膠體金法與酶聯(lián)免疫法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的對(duì)照研究＊

蔣峻峰，周雪蓮（重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院輸血科 402360）

丙型肝炎是慢性感染性疾病，它可經(jīng)由輸血、針刺和毒品傳播感染，危害人類(lèi)健康，據(jù)統(tǒng)計(jì)世界丙型肝炎病毒（HCV）感染者約有2億，且呈增加趨勢(shì)［1］。此病可導(dǎo)致肝臟纖維化繼而發(fā)生炎癥，嚴(yán)重者肝臟組織會(huì)逐漸壞死，病變?yōu)楦斡不踔涟┌Y。HCV 是致病的根本原因，感染初期不易發(fā)現(xiàn)［2］，受到外界刺激時(shí)，HCV 會(huì)加速病情發(fā)展。因此，及時(shí)檢測(cè)HCV 感染有助于預(yù)防病情加重。丙型肝炎感染者血液中會(huì)大量存在丙型肝炎病毒抗體（HCV－Ab），這是檢測(cè)丙型肝炎的重要標(biāo)志［3－4］。本試驗(yàn)采用膠體金法和酶聯(lián)免疫法（ELISA 法）檢測(cè)HCVAb，旨在對(duì)比兩者的檢測(cè)效果。具體結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)選取2011年1月至2013年12月本院收治的丙型肝炎患者210例為觀察組；其中男150例，女60例，平均年齡（37.6±5.7）歲。另外選擇健康體檢人員100例為健康對(duì)照組，其中男68例，女32例，平均年齡（37.8±5.8）歲。兩組間一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。

1.2 儀器與試劑酶標(biāo)儀（Multiskan MK3）、高精度加樣器、PW－960全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)等儀器。膠體金試劑盒由艾康生物醫(yī)藥有限公司提供，ELISA 試劑盒由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集患者采集靜脈血3～5mL于含促凝試管中，經(jīng)30min凝集［5］，然后將試管置于離心機(jī)中離心，吸取血清后置于冷藏室中低溫保存［6］。

1.3.2 膠體金法檢測(cè)兩組患者均接受膠體金方法檢測(cè)，首先采用高特異性的抗原抗體反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)。試劑含有被預(yù)先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T）的目的重組抗原和包被在金標(biāo)墊上的丙型肝炎重組抗原膠體金顆粒。使用前將試劑和標(biāo)本恢復(fù)至20～30℃，然后從原包裝鋁箔中取出試紙條，用塑料吸管吸取50μL受試者的血清垂直滴入加樣區(qū)。10～30 min內(nèi)試紙條在反應(yīng)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)位置出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為陽(yáng)性，僅在質(zhì)控線(xiàn)位置出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為陰性，質(zhì)控線(xiàn)位置未出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為無(wú)效。

1.3.3 ELISA 法檢測(cè)兩組患者均接受ELISA 法檢測(cè)，將試劑于室溫下平衡30min后取出板條，每板設(shè)置陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔［7］，樣品對(duì)應(yīng)微孔板按序編號(hào)。分別在相應(yīng)孔中加入稀釋液100μL后，在各孔中加入待測(cè)樣本血清和陰、陽(yáng)性對(duì)照10μL，用封板膜封板，置于37℃溫育60min，取出后用洗板機(jī)洗板5遍，最后一次盡量扣干。每孔加入酶標(biāo)試劑100μL，用封板膜封板，置于37℃溫育30min，取出后用洗板機(jī)洗板5遍，最后一次盡量扣干。每孔加入顯色劑A、B 液各50μL輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色30 min后，每孔加入50μL終止液，輕輕震蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450／630nm 測(cè)定各孔A值。吸光度值大于或等于1時(shí)HCV－Ab為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以α＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)丙型肝炎患者結(jié)果比較膠體金法檢測(cè)出陽(yáng)性者206例（98.10%），ELISA法檢測(cè)出陽(yáng)性者204例（97.14%），兩者間陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.172，P＝0.679）。

