高效毛細管電泳在西北中藏藥黃酮類化合物中的應(yīng)用研究

高瑞斌，楊 艷，董樹清，倪京滿，郭 玫*，趙 亮

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系 中(藏)藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級重點實驗室，甘肅 蘭州 730000；2.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所 西北特色植物資源化學(xué)重點實驗室，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

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高效毛細管電泳在西北中藏藥黃酮類化合物中的應(yīng)用研究

高瑞斌1，楊 艷3，董樹清2，倪京滿3，郭 玫1*，趙 亮2

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系 中(藏)藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級重點實驗室，甘肅 蘭州 730000；2.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所 西北特色植物資源化學(xué)重點實驗室，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

西北中藏藥作為中國特有的高原植物，長期生長于強輻射、日照時間長的環(huán)境下，具有有效成分含量高、生物活性強等優(yōu)勢。然而，目前對于該類藥物的質(zhì)量標準研究還十分有限，常用技術(shù)不能滿足其質(zhì)量和開發(fā)研究。因此采用新型分離分析技術(shù)，即高效毛細管電泳技術(shù)(HPCE)，利用其高效、快速、進樣體積小、多模式等特點，對西北中藏藥中黃酮類化合物展開分析研究。綜述不同分離模式下利用電泳技術(shù)對西北中藏藥中黃酮類化合物及其它活性成分進行研究的文獻報道，以期為其開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

高效毛細管電泳；黃酮類化合物；西北中藏藥

高效毛細管電泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)也稱為毛細管電分離法(CESM)，是離子或荷電粒子以電場為驅(qū)動力，在毛細管中根據(jù)其淌度或/和分配系數(shù)的不同進行高效、快速分離的一種新型技術(shù)。近幾年許多學(xué)者利用毛細管電泳獨特的分離優(yōu)勢，選取富含黃酮類成分的西部特色中藏藥為研究對象，利用CE技術(shù)對該類成分進行了分離及含量測定，為進一步研究西北中藏藥的質(zhì)量標準奠定了理論基礎(chǔ)。

1 不同CE模式研究中藏藥黃酮類成分

毛細管電泳有多種模式，為樣品的分離提供了諸多選擇，尤其對復(fù)雜樣品的分離分析有重要意義。根據(jù)不同的分離原理，多種類型的毛細管電泳被開發(fā)出來，為中藏藥黃酮類成分的研究拓寬了道路。

1.1 毛細管區(qū)帶電泳(CZE)應(yīng)用研究

毛細管區(qū)帶電泳(CZE)也稱為自由溶液毛細管電泳，是毛細管電泳中最簡單的一種分離形式，其介質(zhì)為一種具有pH緩沖能力的均勻自由溶液，通常稱為電泳緩沖液[1]。在采用CZE法分離中藏藥中黃酮類物質(zhì)時，黃酮上帶有的鄰羥基基團能與硼酸根形成配位鍵，使其帶上負電荷，從而達到分離的目的。因此，CZE法被廣泛用于黃酮類化合物的檢測。運用CZE技術(shù)分析中藏藥黃酮類化合物的報道見表1。

表1 CZE在中藏藥中黃酮類成分分析中的應(yīng)用

1.2 膠束電動毛細管色譜(MECC)應(yīng)用研究

膠束電動毛細管色譜是將離子型表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉，SDS)加入緩沖溶液中，當(dāng)其濃度足夠大時即形成內(nèi)核疏水、外部帶電的動態(tài)膠束，可根據(jù)樣品組分在水相和膠束相間分配行為的差異進行分離。MECC技術(shù)的突出優(yōu)勢在于使CE的應(yīng)用范圍拓展到中性物質(zhì)的分離中，通常被認為是分離效果最好的色譜技術(shù)。表2即歸納了近年來運用MECC技術(shù)測定中藥中黃酮類成分的相關(guān)文獻報道。

表2 MECC在中藥黃酮類成分分析中的應(yīng)用

1.3 毛細管電色譜(CEC)應(yīng)用研究

CEC是在毛細管中填充液相色譜固定相微粒，以電泳中的電滲流作為驅(qū)動力，根據(jù)樣品和固定相之間的相互作用實現(xiàn)樣品分離的技術(shù)，尤其適用于小分子物質(zhì)的分離研究。劉海興等[20-21]采用毛細管電色譜法對旱蓮中的總黃酮含量進行了測定，所確定的電泳條件為：8mmol/L磷酸二氫鈉-8mmol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液(pH=8.02)，運行電壓為12kV，檢測波長為254nm，實驗結(jié)果證實了黃酮類成分是旱蓮的主要活性成分，直接影響著其功效，也為旱蓮的質(zhì)量控制提供了新的方法。

