兩種酵母對(duì)奶牛瘤胃體外發(fā)酵特性的影響

王 祚，周傳社，湯少勛，譚支良

（1．中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)中心，農(nóng)業(yè)部中南動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站,湖南長沙410125；2．中國科學(xué)院大學(xué)，北京100049）

由于畜禽生產(chǎn)中抗生素的濫用及其殘留對(duì)動(dòng)物和人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重隱患，歐盟已經(jīng)立法全面禁止抗生素在畜禽生產(chǎn)中的使用，我國及其他國家也已陸續(xù)出臺(tái)相關(guān)法律法規(guī)限制在畜禽生產(chǎn)中使用抗生素。因此，作為抗生素的替代產(chǎn)品，飼用微生物（Direct-fed Microorganism,DFM），又稱益生素（Probiotics），正日益成為一種新型的飼料添加劑得到了較為充分的研究與應(yīng)用，酵母菌更是作為熱點(diǎn)之一激發(fā)了動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)家們的廣泛研究興趣。然而，大部分關(guān)于酵母菌的研究都集中在酵母培養(yǎng)物方面，而關(guān)于活性酵母的研究則相對(duì)較少。已有的關(guān)于活性酵母的研究結(jié)果證明，添加活性酵母對(duì)反芻動(dòng)物的瘤胃發(fā)酵、生產(chǎn)性能、產(chǎn)品質(zhì)量及其安全性等方面都有積極的影響[1-2]。然而不同的試驗(yàn)所得的結(jié)果卻不盡相同，這是由于酵母菌的益生作用與試驗(yàn)動(dòng)物的種類、日糧類型、飼喂管理方式等密切相關(guān)，如在育肥期內(nèi)肉牛日糧中添加釀酒酵母可使其體重增加7.5%[3]。另有研究發(fā)現(xiàn)，添加釀酒酵母時(shí)，飼喂青貯料比飼喂高纖維的農(nóng)副產(chǎn)品和高比例的大麥效果更好[4]。另外酵母的添加作用也會(huì)因酵母菌菌種的結(jié)構(gòu)及生物活性的不同而產(chǎn)生差異。Newbold等[5]的體外發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加NCYC240與NCYC1026兩種釀酒酵母菌株能夠增加瘤胃中細(xì)菌總數(shù)及纖維降解菌的數(shù)量。

已經(jīng)證實(shí)，在奶牛日糧中添加酵母產(chǎn)品能起到如下作用：提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率、調(diào)整瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的濃度與比例、減少瘤胃中氨的濃度、增加瘤胃內(nèi)微生物種群數(shù)量等[6]，但是其作用機(jī)制尚未得到完整的研究和解釋?；钚越湍副蛔C實(shí)可以通過穩(wěn)定瘤胃pH以改善瘤胃發(fā)酵條件[7]，也有研究表明高溫條件下在日糧中添加活性酵母可以改善瘤胃環(huán)境，提高干物質(zhì)采食量、飼料報(bào)酬和生產(chǎn)性能[8]。由于活性酵母菌通常需要利用氧氣以代謝糖類或其它營養(yǎng)物質(zhì)，有研究者推測活性酵母菌可以通過消耗氧氣而平衡瘤胃中的氧化還原反應(yīng)，從而為瘤胃內(nèi)的微生物群落創(chuàng)造嚴(yán)格厭氧的最佳發(fā)酵環(huán)境[9-10]。

本試驗(yàn)的目的即運(yùn)用瘤胃體外發(fā)酵技術(shù)，初步探究并比較兩種酵母對(duì)奶牛瘤胃體外發(fā)酵特性的影響，從而預(yù)測活性酵母對(duì)奶牛生產(chǎn)性能可能的影響，以期為研究酵母在反芻動(dòng)物生產(chǎn)中的實(shí)際應(yīng)用與營養(yǎng)生理調(diào)控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1發(fā)酵底物 2種待發(fā)酵粗飼料底物分別為玉米秸稈（湖南長沙科湘甜玉1號(hào)）與水稻秸稈（湖南瀏陽湘125s）。底物經(jīng)65℃烘干24h，經(jīng)1mm孔徑篩粉碎后備用。按照楊勝等[11]確定的常規(guī)方法測定其干物質(zhì)（DM）、有機(jī)物（OM）、粗蛋白（CP）以及粗脂肪（EE）等含量；依照Hall等[12]的方法進(jìn)行調(diào)整，使用Fibretherm FT12全自動(dòng)纖維儀（GerhardtAnalytical Systems,Germany）測定中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）含量。具體成分含量見表1。

