組織學(xué)石蠟切片制作方法的改進(jìn)*

王鳳琴 張 慧

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，山東 濟(jì)寧 272067)

近年來我們在制作石蠟切片的過程中，不斷總結(jié)經(jīng)驗教訓(xùn)，分別在組織固定、脫水、透明、浸蠟等關(guān)鍵環(huán)節(jié)上采取了大量改進(jìn)措施，制作了一些優(yōu)質(zhì)的石蠟教學(xué)切片，從而提高了切片質(zhì)量?，F(xiàn)將改進(jìn)方法介紹如下。

1 材料與方法

1．1 材料

固定液、藥棉、紗布、組織塊、10%乙醇、氯仿、溫度計、蠟箱。

1．2 方法

1.2.1固定方法的改進(jìn) 在盛有固定液的瓶底上墊上藥棉或幾層紗布。容易切成小塊的新鮮組取材后馬上投入固定液，不易切成小塊的柔軟組織采用重新固定法處理，將取下較大的組織或器官先投入固定液，2～3h后組織基本硬化，再修成小塊投入新配的固定液中。

1.2.2脫水過程的改進(jìn) 在梯度乙醇脫水時，把常規(guī)30%乙醇改為更低濃度10%乙醇開始逐步升級，使組織塊中的水分逐漸被乙醇替代；在放入梯度乙醇時，要將組織塊放到濾紙上來回的反轉(zhuǎn)一下，以盡量少帶水到高濃度乙醇，放入無水乙醇之前，用吹風(fēng)機(jī)的弱風(fēng)將組織塊吹干；組織在無水乙醇的脫水時間不要超過2h；將少許硫酸銅放入無水乙醇內(nèi)若變藍(lán)色，表明無水乙醇內(nèi)已有水分，需及時更換新液，確保組織徹底脫水。

1.2.3透明步驟的改進(jìn) 組織學(xué)切片制作常用的透明劑是氯仿。常規(guī)方法將在梯度乙醇脫水后的組織直接轉(zhuǎn)入氯仿，把脫水后組織轉(zhuǎn)入氯仿3份、無水乙醇1份的混合液中1h后，再轉(zhuǎn)入氯仿Ⅰ、Ⅱ液中透明；組織放入氯仿時要用紗布包裹浸入透明劑，并將載玻片壓在其上面，使組織完全浸入透明劑內(nèi)。

1.2.4浸蠟過程的改進(jìn) 浸蠟在軟蠟箱與硬蠟箱中進(jìn)行，常規(guī)方法在蠟箱上部放1個溫度計，我們分別在2個蠟箱的中部及底部各放1個溫度計，顯示其確切溫度。先把組織塊放在兩個軟石蠟和氯仿等量混合液浸1～2h后，再移入1個硬石蠟內(nèi)浸1h，在軟蠟箱內(nèi)可延長0.5～1h，而浸硬蠟的時間不要超過1h。

2 結(jié)果

經(jīng)以上改進(jìn)方法制作的蠟塊較易切成連續(xù)切片且蠟帶不散裂，鏡下的組織結(jié)構(gòu)清晰、染色均勻、不收縮，與應(yīng)用常規(guī)方法制作的石蠟切片相比質(zhì)量明顯提高，更易于教師教學(xué)和學(xué)生觀察。

3 討論

在醫(yī)學(xué)院校，石蠟切片的質(zhì)量直接影響著教師教學(xué)和學(xué)生學(xué)習(xí)的效果。我們在制作石蠟切片的過程中，主要從以下環(huán)節(jié)加強(qiáng)了質(zhì)量控制。