2.2 兩種方法檢測(cè)健康體檢者結(jié)果比較膠體金法檢測(cè)出陰性者94例（94.00%），有6例假陽(yáng)性；ELISA 法檢測(cè)出陰性者90例（90.00%），有10例假陽(yáng)性。兩者間陰性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.136，P＝0.712）。

3 討論

丙型肝炎為臨床病死率較高的疾病，其可血液、母嬰和性傳播等傳播。多數(shù)HCV 感染呈亞臨床狀態(tài)，易延誤治療，病情進(jìn)一步惡化時(shí)會(huì)發(fā)生肝硬化甚至肝癌。及時(shí)有效的檢測(cè)對(duì)于臨床預(yù)防和治療有十分重要的意義［8］。HCV 感染者血液中會(huì)出現(xiàn)HCV－Ab，臨床常用膠體金法、ELISA 法和FQ－PCR 法等方法來(lái)檢測(cè)HCV 感染情況，但由于FQ－PCR 法影響因素較多，試驗(yàn)較難控制，故本研究選用膠體金法和ELISA 法來(lái)檢測(cè)HCV 感染情況，并比較兩者的有效性以此找出更佳的檢測(cè)方法［9］。

膠體金是氯金酸在還原劑作用下聚合而成的金顆粒，它是穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，通過(guò)膠體金標(biāo)記，可以檢測(cè)蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)［10］。膠體金在人體環(huán)境下帶負(fù)電，能夠結(jié)合蛋白質(zhì)表面正電荷基團(tuán)［11］，此過(guò)程即可達(dá)到標(biāo)記的作用又不會(huì)影響蛋白質(zhì)的性質(zhì)。HCV－Ab即為蛋白質(zhì)，因此它可與膠體金結(jié)合進(jìn)而被標(biāo)記，本試驗(yàn)所用的免疫金標(biāo)記技術(shù)，即利用其高電子密度特性，通過(guò)結(jié)合反應(yīng)，標(biāo)記物大量聚集，進(jìn)而形成（粉）紅色斑點(diǎn)。此方法操作簡(jiǎn)單，操作人員無(wú)需經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)；不存在放射性同位素污染，應(yīng)用便捷且廣泛。ELISA 法是常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法之一，其機(jī)理為酶復(fù)合物與抗體結(jié)合并顯色，通過(guò)顯色反應(yīng)來(lái)達(dá)到標(biāo)記和檢測(cè)的目的。

本項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，膠體金法和ELISA 法均可有效檢測(cè)出HCV－Ab，在210例丙型肝炎患者中，膠體金法檢測(cè)出了206例，僅漏診4例；ELISA 法亦檢測(cè)出204例，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。然而，在健康人群中ELISA 法誤測(cè)率略高，出現(xiàn)10例假陽(yáng)性，膠體金法僅出現(xiàn)6例假陽(yáng)性，二者比較ELISA 法檢測(cè)靈敏度稍高。膠體金法檢測(cè)速度更加快捷，且操作更簡(jiǎn)單，它無(wú)需特殊儀器和設(shè)備，經(jīng)濟(jì)便利，為了提高檢測(cè)準(zhǔn)確性，可以將二者聯(lián)合使用，這可以減少漏測(cè)率和誤測(cè)率。另有研究表明，采用ELISA 法和膠體金法準(zhǔn)確率分別為100.0%和96.0%［12］，與本項(xiàng)研究結(jié)果相同。說(shuō)明本項(xiàng)研究具有高可靠性和臨床價(jià)值。然而，本研究中ELISA 法準(zhǔn)確率并未達(dá)到100.0%，可能是由于加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、洗板徹底性等諸多因素的影響。

綜上所述，膠體金法和ELISA 法均可有效檢測(cè)HCV 抗體，在檢測(cè)靈敏度和特異性方面差異不大，但ELISA 法操作步驟多，實(shí)驗(yàn)需要3h，需配置酶標(biāo)儀、洗板機(jī)等設(shè)備，不適用于基層單位。膠體金法具有操作簡(jiǎn)便、快捷、可單份檢測(cè)、便于保存、不需特殊設(shè)備、肉眼可直接觀察結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于基層單位和快速篩查。

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