表1 兩種粗飼料底物的主要營養(yǎng)成分表 （單位：g/kg DM）

1.1.2酵母來源 本試驗(yàn)所用的兩種酵母分別為法國樂斯福集團(tuán)（Lesaffre Feed Additives,France）及中國安琪公司（Angel YeastCo.,Ltd,P.R.China）所生產(chǎn)的商業(yè)活性酵母產(chǎn)品，菌種均為釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），活菌數(shù)濃度分別為1.5×1010cfu/g和 2.0×1010cfu/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物、日糧及飼養(yǎng)管理

1.2.1瘤胃液供給動(dòng)物 選擇3頭體況良好、年齡相同（3胎次）、體重相近（500±50kg）的荷斯坦奶牛，安裝永久瘤胃瘺管后，護(hù)理20d，瘤胃瘺管安裝適應(yīng)期為1個(gè)月。

1.2.2試驗(yàn)動(dòng)物日糧及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)日糧參照NRC泌乳奶牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制[13]?；A(chǔ)日糧由水稻秸稈和精料補(bǔ)充料組成，日糧精粗比為40∶60。日糧組成及營養(yǎng)成分如表2所示。

1.3 體外發(fā)酵試驗(yàn)設(shè)計(jì)及方法

兩種活性酵母產(chǎn)品均設(shè)置4個(gè)添加水平，采取單因子區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在39℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。兩種酵母的不同添加水平作為一個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)置12h、24h、48h三個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)重復(fù)，每個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)再設(shè)置3個(gè)樣品重復(fù)。表3為本試驗(yàn)活性酵母的添加方案。

表2 試驗(yàn)動(dòng)物日糧組成及營養(yǎng)成分

表3 活性酵母添加方案 （單位：%）

1.3.1體外發(fā)酵培養(yǎng)液的配制及預(yù)處理 按照Menke與Steingass[14]的方法于體外發(fā)酵前一天配制瘤胃體外發(fā)酵厭氧緩沖液。在晨飼前通過瘺管采集奶牛瘤胃液，用四層紗布過濾后與厭氧緩沖液以1∶9的比例充分混合成發(fā)酵培養(yǎng)液?；旌虾玫呐囵B(yǎng)液在發(fā)酵前迅速通入CO22-3min后，置于39℃的水浴搖床上等待培養(yǎng)[15]。

1.3.2發(fā)酵準(zhǔn)備及培養(yǎng) 于體外發(fā)酵前24h預(yù)先在各厭氧發(fā)酵瓶中稱取0.5±0.0003 g底物，在39℃恒溫培養(yǎng)箱中放置過夜。并于體外發(fā)酵前24h預(yù)先將活性干酵母粉用蒸餾水配制成溶液。次日向發(fā)酵瓶中持續(xù)通入CO22min，隨即先后加入已配制好的不同梯度的酵母溶液和50ml體外發(fā)酵培養(yǎng)液，并再次持續(xù)通入CO23min，加上瓶塞后迅速使用針頭放氣將氣壓調(diào)節(jié)成0，此即0 h點(diǎn)的氣壓值。隨后立即放置于39℃恒溫培養(yǎng)箱中開始體外發(fā)酵48h。

1.3.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算及樣品采集分析

（1）體外發(fā)酵總產(chǎn)氣量。分別于體外發(fā)酵中的0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h使用壓力傳感器（CYG130-12，昆山雙橋傳感器測控技術(shù)有限公司）測定發(fā)酵瓶內(nèi)的氣壓，并將氣壓換算成為室溫標(biāo)準(zhǔn)氣壓下的氣體體積，換算公式為：

y=1.506x

其中1.506為實(shí)測壓強(qiáng)與體積之間的換算系數(shù)，x為壓強(qiáng)，y為產(chǎn)氣量。

將各時(shí)間點(diǎn)測得總產(chǎn)氣量運(yùn)用LE體外發(fā)酵產(chǎn)氣模型[16]進(jìn)行擬合，計(jì)算動(dòng)態(tài)發(fā)酵產(chǎn)氣參數(shù)。模型公式如下：

y=vf*[1-exp(d-t*k)]/[1+exp(b-k*t)]

上式中y表示t時(shí)間點(diǎn)底物的產(chǎn)氣量（m l）；vf表示理論最大產(chǎn)氣量（m l）；k表示產(chǎn)氣分率；b和d是曲線的形狀指標(biāo)，b>0表示曲線為s形，b<0則表示曲線非s形。