此外，其它模式的電泳技術(shù)對藥物成分研究也有一定的作用，如毛細管凝膠電泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE)、毛細管等電聚焦(Capillary Isoelectric Focusing，CIEF)、毛細管等速電泳(Capillary Isoelectric-phoresis,CITP)等。

2 HPCE在西北中藏藥特有活性成分研究中的應(yīng)用

很多學(xué)者在對中藏藥中黃酮類成分進行研究的同時也對其它活性組分做了一定研究。表3收載了近年來運用HPCE技術(shù)對藏藥中特有活性成分的研究報道。

3 結(jié)語

近年來，有關(guān)毛細管電泳的研究日益深入，其在分析、分離等方面的應(yīng)用相比其他色譜方法更有優(yōu)勢，如高靈敏度、高速、樣品耗用量少、重現(xiàn)性好、自動化等，這對于西北中藏藥中黃酮類化合物的分離分析具有重要意義。隨著商品化儀器的不斷改進，毛細管電泳及其聯(lián)用技術(shù)將會在生藥資源豐富的西北地區(qū)發(fā)揮更大作用，為中藏藥活性成分的研究提供更為廣闊的應(yīng)用空間。

表3 CE技術(shù)在藏藥特有活性成分分析測定中的應(yīng)用

[1] S TERABE, K OTSUKA, K ICHIKAWA, et al. Electrokinetic Separations with Micellar Solutions and Open-Tubular Capillaries[J].Ando,Anal.Chem., 1984, 56(1):11.

[2] LIU J J, Li S P, WANG Y T. Optimization for quantitative determination of four flavonoids in Epimedium by capillary zone electrophoresis coupled with diode array detection using central composite design [J]. J Chromatogr A,2006,11(3):344-349.

[3] XU X Q, QI X Z, WANG W, et al. Separation and determination of flavonoids in Agrimonia pilosa Ledeb.by capillary e1ecfrophoresis with electrochemical detection [J]. J Sep Sci,2005(28):647-652.

[4] W U T, GUAN Y Q, YE J N. Determination of flavonoids and ascorbic acid in grape fruit peel and juice by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. Food Chem,2007(100):1573-l579.

[5] XU X Q, YU L S,CHEN G N. Determination of flavonoids in Portulaca oleracea L.by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. J Pharm Biorned Anal,2006(41):493-499.

[6] JIANG T F,WANG Y H,LV Z H, et al. Determination of kava lactones and flavonoid glycoside in Scorzonera austriaca by capillary zone electrophoresis [J]. J Pharm Biomed Anal,2007(43):854-858.

[7] SUNTORNSUK L, ANURUKVORAKUN O. Precision improvement for the analysis of flavonoids in select Thai plants by capillary electrophoresis [J]. Electrophoresis,2005(26):648-660.

[8] LUO M N，LU H W, MA H Q, et al. Separation and determination of flavonoids in Lamiophlomis rotata by capillary electrophoresis using borate as electrolyte [J]. J Pharm Biomed Anal,2007(44):881-886.

[9] XU X Q, YE H Z, WANG W, et al. An improved method for the quantitation of flavonoids in Herba Leonuri by capillary electrophoresis [J]. J Agric Food Chem,2005(53):5853-5857.

[10] REN Z Y, ZHANG Y, SHI Y P.Simultaneous determination of nine flavonoids in Anaphalis margaritacea by capillary zone electrophoresis [J]. Talanta,2009(78):959-963.

[11] XU X Q, YE H Z, WANG W, et al. Determination of flavonoids in Houttuynia cordata Thunb.and Saururus chinensis (Lour. ) Bail.by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. Talanta,2006(68):759-764.

[12] 王小艷,王洪倫,盛筱,等.毛細管區(qū)帶電泳法測定油菜蜂花粉中黃酮苷元含量[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008(20): 1043-1047.

[13] 王建軍,喬善磊,柴逸峰,等.毛細管區(qū)帶電泳法快速分離測定知母內(nèi)芒果苷和新芒果苷[J].藥物分析雜志, 2006,26(1):79-81.

