精密度良好。

2.8重復(fù)性試驗 取批號為130311的供試品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定。黃芩苷的平均含量為4.3938mg·ml-1，RSD為0.73%。表明該方法有良好的重復(fù)性。

2.9穩(wěn)定性試驗 分別精密吸取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，12，24h進(jìn)樣10μl，按供試液項下測定黃芩苷，統(tǒng)計結(jié)果表明，黃芩苷峰面積的RSD為0.32%。表明樣品在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.10加樣回收率試驗 稱取已知含量的供試品（批號：130311，黃芩苷含量4.3938mg·g-1）6份，每份0.2g ，精密稱定，分別加入對照品0.8800 mg，按“2.3”項制備，進(jìn)行含量測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率為99.14%，RSD為0.24%。結(jié)果表明，本法具有良好的加樣回收率。見表1。

2.11樣品測定 取三批樣品，分別制備供試品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積分值，按外標(biāo)法計算樣品中黃芩苷的含量，結(jié)果見表2。

3討論

3.1檢測波長的選擇：取2.2項下的對照品溶液，以相應(yīng)的溶劑為空白，在200～ 400nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示黃芩苷在210 nm與280 nm有最大吸收，由于在210 nm有末端吸收，所以選280nm為黃芩苷的測定波長.

3.2提取溶劑的選擇；在提取樣品主成分時分別采用50%乙醇、70%乙醇與乙醇作為溶劑，對三種溶劑的提取率進(jìn)行比較，結(jié)果表明用70%乙醇作為溶劑提取率最高。

3.3 提取方式的選擇：，采用70%的乙醇對樣品進(jìn)行浸漬過夜提取法、加熱回流提取與超聲提取法進(jìn)行了對比，結(jié)果顯示超聲法提取法提取率明顯高于浸漬法與加熱回流提取法，而且節(jié)省時間，故采用超聲法進(jìn)行提取。

3.4色譜柱的選擇：分別考察KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱與SunFireTM C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱對主成分的分離情況，結(jié)果表明KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱對黃芩苷的分離效果優(yōu)于SunFireTM C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，故選用KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱。

3.5流動相的選擇：參照中國藥典黃芩藥材黃芩苷含量測定方法，流動相采用甲醇-水-磷酸（47：53：0.2），結(jié)果黃芩苷色譜峰與相鄰色譜峰未達(dá)到基線分離。由于止嗽青果丸中成分復(fù)雜，筆者參考多方文獻(xiàn)，經(jīng)多次試驗，選用流動相甲醇-0.2%磷酸溶液（50：50）進(jìn)行分離，峰形好，黃芩苷色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5，理論板數(shù)很高。

參考文獻(xiàn)

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