另有計(jì)算公式：

FRD0=k/[1+exp(b)]

t0.5={ln[2+exp(b)]}/k

FRD0表示發(fā)酵初期氣體產(chǎn)生速率；t0.5表示達(dá)到最大產(chǎn)氣量一半所需的發(fā)酵時(shí)間[17]。

（2）體外發(fā)酵干物質(zhì)消失率（DMD）。分別于體外發(fā)酵中的12 h、24 h、48 h取出發(fā)酵瓶，發(fā)酵液過400目尼龍布后將殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至石英坩堝中用熱蒸餾水反復(fù)沖洗，隨后置于105℃烘箱中烘干8 h以測定干物質(zhì)消失率。測定過干物質(zhì)消失率后的殘?jiān)厥沼脴悠反芊獗４妫詡銬M消失率的測定。

DMD=[1-(m/M)]×100%

式中m表示發(fā)酵后底物干物質(zhì)質(zhì)量；M表示發(fā)酵前底物干物質(zhì)質(zhì)量。

（3）體外發(fā)酵中性洗滌纖維消失率（NDFD）。NDF的測定方法參照Hall等的方法[12]，使用Fibretherm FT12全自動(dòng)纖維儀（GerhardtAnalyticalSystems,Germany）進(jìn)行測定。

NDFD=[1-(m2/m1)]×100%

式中m1表示發(fā)酵前底物中含有的NDF質(zhì)量，m2表示發(fā)酵后底物中剩余的NDF質(zhì)量。

（4）體外發(fā)酵液pH值。分別于體外發(fā)酵中的12 h、24 h、48 h取出發(fā)酵瓶，每瓶取出2ml發(fā)酵液立即用pH計(jì)（REX PHS-3C，上海儀器設(shè)備廠）測定其pH值。

（5）體外發(fā)酵液NH3-N濃度。分別于體外發(fā)酵中的12 h、24 h、48 h取出發(fā)酵瓶，每瓶取出2m l發(fā)酵液用于NH3-N濃度的測定。按照馮宗慈等改進(jìn)的比色法[18]，使用UV2450紫外可見分光光度計(jì)（Shimadzu Corporation,Japan）進(jìn)行測定。

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS（8.2版）的MIXED過程統(tǒng)計(jì)，不同活性酵母間的差異與相同活性酵母不同添加水平間的差異采用CONTRAST語句進(jìn)行比較。統(tǒng)計(jì)差異顯著性定義為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種酵母不同添加水平對(duì)粗飼料體外發(fā)酵產(chǎn)氣量和相關(guān)參數(shù)的影響

2.1.1兩種酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量和相關(guān)參數(shù)的影響 圖1與圖2分別為以玉米秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，安琪和樂斯福兩種酵母不同添加水平對(duì)體外發(fā)酵產(chǎn)氣曲線的影響。

圖1 安琪酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的影響

圖2 樂斯福酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的影響

表4為以玉米秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，安琪和樂斯福兩種酵母不同添加水平對(duì)體外發(fā)酵產(chǎn)氣相關(guān)參數(shù)的影響。

表4 安琪酵母與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵相關(guān)產(chǎn)氣參數(shù)的影響

通過圖1、圖2和表4可以看出，以玉米秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)體外發(fā)酵參數(shù)Vf值、d值、k值、FRD0值和 t0.5值均無顯著影響（P>0.05），而添加樂斯福酵母的發(fā)酵參數(shù)b值顯著低于安琪酵母（P<0.05）。安琪酵母不同添加水平對(duì)Vf值、b值、d值和k值均無顯著影響（P>0.05）；而對(duì)FRD0值和t0.5值均存在顯著的一次效應(yīng)（P<0.05）。樂斯福酵母不同添加水平對(duì)Vf值沒有顯著影響（P>0.05）；而對(duì)b值、FRD0值和t0.5值均存在顯著的三次效應(yīng)（P<0.05），對(duì)d值和k值均存在顯著的二次效應(yīng)（P<0.05）。酵母類型與添加水平對(duì)Vf值、d值和k值均沒有表現(xiàn)出顯著的互作效應(yīng)（P>0.05）；而對(duì)b值、FRD0值和t0.5值表現(xiàn)出顯著的互作效應(yīng)（P<0.05）。隨著安琪酵母添加水平的增加，F(xiàn)RD0值呈顯著的增加趨勢，當(dāng)添加水平為0.075%時(shí)達(dá)到最大；而t0.5值則呈顯著的下降趨勢，當(dāng)添加水平為0.075%時(shí)達(dá)到最小。