3.1 固定

如果組織未得到及時固定或固定不夠充分，超過6h組織就要自溶與腐敗，制作的組織切片因自溶染色時較易脫片，鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)不清楚，呈現(xiàn)“發(fā)白”或“灰染”[1]。我們在固定液的瓶底上放上藥棉或幾層紗布，使組織不直接與瓶底接觸，此法能使固定液迅速而又均勻地從上、下、左、右、前、后各方滲入組織內(nèi)，使組織固定的更均勻、快速、充分。新鮮柔軟器官我們先固定，待基本硬化后再修剪成小塊，然后再投入新配的固定液內(nèi)，這樣既能獲得理想大小的標(biāo)本，又能使組織在常規(guī)固定時間內(nèi)完全固定。

3.2 脫水

脫水就是把固定好的組織塊用乙醇脫盡其中的水分[2]。乙醇脫水能力較強(qiáng)，常使組織過度收縮和變脆，為了克服這一缺點，除根據(jù)組織種類、組織塊大小和固定劑的不同嚴(yán)格控制脫水時間外，我們采取從低濃度10%乙醇開始逐步升級，組織塊中的水分逐漸被脫出，避免因脫水過度引起組織收縮、硬脆[3]、切片時蠟帶散裂、難以切出完整的切片。在脫水時用濾紙吸去組織塊多余的水分，并用吹風(fēng)機(jī)將其吹干，確保各級乙醇的濃度尤其是無水乙醇。根據(jù)硫酸銅遇水變藍(lán)的原理，檢測無水乙醇內(nèi)是否有水并及時更換，確保組織脫水徹底，否則，放入透明劑時常出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象，包埋后的蠟塊易出現(xiàn)凹陷和裂縫，組織較易與蠟塊分離[4]。

3.3 透明

完全脫水的組織放入氯仿透明時，組織漂浮在氯仿的上面，我們用紗布包裹組織并在其上面壓上載玻片，使組織完全浸入氯仿內(nèi)，這樣透明劑氯仿能均勻的滲入組織內(nèi)。我們將氯仿和酒精按3∶1的比例組成混合透明劑，既能使組織進(jìn)一步脫水而不引起收縮，又能使組織透明。

3.4 浸蠟

由于蠟箱上部與底部溫差是8℃左右，在蠟箱上部放1個溫度計，只能顯示蠟箱上部的確切溫度。為避免溫差對組織浸蠟帶來不利，我們通常在蠟箱的中部與底部各放1個溫度計顯示各部的真實溫度，把組織放在蠟箱相適宜的部位內(nèi)浸蠟。較大的組織在軟蠟和硬蠟內(nèi)的時間要把握好，組織在浸軟蠟時可以適當(dāng)延長時間，在硬蠟內(nèi)時間不可過長，因為硬蠟內(nèi)的溫度較高；浸蠟總體時間不可太長，否則會引起組織過度收縮，變硬、變脆、切片易碎裂、降低切片質(zhì)量甚至失敗[5]；浸蠟時間也不可過短，否則蠟不能完全浸入組織中，切不出完整的切片。我們的經(jīng)驗是此過程應(yīng)根據(jù)組織塊大小、種類和結(jié)構(gòu)的不同嚴(yán)格控制浸蠟溫度及浸蠟時間。

綜上所述，要提高每一張石蠟切片的質(zhì)量，必須處理好每一個實驗細(xì)節(jié)并能及時有效地解決實驗出現(xiàn)的問題。希望我們改進(jìn)后的組織學(xué)石蠟切片制作方法能夠?qū)氖驴蒲?、教學(xué)和臨床診斷等工作有所幫助。

[1] 侯春春，徐水.淺析影響石蠟切片質(zhì)量的關(guān)鍵因素[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25(23)：94-98.

[2] 鄒仲之，李繼承.組織學(xué)與胚胎學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:3-4.

[3] 江虹.制作石蠟切片的常見問題及處理[J].健康研究，2010，30(5)：380-382.

[4] 武智明.病理組織制片及染色的幾點體會[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2011,43(15)：11.

[5] 揚捷頻.常規(guī)石蠟切片方法的改良[J].生物學(xué)雜志，2006，23(1)：45-46.