“通蓮湯”聯(lián)合微波熱療與單純微波熱療對(duì)食管癌患者血清p53和癌組織survivin表達(dá)影響的對(duì)比研究

陳樹(shù)山 賈永森 田福玲 閆昕 曹慧娟 秦麗娟 王召龍 何龍

（1.唐山市中醫(yī)醫(yī)院，河北唐山 063000；2.河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000；3.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

“通蓮湯”聯(lián)合微波熱療與單純微波熱療對(duì)食管癌患者血清p53和癌組織survivin表達(dá)影響的對(duì)比研究

陳樹(shù)山1賈永森2田福玲2閆昕2曹慧娟2秦麗娟3王召龍1何龍1

（1.唐山市中醫(yī)醫(yī)院，河北唐山 063000；2.河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000；3.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

目的：比較通蓮湯聯(lián)合微波熱療與單純微波熱療對(duì)食管癌患者血清腫瘤抑制蛋白p53（簡(jiǎn)稱p53）和活體癌組織生存素（survivin）影響的差異。方法：取38例局部中晚期食管癌患者血清，隨機(jī)分為對(duì)照組（17例）和觀察組（21例）。2組均行微波熱療，觀察組加服中藥通蓮湯。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)患者治療前后血清p53；應(yīng)用免疫組化兩步法檢測(cè)患者活體癌組織survivin蛋白。結(jié)果：對(duì)照組p53陽(yáng)性患者7例，觀察組4例，組間比較差異顯著；觀察組活體癌組織survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于對(duì)照組。結(jié)論：通蓮湯聯(lián)合微波熱療能顯著抑制食管癌患者血清p53和活體癌組織survivin蛋白表達(dá)，效果優(yōu)于單純微波熱療。

食管癌 微波熱療 通蓮湯 p53 survivin

我國(guó)屬于食管癌高發(fā)國(guó)家，發(fā)病人數(shù)、患病率、死亡率均位居世界首位[1]。筆者應(yīng)用微波熱療聯(lián)合自擬“通蓮湯”治療老年中晚期食管癌，取得良好的療效[2]。研究表明，腫瘤組織抑制蛋白p53（簡(jiǎn)稱p53）和生存素（survivin）的過(guò)度表達(dá)可抑制食管癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)[3]，是預(yù)測(cè)該病進(jìn)展的重要指標(biāo)。本研究進(jìn)一步觀察了通蓮湯配合微波熱療與單純微波熱療對(duì)食管癌患者血清p53和活體癌組織survivin表達(dá)影響的差異。

1 臨床資料

選取筆者所在醫(yī)院2010年8月～2012年8月確診為食管癌的患者38例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合食管癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)或病理診斷依據(jù)；臨床病歷資料完整；放、化療失敗復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者或年齡大、體質(zhì)弱不能耐受放、化療；無(wú)熱療禁忌證。38例患者隨機(jī)分為對(duì)照組（17例）和觀察組（21例）。觀察組：男14例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期6例，Ⅲ期Ⅳ15例；分化程度高3例，中4例，低14例。對(duì)照組：男10例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期5例，Ⅲ期Ⅳ12例；分化程度高3例，中3例，低11例。2組基線資料比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2 治療方法

2.1 對(duì)照組采用微波熱療[2]。每次熱療時(shí)間90min，每次間隔＞72h，4次為1個(gè)療程。

2.2 觀察組微波熱療同對(duì)照組。加服活血化瘀、涼血解毒中藥通蓮湯。藥物組成：白花蛇舌草15g，桃仁15g，紅花8g，升麻15g，檳榔8g，半枝蓮15g。水煎服，每日1劑，分2次服。自熱療開(kāi)始至結(jié)束后1個(gè)月。

3 療效觀察

3.1 觀察指標(biāo)比較2組治療后血清p53抗體和癌組織survivin蛋白表達(dá)。

3.1.1 標(biāo)本采集血清標(biāo)本：38例食管癌患者抽取空腹靜脈血5mL，以3000r/min離心5min，分離血清后置-20℃保存?；铙w癌組織標(biāo)本：采用拉網(wǎng)細(xì)胞學(xué)法，使用外置網(wǎng)套的橡膠氣囊通過(guò)食管，病變組織被網(wǎng)套刮下涂片。

3.1.2 試劑及設(shè)備MTC-3D微波熱療機(jī)（南京啟亞醫(yī)療設(shè)備有限公司），酶標(biāo)儀（NOVAPATH-450，Bio-Tek公司），抗突變型p53酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）試劑盒（美國(guó)CST公司），survivin兔抗人多克隆抗體（美國(guó)CST公司）。

3.1.3 檢測(cè)方法應(yīng)用ELISA檢測(cè)血清p53抗體。使用抗p53試劑盒，操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為450nm）測(cè)定吸光值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和公式計(jì)算血清p53抗體的半定量值（kU/L），參考值：血清p53抗體＜0.85kU/L為陰性，0.85～1.15kU/L為可疑陽(yáng)性，＞1.15kU/L為陽(yáng)性。

