高效液相色譜法測(cè)定鹽酸伊立替康注射液的含量

王 宇，黃巧巧，謝升谷，鄭國(guó)鋼

（浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江 杭州 310004）

鹽酸伊立替康（CPT－11）為半合成喜樹堿衍生物，抗癌活性強(qiáng)，毒性較喜樹堿小［1］，水溶性較好；1994年由日本第一制藥和YakultHonsha公司開發(fā)上市，用于治療肺癌、卵巢癌和宮頸癌［2］；1998年獲得美國(guó)食品與藥物管理局批準(zhǔn)，用于標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療失敗后轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線治療。該藥于2001年3月在中國(guó)上市，2010年版《中國(guó)藥典》尚未收載。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)鹽酸伊立替康注射液的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀；Mettler XS205DU型電子天平。鹽酸伊立替康對(duì)照品（USP對(duì)照品，使用前不需干燥，按C33H38N4O6·HCl計(jì)，含量為 91.6%，CAT.NO.為 1347609，MD LOT為GOJ233）；鹽酸伊立替康注射液（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為 120801，120802，120803，規(guī)格均為 5mL ∶100mg）；鹽酸伊立替康注射液輔料原液（浙江海正藥業(yè)股份有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純，無(wú)水磷酸二氫鈉、辛烷磺酸鈉均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AgilentHC－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取無(wú)水磷酸二氫鈉2.43 g和辛烷磺酸鈉1.66 g，溶

于 1 000mL 水中）－甲醇 －乙腈（57∶25∶18）；流速：1.5mL ／min；

進(jìn)樣量：15 μL；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：255 nm。

2.2 溶液制備

溶液制備時(shí)均避光操作。精密量取本品5mL（相當(dāng)于鹽酸伊立替康100mg），置100mL容量瓶中，用稀釋劑（流動(dòng)相用鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.65）稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。避光操作。取鹽酸伊立替康對(duì)照品約50mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取不含鹽酸伊立替康的輔料原液，按供試品溶液制備方法制備得空白輔料溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：按2.1項(xiàng)下色譜條件，取2.2項(xiàng)下3種溶液，分別進(jìn)樣分析。結(jié)果見(jiàn)圖1，可見(jiàn)，供試品溶液色譜主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液色譜峰一致，空白輔料對(duì)鹽酸伊立替康的含量測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：取鹽酸伊立替康對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度約為 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 g／L的對(duì)照品溶液，分別取15μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度（C，g／L）對(duì)峰面積（A）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程A＝29561C＋1043.8，r＝0.9994（n＝7）。結(jié)果表明，鹽酸伊立替康質(zhì)量濃度在0.1831～1.4647 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 鹽酸伊立替康高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液15μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD為0.03%（n＝6），表明儀器精密良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為120801的樣品，依法制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果的RSD為0.46%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h時(shí)進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的RSD為0.56%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收率試驗(yàn)：分別取鹽酸伊立替康對(duì)照品共9份，精密稱定，分成高、中、低3組，按注射液處方加入輔料原液，用稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1mL中約含鹽酸伊立替康0.8，1.0，1.2mg的溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液。取對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為120801，120802，120803的樣品中鹽酸伊立替康含量分別為標(biāo)示量的100.3%，100.9%，

表1 鹽酸伊立登康回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

3 討論

將鹽酸伊立替康對(duì)照品溶液用稀釋劑稀釋至20μg／mL，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描，其最大吸收波長(zhǎng)為255 nm，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為255 nm。鹽酸伊立替康在干燥狀態(tài)下對(duì)光穩(wěn)定，水溶液對(duì)光敏感［3］，因此溶液制備過(guò)程都需要在避光條件下進(jìn)行。文獻(xiàn)［4］報(bào)道，采用HPLC法測(cè)定鹽酸伊立替康含量及有關(guān)物質(zhì)，采用同一色譜條件可使主成分與7－乙基－10－羥基喜樹堿、7－乙基羥基喜樹堿有效分離。但近年來(lái)隨著研究的深入，鹽酸伊立替康已知的有關(guān)物質(zhì)已達(dá)到7種，該色譜條件已無(wú)法滿足要求，需進(jìn)行進(jìn)一步研究，本試驗(yàn)中建立了測(cè)定鹽酸伊立替康注射液中鹽酸伊立替康含量的HPLC法，該方法樣品峰形良好，保留時(shí)間合適，理論板數(shù)達(dá)到10000以上，可用于鹽酸伊立替康注射液的質(zhì)量控制，適當(dāng)調(diào)整后亦可用于血藥濃度的測(cè)定［5］，可滿足體內(nèi)藥物分析的要求。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Anonymous.Irinotecan － Antineoplastic［J］.Drugs Future，1996，21（3）：315－317.

［2］孫曉東，岳樹香，李建偉.鹽酸伊立替康臨床應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥業(yè)，2011，20（14）：79－80.

［3］王世霞.伊立替康脂質(zhì)體的制備及體內(nèi)外行為研究［D］.河北：河北醫(yī)科大學(xué)，2008.

［4］李語(yǔ)如，顧 萍，蔣素梅，等.鹽酸伊立替康及注射液的HPLC測(cè)定［J］. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2001，32（6）：268－269.

［5］孫祥德，高 革，齊 偉，等.高效液相色譜法測(cè)定血漿中伊立替康的含量［J］. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2005，22（1）：57 －59.