[14] 朱加.應(yīng)用膠束電動毛細管色譜法分離測定銀杏葉提取物中的蘆丁和槲皮素[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2001,13(4): 223-226.

[15] JIANG T F, DU X, SHI Y P. Determination of flavonoids from Pau1ownia tomentosa (Thunb) Steud by micellar electrokinetic capillary electrophoresis [J].Chromatographia, 2004(59):255-258.

[16] ZHU J,YU K,CHEN X,et a1. Comparison of two sample preconcentration strategies for the sensitivity enhancement of flavonoids found in Chinese herbal medicine in micellar electrokinetic chromatography with UV detection [J]. J Chromatogr A,2007,11(6):191-200.

[17] WANG S F, WU Y Q, JU Y. On-line concentraction by field-enhanced sample injection with reverse migrating micelles in micellar electrokinetic capillary chromatography for the analysis of flavonoids in Epimedium bievicornum Maxim [J]. J Chromatogr A,2003,10(17):27-34.

[18] 馬玲云,魏鋒,馬雙成,等.毛細管電泳法測定娑羅子藥材中的黃酮苷類成分[J].藥物分析雜志,2005,25(5):537- 540.

[19] ZHANG Y,CHEN J,ZHAO I,et al.Separation and determination of isoflavones in red clover by micellar electrokinetic capillary chromatography [J]. Biomed Chromatogr,2007(21): 987-992.

[20] 劉海興,劉鳳芹,于愛民,等.毛細管電色譜法測定旱蓮中總黃酮的含量[J].濰坊學(xué)院學(xué)報,2005,5(6):95-100.

[21] 劉海興,劉鳳芹,于愛民,等.毛細管電色譜法測定槐花、槐角中總黃酮含量[J].化學(xué)試劑,2006,28(6):349-350.

[22] 祝馨怡,羅興平,陳立仁,等.高效毛細管電泳法測定紅景天中沒食子酸的含量[J].中草藥,2005,36(3):443-444.

[23] 馬海寧,華玉娟,屠春燕,等.毛細管電泳分析藏紅花植物細胞多糖中單糖組成[J].色譜,2012,30(3):304-308.

[24] ZHAO SG, LIU Q, CHEN XG, et al. Separation and determination of gentiopicroside and swertiamarin in Tibetan medicines by micellar electrokinetic eletrophoresis [J]. Biomed.Chromatogr,2004(18):10-15.

[25] 汪泰初,張和禹,李瑞雪.高效毛細管電泳法測定蟲草制品中核苷類化合物[J].科學(xué)實驗·中國蠶業(yè),2010(3):10-12.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

High Performance Capillary Electrophoresis in the Northwest Tibetan Medicine Flavonoids in the Applied Research

Ruibin Gao1, Yan Yang3,Shuqing Dong2, Jingman Ni3, Mei Guo1*, Liang Zhao2*

(1.Key Laboratory of Chemistry and Quality of Traditional Chinese Medicines,Department of Pharmacy, Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China;2.Key laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Resources ,Lanzhou Institute of Chemical Physics of Chinese Academy of Sciences, Lanzhou 730000, China;3. Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)

As a native plateau plant to China, Chinese-Tibetan medicine in Northwest has the characteristics of strong radiation, long sunshine, higher accumulation of effective ingredients and higher bioactivity. However, at present, the studies on the quality standard of such medicine are limited. Common techniques are no guarantee of the quality and research of Chinese-Tibetan medicine in Northwest. Therefore, we need to adopt a new-type technique for sample analysis and separation, i.e. high performance capillary electrophoresis (HPCE), expanding analysis research for flavonoids of Chinese-Tibetan Medicine in Northwest with the help of the characteristics of high efficiency、high speed、sampling with small size and multimode. This paper reviews the reports in literatures about the research of the electrophoresis technique (HPCE)for flavonoids and other active ingredients of Chinese-Tibetan medicine in Northwest in different separation modes.

High Performance Capillary Electrophoresis; Flavonoids; Chinese Tibetan Medicine

2014-01-08

中科院科技支新項目(2011-2013)；蘭州市科技專項計劃(2011-1-156)

高瑞斌(1986-)，男，甘肅中醫(yī)學(xué)院碩士研究生，研究方向為中藥有效成分與質(zhì)量標準。

郭玫(1963-)，女，甘肅中醫(yī)學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥有效成分及質(zhì)量標準。

R285

A

1673-2197(2014)12-0005-04