燈盞花素注射液安全性試驗(yàn)研究

梁彥杰 蘇首磊

【摘 要】目的：對燈盞花素注射液進(jìn)行肌肉刺激性、血管刺激性、全身過敏性及溶血性實(shí)驗(yàn)，以評(píng)價(jià)其用藥的安全性。方法：肌肉刺激性實(shí)驗(yàn)，主要觀察2只家兔注射燈盞花素注射液后48 h的變化。血管刺激性實(shí)驗(yàn)，主要觀察3只家兔連續(xù) 5 d注射燈盞花素注射液的變化。全身過敏實(shí)驗(yàn)，6只豚鼠隔日3次腹腔注射燈盞花素注射液，于首次致敏后第14d和第 21d分別靜脈注射燈盞花素注射液，觀察 30 m i n內(nèi)動(dòng)物的變化。溶血性實(shí)驗(yàn)，觀察本品在4 h內(nèi)有無溶血和聚集現(xiàn)象。結(jié)果：燈盞花素注射液對家兔股四頭肌無刺激作用，對家兔耳緣靜脈無刺激作用，對豚鼠未見過敏反應(yīng)，家兔無溶血現(xiàn)象。結(jié)論：燈盞花素注射液的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其安全可靠 。

【關(guān)鍵詞】燈盞花素注射液；安全性

【文章編號(hào)】1004-7484（2014）04-1913-02

Safety Evaluation of Dengzhanhuasu Injection

Liang Yanjie ，Su Shoulei

（Shineway Pharmaceutical Co， Ltd， Hebei 051430， China）

【Abstract】Objective：To evaluate the reliability of Dengzhanhuasu injection by testing the muscle stimulation， vessel stimulation， hypersensitivity of total boby and haemolytic test . Methods：In the muscle stimulation test， two rabbits were observed at 48 hours after Dengzhanhuasu injection； in the vessel stimulation， three rabbits were observed at 5 days afer Dengzhanhuasu injection or saline， respectively ； in hypersensitivity of total boby， 6 guinea pigs were injected by Dengzhanhuasu in abdominal cavity in 3 times， t he last two were 14d and 21 d after first medication； in the haemolytic test， hemolysis and coagulation were mainly observed . Results：The Dengzhanhuasu injection has no stimulation to muscle and ear vein of rabbit， t he rabbits have no allergic reaction as contrast and without hemolytic reaction . Conclusion：Dengzhanhuasu injection was safety and reliable based on the animal experiment .

【Keyword s】Dengzhanhuasu injection； Safety evaluation

燈盞花素注射液為燈盞花全草中提取的黃酮類活性成分的制劑，其主要成分為黃酮，燈盞花乙素，燈盞花甲素[1]，具有輕度強(qiáng)心，擴(kuò)張微細(xì)血管，提高心肌功能，改善心腦供血，降低白細(xì)胞自發(fā)活化率等藥理作用[2]，臨床上主要應(yīng)用于治療心腦血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、腎病、肺源性心臟病、慢性乙型肝炎、偏頭痛等[3-4]，均有較好的療效 ，但也常見不良反應(yīng)的報(bào)道[5-7] 。為了其臨床用藥的安全性，筆者對燈盞花素注射液進(jìn)行了有關(guān)安全性試驗(yàn)研究 ，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料

1.1 藥品與試劑

燈盞花素注射液（5ml：20mg），批號(hào)130301A1，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司 ； 5%卵蛋白液（將新鮮雞蛋取蛋清用0.9% 氯化鈉注射液按1：20配制，現(xiàn)用現(xiàn)配）；0.9%氯化鈉注射液，批號(hào)130812707，石家莊四藥有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 豚鼠，體重 300～350g ；家兔 ，體重2.0～2.5 kg，均由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（冀）2013-1-003。

2 方法

2.1肌肉刺激性實(shí)驗(yàn)[7]

取健康家兔 2只 ，以無菌操作法分別在其左右兩腿股四頭肌內(nèi)各注入供試品 1.0 ml/只 ，注射后 48 h處死動(dòng)物 ，解剖取出股四頭肌 ，縱向切開 ，觀察注射部位局部刺激反應(yīng) ，按表 1換算成相應(yīng)的反應(yīng)級(jí) 。