2.1.2兩種酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量和相關(guān)參數(shù)的影響 安琪和樂斯福兩種酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣曲線的影響如圖3、圖4所示。

以水稻秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，安琪和樂斯福兩種酵母不同添加水平對(duì)體外發(fā)酵產(chǎn)氣相關(guān)參數(shù)的影響如表5所示。

通過圖3、圖4和表5可以看出，以水稻秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)各體外發(fā)酵參數(shù)均無顯著影響（P>0.05）。樂斯福酵母不同添加水平對(duì)體外發(fā)酵各參數(shù)均存在顯著的三次效應(yīng)（P<0.05），各參數(shù)隨添加水平的升高呈先降低、隨后升高、又再次降低的趨勢。安琪酵母不同添加水平對(duì)Vf值、b值和FRD0值均無顯著影響（P>0.05）；而對(duì)d值存在顯著的二次效應(yīng)（P<0.05），對(duì)k值和t0.5值存在顯著的一次效應(yīng)（P<0.01）。酵母類型與添加水平對(duì)Vf值和t0.5值表現(xiàn)出顯著的互作效應(yīng)（P<0.05），對(duì)d值和FRD0值表現(xiàn)出極顯著的互作效應(yīng)（P<0.01）；而對(duì)b值和k值沒有表現(xiàn)出顯著的互作效應(yīng)（P>0.05）。隨著樂斯福酵母添加水平的增加，F(xiàn)RD0值呈整體上升趨勢，當(dāng)添加水平為0.075%時(shí)FRD0值達(dá)到最大。

圖3 安琪酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的影響

圖4 樂斯福酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵產(chǎn)氣量的影響

表5 安琪酵母與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵相關(guān)產(chǎn)氣參數(shù)的影響

2.2 兩種酵母不同添加水平對(duì)粗飼料體外發(fā)酵DMD和NDFD的影響

2.2.1兩種酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵DMD和NDFD數(shù)的影響 以玉米秸稈為體外發(fā)酵底物時(shí)，安琪和樂斯福酵母不同添加水平對(duì)DMD和NDFD的影響見表6。

通過表6可以得出，添加樂斯福酵母時(shí)玉米秸稈的DMD顯著高于添加安琪酵母（P<0.05），但兩種活性酵母不同添加水平之間玉米秸稈DMD并不存在顯著性差異（P>0.05），同時(shí)DMD呈隨樂斯福酵母添加水平提高而升高的趨勢。酵母與添加水平之間也未表現(xiàn)出顯著的交互效應(yīng)（P>0.05）。酵母類型對(duì)NDFD沒有顯著影響（P>0.05），樂斯福酵母添加水平和酵母與添加水平之間的互作均對(duì)NDFD沒有顯著性影響；但安琪酵母添加水平對(duì)NDFD的影響呈極顯著的二次效應(yīng)（P<0.01）。

表6 安琪與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵DMD和NDFD的影響

2.2.2兩種酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵DMD和NDFD數(shù)的影響 添加兩種酵母對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵DMD及NDFD的影響如表7所示。

通過表7可知，兩種酵母對(duì)水稻秸稈DMD的影響達(dá)到了極顯著水平（P<0.01），并且酵母和添加水平之間亦存在極顯著的交互效應(yīng)（P<0.01）；安琪酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈DMD無顯著影響（P>0.05），而樂斯福酵母添加水平對(duì)DMD的影響呈極顯著的一次效應(yīng)（P<0.01）。對(duì)于NDFD而言，兩種酵母、酵母添加水平以及酵母和添加水平的交互效應(yīng)對(duì)NDFD均無顯著影響（P>0.05）。

表7 安琪酵母與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵DMD和NDFD的影響

2.3 兩種酵母不同添加水平對(duì)粗飼料體外發(fā)酵pH和NH3-N的影響

2.3.1兩種酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵pH和NH3-N的影響 表8所示為以玉米秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)體外發(fā)酵液pH和NH3-N的影響。

由表8可以得出，添加兩種酵母對(duì)以玉米秸稈為底物的體外發(fā)酵液pH值無顯著性影響（P>0.05），酵母與添加水平之間的互作效應(yīng)也未達(dá)到顯著性水平（P>0.05），安琪酵母各添加水平之間對(duì)pH值表現(xiàn)出極顯著的一次效應(yīng)（P<0.01），而樂斯福酵母各添加水平之間對(duì)pH值則表現(xiàn)出顯著的二次效應(yīng)（P<0.05）。對(duì)NDFD而言，兩種酵母、酵母添加水平以及酵母和添加水平的交互效應(yīng)對(duì)NDFD均無顯著影響（P>0.05）。

