液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定冬棗中多菌靈、啶蟲脒殘留量

宗萬里

（威海市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，山東 威海264209）

多菌靈是一種廣譜性殺菌劑，對多種作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果，可用于葉面噴霧、種子處理和土壤處理等對人畜低毒，對魚類毒性也低。啶蟲脒是一種新型廣譜且具有一定殺螨活性的殺蟲劑，其作用方式為土壤和枝葉的系統(tǒng)殺蟲劑。廣泛用于水稻，尤其蔬菜、果樹、茶葉的蚜蟲、飛虱、薊馬、部分鱗翅目害蟲等的防治，為低毒殺蟲劑，但對人、畜有毒。目前我國國家標準[1]中對于多菌靈、啶蟲脒在冬棗中的限量要求分別為小于等于0.5mg/kg和2mg/kg。檢測食品中的多菌靈、啶蟲脒主要有氣相色譜法[2]、液相色譜法[3～7]、液質(zhì)聯(lián)用法[8～10]，本實驗建立了使用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法對冬棗中的多菌靈、啶蟲脒進行檢測的方法。該方法在確保分析結(jié)果準確的同時，樣品前處理簡單快速，節(jié)省了檢測成本與檢測時間，適用于實驗室中大批量的樣品檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇：色譜純，TEDIA 公司；甲酸：分析純，≥98%，國藥集團化學試劑有限公司；多菌靈標準溶液：100μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；啶蟲脒標準溶液：100μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；實驗用水為哇哈哈純凈水，1.25L/瓶。

0.002mol/L的乙酸銨水溶液制備方法是稱取0.077g乙酸銨加入到500mL水中，經(jīng)0.22μm水相濾膜過濾。

Ultimate 3000型高效液相色譜儀，Thermo fisher TSQ QUANTUM三重四極桿質(zhì)譜檢測器（配電噴霧離子源ESI）；Hypersil Gold型反相液相色譜柱（2.1×100mm，3μm），Thermo fisher公司；0.22μm有機相針管濾頭, Agela 公司；漩渦振蕩器：MS3 Digital，IKA公司；冷凍高速離心機，Neofuge 23R，上海力申科學儀器有限公司。

1.2 儀器條件

1.2.1液相色譜條件

色譜柱： C18柱：100×2.1mm(i,d), 3μm；

流動相：甲醇（A相）、0.002mol/L乙酸銨溶液（B相），梯度條件：0min～0.5min，A相保持10%，0.5 min～6.5min A相由10%增至90%； 6.5min～13.5min， A相保持90%；13.5min～14.0min A相減至10%；14.0min～17.5min A相保持10%。

流速：0.2mL/min。

1.2.2質(zhì)譜參考條件

a）電離方式：電噴霧電離，正離子模式；

b）噴霧電壓：3500kV；

c）鞘氣（N2）壓力：35arb；

d）輔助氣（N2）流量：10 arb；

e）碰撞室（氬氣）壓力：1.5 m Torr；

f）掃描方式：選擇反應監(jiān)測（SRM）；

g）質(zhì)譜divert valve狀態(tài)：0min-8min處于Inject Waste狀態(tài)，8min-10.5min處于Load Detector狀態(tài)，10.5-17min處于Inject Waste狀態(tài)；

h）碰撞能量如表1所示。

表1多菌靈及啶蟲脒的離子碎片及碰撞能量Table. 1collision energy & product ions of Carbendazim and Acetamiprid

1.3 溶液配制

1.3.1標準溶液的制備

分別準確稱取0.5mL多菌靈標準溶液及啶蟲脒標準溶液至同一50mL容量瓶中，用甲醇定容，得1μg/mL的多菌靈及啶蟲脒混合標準溶液。從1μg/mL的多菌靈及啶蟲脒的混合標準溶液中吸取5mL加入到50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得100ng/mL的多菌靈及啶蟲脒的混合標準溶液。再從100ng/mL的多菌靈及啶蟲脒的混合標準溶液中分別吸取0.5,1, 2, 4, 5mL加入到5個不同的50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得1,2,4,8,10.0ng/mL的多菌靈及啶蟲脒的混合標準溶液。每個質(zhì)量濃度取10μL注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進行分析，繪制標準曲線。