2.2血管刺激性試驗(yàn)[8]

取健康家兔3只，右側(cè)耳緣靜脈注射以無菌操作方法注射燈盞花素注射液原液，1ml/kg，采用自身對照，左側(cè)耳緣靜脈注射給予等體積0.9%氯化鈉注射液，1次/d，連續(xù)給藥5d。末次給藥后48 h，肉眼觀察注射部位有無紅腫、充血等刺激現(xiàn)象，然后將動(dòng)物放血處死 ， 分別距注射部位進(jìn)針點(diǎn)2cm處向心端剪下耳緣約 2cm作為標(biāo)本 ，標(biāo)本用福爾馬林固定 ，常規(guī)組織切片，觀察血管周圍變化、血管壁是否損傷、內(nèi)皮細(xì)胞有無脫落、有無血栓形成以及其他病理變化 。

2.3全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)[8 9]

取健康豚鼠18只，隨機(jī)分為3組（每組6只）：A陰性對照（0.9%氯化鈉注射液）組、B陽性對照（5%卵蛋白液）組、C燈盞花素注射液（原液）組，各組豚鼠隔日分別腹腔注射0.9%氯化鈉注射液、5 %卵蛋白液和燈盞花素注射液各 0.5 ml進(jìn)行致敏 ， 共3次。然后各組再分為兩組 ，每組3只 ，于首次注射后的第14d和 21d ，由上肢外側(cè)靜脈注射0.9%氯化鈉注射液、5 %卵蛋白液和燈盞花素注射液（原液）各1.0 ml進(jìn)行激發(fā) ，觀察豚鼠在激發(fā)后30 min內(nèi)有無過敏癥狀 ， 如躁動(dòng)、抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克甚至死亡等癥狀 ， 如有反應(yīng)可按表2分級(jí)，判定其是否合格。若反應(yīng)級(jí)數(shù)達(dá)2級(jí)以上（包括2級(jí)）時(shí)，可認(rèn)為過敏實(shí)驗(yàn)不合格。按表2分級(jí) ，判定其反應(yīng)級(jí)數(shù)

2.4體外溶血實(shí)驗(yàn)[8 10]

取健康家兔1只，自心臟取血20ml，置入含玻璃珠的三角瓶中，振搖10 分鐘，去除纖維蛋白，使成脫纖血液。加入0.9%氯化鈉注射液約10倍量，搖勻，每分鐘1000?1500轉(zhuǎn)離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉注射液按上述方法洗滌 2～3 次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化注射液制成2%的混懸液，供試驗(yàn)用。

取試管7支 ，編號(hào)排列于試管架上，按表 3加入各種溶液 ，第6管不加燈盞花素注射液作為空白對照管 ；第7管不加藥液 ，用純化水代替0.9%氯化鈉注射液，作為溶血的陽性對照組 ，將各管輕輕搖勻 ，在37±0.5℃ 水浴中保溫4h，開始每隔15 min觀察1次 ，1h后 ，每隔1h觀察1次 ，記錄4h 。

試2.5

全溶血：溶液澄明紅色，管底無細(xì)胞殘留；部分溶血：溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留；無溶血：紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明；凝集：雖無溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，振搖后不分散 。

3.結(jié)果

3.1 肌肉刺激性實(shí)驗(yàn)

注射后不同時(shí)間觀察結(jié)果股四頭肌表面未見明顯充血 ，紅腫 ，家兔活動(dòng)正常 ，未見明顯異常反應(yīng)。兩只家兔48h后健康如常 ，解剖觀察給藥部位股四頭肌刺激反應(yīng)級(jí)數(shù)各為 0級(jí) 。以上試驗(yàn)結(jié)果提示 ，燈盞花素注射液局部肌肉無明顯剌激作用。

3.2 血管刺激性實(shí)驗(yàn)

家兔耳緣靜脈邊緣滴注5d和5 d后， 左耳緣靜脈與右緣靜脈經(jīng)肉眼觀察均未見異常反應(yīng)， 組織切片鏡檢可見耳緣靜脈內(nèi)皮完整、光滑、管壁未見炎癥反應(yīng)， 管腔內(nèi)未見血柱形成。結(jié)果表明： 燈盞花素注射液局部血管未見明顯刺激作用。