表8 安琪酵母與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)玉米秸稈體外發(fā)酵pH和NH3-N的影響

2.3.2兩種酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵pH和NH3-N的影響 以水稻秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)體外發(fā)酵液pH和NH3-N的影響如表9所示。

通過表9可以發(fā)現(xiàn)，添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)以水稻秸稈為底物的體外發(fā)酵液pH值和NH3-N濃度均有顯著影響（P<0.05），且兩種酵母添加水平、酵母和添加水平的交互作用對(duì)pH值和NH3-N濃度呈顯著影響（P<0.05）。安琪酵母不同添加水平間的pH值和NH3-N濃度均表現(xiàn)出顯著的二次效應(yīng)（P<0.05），樂斯福酵母各添加水平間的pH值和NH3-N濃度則呈現(xiàn)出極顯著的一次效應(yīng)（P<0.01）。

3 結(jié)論與討論

表9 安琪酵母與樂斯福酵母不同添加水平對(duì)水稻秸稈體外發(fā)酵pH和NH3-N的影響

3.1 結(jié)論

本試驗(yàn)通過奶牛瘤胃體外發(fā)酵技術(shù)，初步探究并比較了安琪酵母與樂斯福酵母對(duì)于瘤胃發(fā)酵特性的影響。得出以下結(jié)論：

（1）添加安琪和樂斯福兩種酵母對(duì)玉米秸稈和水稻秸稈兩種底物體外發(fā)酵的產(chǎn)氣量和LE產(chǎn)氣參數(shù)均無顯著影響，然而均顯著地提高了玉米秸稈和水稻秸稈的DMD。

（2）添加兩種酵母對(duì)以玉米秸稈為發(fā)酵底物的體外發(fā)酵液pH值及NH3-N濃度均未表現(xiàn)出顯著性效應(yīng)，但是分別顯著地降低了以水稻秸稈為發(fā)酵底物的體外發(fā)酵液pH值及NH3-N濃度。樂斯福酵母對(duì)于以玉米秸稈和水稻秸稈DMD的提高作用均顯著高于安琪酵母；對(duì)NH3-N濃度的降低作用也顯著地高于安琪酵母。

（3）從總體數(shù)據(jù)結(jié)果來看，水稻秸稈的發(fā)酵效果要好于玉米秸稈；樂斯福酵母的添加效果要明顯優(yōu)于安琪酵母，并且0.075%為其最佳添加水平。

3.2 討論

體外發(fā)酵產(chǎn)氣量一定程度上可以反映出發(fā)酵底物為瘤胃微生物所利用的程度[19]，因此通過測定兩種酵母不同添加水平下體外發(fā)酵的產(chǎn)氣量，可以粗略地估計(jì)其對(duì)于DMD的影響。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，添加活性酵母并未對(duì)以玉米秸稈和水稻秸稈為底物的體外發(fā)酵產(chǎn)氣量產(chǎn)生顯著性影響，且目前也缺乏與之相關(guān)的研究報(bào)告與本試驗(yàn)的這一結(jié)果進(jìn)行比較。FRD0表示體外發(fā)酵12h之前的發(fā)酵初期產(chǎn)氣速率，t0.5值則表示產(chǎn)氣量達(dá)到最大理論產(chǎn)氣量一半所需要的發(fā)酵時(shí)間[17]。本試驗(yàn)以玉米秸稈為底物的體外發(fā)酵中，F(xiàn)RD0值均表現(xiàn)出隨著兩種活性酵母添加水平的提高而增大的趨勢，且t0.5值也表現(xiàn)出隨著酵母添加水平的提高而減小的趨勢，這一現(xiàn)象表明隨著兩種酵母添加水平的提高，在發(fā)酵前期均能加快玉米秸稈降解速率、進(jìn)而加快產(chǎn)氣速率、增加產(chǎn)氣量的趨勢，而這一趨勢之所以未能達(dá)到顯著水平，可能是因?yàn)樵囼?yàn)中酵母的添加水平還不足以導(dǎo)致顯著性影響。在以水稻秸稈為底物的體外發(fā)酵中，添加兩種酵母卻有增大t0.5值的趨勢，表明兩種酵母有降低發(fā)酵前期產(chǎn)氣量的趨勢。玉米秸稈與水稻秸稈兩者之間的這一差別可能與兩種底物之間的營養(yǎng)成分差異相關(guān)。

