高效液相法同時測定黃連解毒丸中黃芩和大黃的含量

敖立實 孫宇光 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城 137000）

高效液相法同時測定黃連解毒丸中黃芩和大黃的含量

敖立實 孫宇光 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城 137000）

【摘要】目的建立高效液相色譜法同時測定黃連解毒丸中黃芩（以黃芩苷計）和大黃（以大黃素計）含量的方法，為相關研究提供方法學參考。方法采用AgilentC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（85∶15）。檢測波長為254 nm。結果黃芩苷和大黃素在各自的濃度范圍內均呈良好的線性關系（r均為0.999以上），回收率分別為97.97%（n=6）、95.41%（n=6）。結論本方法簡單、結果準確、重現(xiàn)性好，可更好的控制藥品的質量。

【關鍵詞】黃連解毒丸；高效液相色譜法；黃芩；大黃；黃芩苷；大黃素

黃連解毒丸具有瀉火、解毒、通便的作用，用于三焦熾熱，口舌生瘡，目赤頭痛，便秘溲赤，心胸煩熱，熱痢泄瀉，瘡癤痔血的治療。以黃連、黃柏、黃芩、大黃、梔子、滑石、川木通七味藥材制成，質量標準收載于《國家中成藥標準匯編 中成藥地方標準上升國家標準部分 內科 脾胃分冊》，標準中對黃連和黃柏質量進行了控制，但對黃芩和大黃只在鑒別項下做了規(guī)定，不能有效的控制其質量[1,2]。本方法采用同一實驗方法，同時測定黃芩和大黃的含量，更好的控制了黃連解毒丸質量。

1 儀器與試藥

島津液相色譜儀2010A；GB-204電子天平，黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201117；大黃素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110756-200110；甲醇為色譜純；水為純化水。

2 溶液的配制

對照品溶液：分別精密稱取黃芩苷和大黃素對照品10 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度即得。

供試品溶液：精密取本品細粉0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取濾液5 mL置50 mL量瓶中，加8%鹽酸溶液超聲處理2 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用三氯甲烷洗滌，取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷洗滌3次，每次10 mL，合并三氯甲烷溶液，減壓回收溶液盡干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3 色譜條件

色譜柱：AgilentC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（85∶15）。檢測波長為254 nm；進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃。色譜柱的理論塔板數按大黃素峰計算＞3000。

4 方法學考察

4.1 專屬性實驗

見圖1～圖3。在上述色譜條件下測得的色譜圖，分別為混合對照、樣品陰性對照，黃芩苷和大黃素分離良好，其他成分不干擾二者的測定。

圖1 對照

圖2 黃芩苷陰性對照

圖3 大黃素陰性對照

4.2 線性考察

分別精密量取黃芩苷對照品溶液加甲醇制成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00 μg/mL，大黃素對照品溶液0.02、0.05、0.1、0.2、1.0、2.0 μg/mL注入島津2010A高效液相色譜儀，以黃芩苷峰和大黃素對照品峰面積積分值為縱坐標，其進樣量為橫坐標進行線性回歸，分別得回歸方程為A=37.582C+0.0368，r=0.9991（n=6），A=53.2652C+0.0369，r=0.9997（n=6）結果表明黃芩苷和大黃素在0.05～5.0 μg/mL和0.02～2.0 μg/mL范圍內具有良好的線性關系。

4.3 重復性試驗

取黃芩苷、大黃素對照品溶液，注入島津2010A液相色譜系統(tǒng)，進樣量為20 μL，重復進樣6次，峰面積的平均值分別為1102024、602584，其RSD分別為0.29%、0.43%。

4.4 穩(wěn)定性試驗

取黃芩苷、大黃素對照品溶液，分別在2、4、6、10、12、24、48 h分別測定，結果表明溶液在48 h內穩(wěn)定。

4.5 檢出限和定量限

表1 黃芩苷回收率測定結果

當信噪比S/N=10時，黃芩苷和大黃素的定量限分別為2.13和0.98 μg，當信噪比S/N=3時，黃芩苷和大黃素的最低檢出限分別為0.62和0.30 μg。

4.6 回收率試驗

分別精密稱取黃芩苷和大黃素對照品10.10、5.85 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

另精密稱取6批已知含量的黃連解毒丸內容物適量，置100 mL量瓶中，加甲醇約50 mL，溶解，精密加上述對照品溶液10 mL，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得，分別精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，按1.3項下色譜條件測定，以外標法計算，結果見表1、表2。

5 小 結

6批黃連解毒丸中黃芩、大黃含量測定結果表明，采用高效液相色譜法，在本文建立的色譜條件下，樣品中的黃芩苷、大黃素與其他成分分離良好，方法簡便快捷，結果準確可靠，可作為其質量控制方法之一。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].2010版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標準匯編,中成藥地方標準上升國家標準部分 內科 脾胃分冊[S].

中圖分類號：R282.710.5

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2014）15-0071-02