LC-MS/MS法測定動(dòng)物源食品中呋喃它酮代謝物試驗(yàn)

陳國花

（山東諸城畜牧獸醫(yī)局，山東諸城 262200）

硝基呋喃類藥物（Nitrofurans）是一類合成的抗菌藥物，它們作用于微生物酶系統(tǒng)，抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，從而起抑菌作用。目前，臨床應(yīng)用較多的藥物包括：呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。硝基呋喃類藥物很不穩(wěn)定，很容易生成代謝物，由于代謝物比較穩(wěn)定且有致癌作用，所以，在動(dòng)物源性食品安全的檢測中需要檢測硝基呋喃代謝物。本文介紹了呋喃它酮代謝物AMOZ殘留量檢測，并分析了不確定度情況。

1 檢測方法

稱取試樣2 g（±0.01 g）于50 ml離心管中，加入10 ml 0.2 mol/L 鹽酸溶液和100 μl0.1 mol/L衍生試劑（鄰硝基苯甲醛），均質(zhì)60 s，37 ℃恒溫振蕩水解16 h（過夜）。用氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.5，3 000 r/min離心10 min。上清液移入50 ml離心管中，分別用10 ml乙酸乙酯提取兩次，合并提取液，取10 ml提取液在50 ℃下用氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?.1%甲酸水定容到1 ml后，再用3 ml乙腈飽和正己烷脫脂，下層水相過0.20 μm濾膜后，濾液供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

2 不確定度的評定及合成

2.1 重復(fù)測量樣品產(chǎn)生的相對不確定度Urel（A）

在2.00 g陰性樣品中，加入0.1 ml 10 ng/ml的AMOZ制成加標(biāo)樣，添加水平為0.5 μg/kg。加標(biāo)樣10次重復(fù)測定的結(jié)果見表1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對不確定度u rel（B1）

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程：分別準(zhǔn)確稱取5.00 mg、5.00 mg、6.60 mg 和7.45 mg的AOZ標(biāo)準(zhǔn)品，分別用甲醇溶解后定容到10 ml棕色容量瓶，該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為500 μg /ml；分別吸取0.2 ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，該混合標(biāo)準(zhǔn)中間液濃度為10 μg/ml。從混合標(biāo)準(zhǔn)中間液中吸取0.1～10 ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，該混合標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為100 ng/ml，再用混合標(biāo)準(zhǔn)工作液配制成適宜濃度的校正曲線。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的相對不確定度u rel（m）

用十萬分之一的數(shù)顯天平稱量5.00mg、7.45 mg、6.60 mg 和5.00 mg的AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品，其誤差極限值為±0.01 mg，按照均勻分布則其不確定度為0.01/31/2＝0.005 8，則標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的相對不確定度分別為：urel（m-AMOZ）＝0.005 8/5.00＝0.001 16；

2.4 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液體積引入的相對不確定度u rel（V）

（1）用10 ml容量瓶定容標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 ml，根據(jù)玻璃量器檢定規(guī)程10 ml容量瓶的容量允差誤差為±0.04 ml，按照均勻分布則u（V1）＝0.04/31/2＝0.023；

（2）用0.2 ml的刻度吸管吸取0.2 ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，根據(jù)玻璃量器檢定規(guī)程0.2 ml刻度的容量允差誤差為±0.006 ml，按照均勻分布則u（V2）＝0.006/31/2＝0.003；

（3）用10 ml容量瓶定容標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 ml，根據(jù)玻璃量器檢定規(guī)程10 ml容量瓶的容量允差誤差為±0.04 ml，按照均勻分布則u（V3）＝0.04/31/2＝0.023；

（4）用0.2 ml的刻度吸管吸取0.1 ml的標(biāo)準(zhǔn)中間液，根據(jù)玻璃量器檢定規(guī)程0.2 ml刻度的容量允差誤差為±0.006 ml，按照均勻分布則u（V4）＝0.006/31/2＝0.003；

（5）用10 ml容量瓶定容標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 ml，根據(jù)玻璃量器檢定規(guī)程10 ml容量瓶的容量允差誤差為±0.04 ml，按照均勻分布則u（V5）＝0.04/31/2＝0.023；

則配制標(biāo)準(zhǔn)溶液體積引入的相對不確定度分別為：

2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對不確定度urel（2）的合成

根據(jù)上述urel（STD）、urel（m）、urel（V）三個(gè)項(xiàng)目分別進(jìn)行合成，則標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對不確定度分別為：urel（B1-AMOZ）＝（urel（STD）2＋＋urel（V）2）1/2＝（0.0022＋0.001162＋0.03382）1/2＝0.0339。

2.6 樣品稱量引入的相對不確定度urel（B2）

樣品稱取2 g，稱樣天平（賽多利斯2202S）稱量不確定度主要為稱量變動(dòng)性，根據(jù)電子天平技術(shù)參數(shù)，其變動(dòng)性標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01 g，實(shí)際操作過程中控制在0.02 g，按照均勻分布則其不確定度為為0.02/31/2＝0.011 5，則樣品稱量的相對不確定度為：urel（B2）＝0.011 5/2.00＝0.005 8。

3 結(jié)果

根據(jù)以上分析，LC-MS/MS法測定添加水平0.50 μg/kg的硝基呋喃類代謝物殘留量的結(jié)果可表示為：AMOZ）=（0.51±0.06）μg/kg，包含因子k=2。

表1 陰性樣品中硝基呋喃類代謝物重復(fù)測定試驗(yàn)結(jié)果（n=10）