DM和NDF降解率是體現(xiàn)瘤胃發(fā)酵過程中粗飼料利用率的重要指標(biāo)。在本試驗(yàn)中，添加酵母顯著地提高了玉米秸稈的DMD，并極顯著地提高了水稻秸稈的DMD。有研究表明添加酵母菌能夠增加瘤胃中纖維分解菌的數(shù)量[20]，而纖維分解菌所分泌的纖維素酶能夠顯著的提高粗飼料體外發(fā)酵的DMD[21]，本試驗(yàn)的這一結(jié)果與之相吻合。另外，一般認(rèn)為發(fā)酵產(chǎn)氣量與DMD緊密相關(guān)[22]，但本試驗(yàn)中添加酵母并未對(duì)體外發(fā)酵產(chǎn)氣量產(chǎn)生顯著性影響，這可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)所選用的兩種酵母改變了底物的降解方式，從而使底物更多地通過生成氣體（CO2、CH4等）較少的反應(yīng)途徑實(shí)現(xiàn)降解。尤其當(dāng)以玉米秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，添加樂斯福酵母的DMD要顯著高于安琪酵母；而以水稻秸稈為發(fā)酵底物時(shí)，添加樂斯福酵母的DMD更是極顯著地高于安琪酵母，這說明樂斯福酵母對(duì)于粗飼料降解的效果要明顯優(yōu)于安琪酵母。然而，不管是以玉米秸稈作為發(fā)酵底物或是以水稻秸稈作為發(fā)酵底物，添加兩種酵母對(duì)兩者的NDFD均無顯著性作用。這種結(jié)果的出現(xiàn)一方面可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)所選用的兩種酵母并不能增強(qiáng)NDF相關(guān)酶的分泌或活性；另一方面也有可能是本試驗(yàn)酵母的添加水平還不足以導(dǎo)致對(duì)NDFD的顯著性影響。

瘤胃pH值是評(píng)價(jià)瘤胃發(fā)酵狀況的基本指標(biāo)，決定著瘤胃微生物對(duì)底物的發(fā)酵利用效率[23]。維持正常的瘤胃pH值是保證瘤胃正常發(fā)酵的必要前提，而奶牛瘤胃液pH值的正常范圍為5.5-7.5[24]。Van Houtert認(rèn)為，瘤胃微生物最大生長速度的pH值在5.7以上[25]。本試驗(yàn)以玉米秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，所有的pH值都處于正常范圍內(nèi)；以水稻秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，樂斯福酵母處理組的pH值顯著的低于安琪酵母處理組，并且隨著添加水平的升高而逐漸降低，所有處理的pH值也均處于正常范圍內(nèi)。這說明添加酵母對(duì)于維持瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)衡具有一定的積極作用。

瘤胃NH3-N濃度在一定程度上反映出特定日糧條件下蛋白質(zhì)降解與合成間的平衡狀態(tài)[26]，NH3-N是瘤胃微生物合成微生物蛋白和機(jī)體蛋白的主要原料，其最佳濃度范圍為63-275mg/L[27-29]。本試驗(yàn)中各處理組的NH3-N濃度均落在最佳范圍之內(nèi)，并且以水稻秸稈作為發(fā)酵底物時(shí)，樂斯福酵母處理組的NH3-N濃度要顯著低于安琪處理組，并且隨著添加水平的提高而降低；而前面已經(jīng)提到以水稻秸稈作為底物時(shí)，樂斯福酵母處理組的DMD要極顯著高于安琪酵母組，而且隨著添加水平的提高而升高。這一聯(lián)系表明NH3-N濃度與DMD之間可能存在有密切的關(guān)聯(lián)，可能是因?yàn)樘砑訕匪垢＝湍柑岣吡薉MD而加快了物質(zhì)與能量的代謝進(jìn)程，從而需要更多的微生物蛋白及機(jī)體蛋白以維持代謝平衡，因此促進(jìn)了對(duì)NH3-N的利用而降低了NH3-N濃度，但是此推測需要足夠的相關(guān)試驗(yàn)研究加以論證。

本試驗(yàn)初步探究并比較了兩種酵母對(duì)奶牛瘤胃兩種底物體外發(fā)酵的影響，然而酵母作用于瘤胃發(fā)酵特性的具體途徑及機(jī)制還不夠明確，這還有待于通過進(jìn)一步的體外試驗(yàn)以及動(dòng)物試驗(yàn)而得到更充分更透徹的研究。

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