3.3全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)

A 陰性對照（0.9%氯化鈉注射液）組與C燈盞花素注射液（原液）組豚鼠分別于第 1 次致敏給藥后第14 d及21 d， 由上肢外側(cè)靜脈注射燈盞花素注射液或0.9%氯化鈉注射液0.5 m l，注射后豚鼠均未出現(xiàn)明顯反應(yīng) ，判定為 0級(jí) ，提示燈盞花素注射液未見全身主動(dòng)過敏反應(yīng) ； 而B陽性對照（5%卵蛋白液）組豚鼠分別于第 1次致敏給藥后第14d及21d， 由上肢外側(cè)靜脈注射5%卵蛋白液0.5 ml， ，注射后豚鼠在 5 min 內(nèi)均出現(xiàn)興奮不安、呼吸困難、抓鼻、顫抖、豎毛、痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡等過敏反應(yīng)，判定為4級(jí) 。

3.4 體外溶血實(shí)驗(yàn)

第7管（陽性對照管）溶液呈現(xiàn)澄明紅色，其余6管均末見澄明紅色，紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明。表明燈盞花素注射液未見明顯體外溶血作用。結(jié)果見表 4 。 提示燈盞花素注射液無溶血和凝集反應(yīng) 。

4 討論

藥物刺激性、過敏性、溶血性是指藥物制劑經(jīng)眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動(dòng)脈、肌肉、皮下、 靜脈旁和鞘內(nèi)等非口服途徑給藥 ，對用藥局部產(chǎn)生的毒性 （ 如刺激性和過敏性等 ）和/或?qū)θ懋a(chǎn)生的毒性 （ 如過敏性、溶血性等），它是臨床前安全性評(píng)價(jià)的重要組成部分。藥物的活性成分及其代謝物、輔料、有關(guān)物質(zhì)及理化性質(zhì) （如pH值、滲透壓等 ） 均有可能引起刺激性和/或過敏性和/或溶血性的發(fā)生 ，從而影響用藥的安全有效性。

本次實(shí)驗(yàn)燈盞花素注射液對紅細(xì)胞未見溶血和凝集作用；家兔靜脈注射、肌肉注射給藥后未見血管、肌肉刺激性；豚鼠靜脈注射后第14，21d，未見全身主動(dòng)過敏反應(yīng)；結(jié)果提示在本實(shí)驗(yàn)條件下，燈盞花素注射液安全性較好 ，符合中藥注射液的安全性要求。

參考文獻(xiàn)

[1] 甄健存，陳志剛，馬子靜.燈盞花素注射液質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中國藥學(xué)雜志，2007，42 （14）：1118

[2] 王金芳，牟忠顏，張艷.燈盞花注射液過敏反應(yīng) 2例報(bào)道[J].中國中醫(yī)急癥， 2006 ， 15（ 3） ： 226

[3] 鄧?yán)鑼?，黃青萍，蔡樂，等.燈盞花素注射液的臨床應(yīng)用[J].基層中藥雜志，2001，15（1）：56

[4] 林勇，李林，駱志鵬.燈盞花素注射液的臨床應(yīng)用及安全性分析[J]. 臨床合理用藥2012，5（7C）：76

[5] 劉寧，劉海濤，曲亮.靜脈滴注燈盞花素注射液過敏反應(yīng)1例報(bào)告[J]. 齊魯護(hù)理雜志 2006 ，（12）1 0：1928

[6] 常虹，毛丹，彭曉武.燈盞花素注射液致慢性蕁麻疹1例[J]. 中華保健醫(yī)學(xué)雜志2010（12）1：31

[7] 郭菁菁，沈志華，李明祥，等. 燈盞花素注射液致過敏性休克1例[J].中國藥師，2012，（15）12：1775

[8] 國家食品藥品監(jiān)督管理局. 中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京，2005，12：11

[9] 國家食品藥品監(jiān)督管理局. 中藥、天然藥物免疫毒性（過敏性、光變態(tài)反應(yīng)）研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京，2005，12：13

[10] 國家藥典委員會(huì).中國藥典（一部）[S].北京中國醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄 92