1.3.2樣品前處理

稱取5.00g（精確至0.01g）的樣品于50 ml離心中，試樣用甲醇定容至15mL，搖勻，旋渦混合器提取2 min，高速冷凍離心機8000rpm離心5分鐘（常溫），吸取經(jīng)0.22μm針頭有機濾膜過濾的上清液10μL注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理

由于多菌靈、啶蟲脒能夠溶于甲醇、乙腈等極性有機溶劑，而且甲醇能與水較好互溶，本文采用甲醇直接浸泡提取冬棗中多菌靈、啶蟲脒的殘留量，由于二級質(zhì)譜對于樣品基質(zhì)具有較好的抗干擾性，經(jīng)過甲醇提取的樣品處理液，經(jīng)過過濾直接注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中進行檢測，處理過程簡單且能保證樣品檢測的定性及定量要求。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

本文采用反相色譜柱C18（100mm×2.1mm,3μm），在梯度洗脫條件下對多菌靈、啶蟲脒進行分離，多菌靈、啶蟲脒出峰時間為8～10.5分鐘之間，多菌靈、啶蟲脒峰型尖銳，流動相條件合適。在質(zhì)譜檢測器方面，利用質(zhì)譜檢測器自身方法優(yōu)化功能，分別選出多菌靈母離子192以及啶蟲脒母離子223.2的三個豐度最強的子離子，其中一個豐度最強的子離子設(shè)為定量離子，其余兩個設(shè)為定性參考離子。然后利用工作站優(yōu)化出三個子離子的最佳碰撞能量，碰撞能量如表1所示。

2.3 色譜圖

在1.2色譜及質(zhì)譜條件下，得到多菌靈、啶蟲脒標準樣品總離子流圖，SRM質(zhì)譜圖、未知樣品的總離子流圖、加標未知樣品的總離子流圖，如圖1～圖4所示。加標樣品譜圖干凈，多菌靈以及啶蟲脒出峰良好，無干擾。在該色譜條件下，實驗結(jié)果良好。

2.4 標準曲線和最低檢出限

在實驗條件下，以標準物峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度x（μg·mL-1）為橫坐標繪制標準曲線，得線性方程，以基線噪聲3倍峰面積對應的質(zhì)量濃度為檢出限（S／N=3）[10]，回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表2。

表2 回歸曲線的基本參數(shù)Table.2 Basic parameter of regression equation

2.5 精密度和加標回收實驗

圖1多菌靈以及啶蟲脒標樣在SRM方式下的總離子流圖Fig.1TIC chromatogram of Carbendazim and Acetamiprid standard sample in SRM mode

圖2多菌靈及啶蟲脒標樣的選擇離子對質(zhì)譜圖（SRM）Fig.2mass spectrum of Carbendazim and Acetamiprid standard sample in SRM mode

取不含多菌靈、啶蟲脒的冬棗樣品進行加標回收實驗，向5g樣品中分別添加1000ng/mL多菌靈及啶蟲脒混合標準溶液15,75,150μL，即樣品中多菌靈、啶蟲脒含量為分別為3,15,30μg/kg。按上述1.3.2樣品處理方法進行樣品處理。按1.2色譜及質(zhì)譜條件進行測定，精密度、回收率計算結(jié)果見表2。由表2可知，采用本方法所得數(shù)據(jù)滿足檢測要求。

3 結(jié)論

圖3未知樣品SRM方式下的TIC色譜圖Fig.3TIC chromatogram of unknown sample in SRM mode

圖4加標未知樣品SRM方式下的TIC色譜圖Fig.4TIC chromatogram of unknown sample added with Carbendazim and Acetamiprid in SRM mode

通過實驗建立了冬棗中多菌靈、啶蟲脒含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，樣品經(jīng)過甲醇直接提取多菌靈、啶蟲脒后注進液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，通過質(zhì)譜儀自帶的divert valve分流流動相以降低對離子源以及質(zhì)譜檢測器的污染。該方法前處理簡單，測試結(jié)果穩(wěn)定且準確度較高，能夠滿足檢測要求。適合大批量樣品的快速檢測，該方法能夠為多菌靈、啶蟲脒的檢驗與監(jiān)測提供科學依據(jù)與技術(shù)支持。

表3 樣品添加回收和精密度實驗Table.3 Spiked recovery and precision

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