采用En Vision兩步法進(jìn)行免疫組化染色，分析患者癌組織survivin蛋白表達(dá)。步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，所有切片均在同一光強(qiáng)度，同一放大倍數(shù)下進(jìn)行圖像分析，染色陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色顆粒狀。隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)視野，記錄每個(gè)視野的陽(yáng)性表達(dá)率（陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/全視野細(xì)胞數(shù)），取其均數(shù)作為每例樣本陽(yáng)性表達(dá)率的評(píng)定依據(jù)。所占比率為0～5%為陰性（-），5%～25%為弱陽(yáng)性（+），25%～50%為中度陽(yáng)性（++），50%以上為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 治療結(jié)果

3.3.1 治療前后2組患者血清p53抗體的檢測(cè)

治療前2組患者血清p53陽(yáng)性率比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。治療后觀察組較之對(duì)照組p53陽(yáng)性病例數(shù)顯著減少，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 觀察組與對(duì)照組患者治療前后血清p53抗體表達(dá)比較（v=1）

3.3.2 治療后2組患者活體癌組織survivin蛋白表達(dá)見(jiàn)表2。

表2 觀察組與對(duì)照組活體癌組織survivin蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（v=1）

4 討論

食管癌屬中醫(yī)學(xué)“噎膈”范疇，系由于飲食不節(jié)，情志失調(diào)，正氣內(nèi)虛所致，由此產(chǎn)生氣滯痰凝、熱毒蘊(yùn)結(jié)、血瘀不化。通蓮湯活血祛瘀，清熱解毒，破氣導(dǎo)滯，升清降濁，胃氣乃通，獲得國(guó)家發(fā)明專利[4]。腫瘤微波熱療是近三十年來(lái)迅速發(fā)展的一門(mén)交叉學(xué)科，是加熱滅活癌細(xì)胞的有效治療新方法，可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤血管生成，提高機(jī)體免疫功能[5]。筆者將兩者結(jié)合用于臨床食管癌患者，觀察了該治療方案對(duì)患者血清p53和活體癌組織survivin的影響。

研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)惡性腫瘤患者的血清中均檢測(cè)到p53抗體。王暉等[6]研究表明，食管癌患者血清抗p53抗體的陽(yáng)性率明顯高于正常人，所以認(rèn)為檢測(cè)血清中的p53抗體可以作為食管癌輔助診斷的指標(biāo)。survivin基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的抗凋亡因子，是凋亡蛋白抑制因子的家族成員，可對(duì)抗G2/ M期誘導(dǎo)的凋亡，在癌組織中過(guò)表達(dá)可克服凋亡檢測(cè)點(diǎn)，由于survivin基因?qū)Φ蛲龅囊种?，?xì)胞得以異常增殖及惡性轉(zhuǎn)化，造成腫瘤發(fā)生發(fā)展。有研究顯示，食管癌組織中的survivin和p53具有相似表達(dá)趨勢(shì)[7]，該研究為survivin和p53作為聯(lián)合靶點(diǎn)治療食管癌提供了理論依據(jù)。

本研究觀察到食管癌患者經(jīng)通蓮湯聯(lián)合微波熱療后p53陽(yáng)性率較之單純微波熱療組顯著降低，表明檢測(cè)食管癌患者血清p53抗體對(duì)食管癌的治療效果評(píng)價(jià)有一定參考價(jià)值。本研究通過(guò)拉網(wǎng)細(xì)胞學(xué)法提取到活體癌組織，經(jīng)免疫組化法檢測(cè)出survivin基因在中藥聯(lián)合熱療治療后，陽(yáng)性率顯著下降，較之單純熱療組具有顯著性差異。

[1]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics. CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69

[2]陳樹(shù)山，賈永森，秦麗娟，等.通蓮湯聯(lián)合微波熱療治療老年中晚期食管癌.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（4）：585

[3]Chang E，Donahue J，Smith A，et al.Loss of p53，rather than beta-catenin overexpression，induces survivinmediated resistance to apoptosisin an esophageal cancer cell line.J Thorac Cardiovasc Surg，2010，140 （1）：225

[4]賈永森，馬會(huì)霞，王志文，等.治療食管癌的活血行氣中藥制劑及其制備方法.中國(guó)：ZL201110308544.0，2013年4 月10日

[5]張文征，張翠蓮，陳信義.微波熱療治療腫瘤的臨床應(yīng)用體會(huì).中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（21）：70

[6]王暉，王勝.食管癌患者p53表達(dá)的臨床意義.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2012，50（20）：136

[7]趙文鵬，路平，苗戰(zhàn)會(huì)，等.p53、survivin在食管癌中的作用.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，10（6）：1140

R735.1文獻(xiàn)識(shí)別碼A

1672-397X（2014）03-0034-02

陳樹(shù)山（1968-），男，本科學(xué)歷，主治醫(yī)師，從事外科臨床研究。

賈永森，jysen@163.com

2013-12-05

編輯：韋杭吳寧

河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目（2013236）；唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（121302115a）