乳腺癌標本中BRCA－1蛋白表達與HER－2基因的臨床意義

黃承樂（廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗科 533000）

乳腺癌是我國婦女常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其病死率占女性惡性腫瘤病死率的20%左右［1］。乳腺癌的主要發(fā)病部位在腺泡上皮及乳腺導管，根據(jù)不同的組織結構和病理特點可分為導管內原位癌、浸潤性導管癌、小葉原位癌、浸潤性小葉癌等多種類型，臨床中常見的為浸潤性導管癌。有文獻報道顯示，乳腺組織因為負調控因子失控，導致腫瘤細胞形成，為腫瘤細胞提供生長需要的營養(yǎng)物質［2］。腫瘤細胞在生長的同時釋放表皮生長因子促進腫瘤生長區(qū)淋巴的形成，而且還釋放血管內皮生長因子促進血管生成。乳腺浸潤性導管癌早期發(fā)生淋巴結轉移的概率高，且預后差。及早診斷并治療乳腺癌成為醫(yī)務人員的重要研究課題。隨著分子生物學的不斷發(fā)展，乳腺癌生物學行為得到更深層次的研究，發(fā)現(xiàn)乳腺癌特異性標志物，對早期預防、診斷、治療乳腺癌具有重要意義［3］。本文通過研究原癌基因人類表達生長因子受體2（HER－2）和乳腺癌易感基因1（BRCA－1），探討其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2013年1～12月乳腺外科手術切除的病理標本85例，病理明確診斷為乳腺癌病變患者，其中70例乳腺浸潤性導管癌、8例乳腺導管內癌、7例乳腺髓樣癌。研究對象均為女性，年齡28～76歲，平均45.34歲。患者均無乳腺癌家族史，實施乳腺癌根治性切除手術，術前未接受放化療治療。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 BRCA－1鼠抗單克隆抗體試劑盒、HER－2基因擴增檢測試劑盒，所有檢驗操作均按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2 檢測方法 BRCA－1采用免疫組化法檢測［4］。先將標本固定進行包埋切片處理，采用氧化物酶復合法進行檢測，用微波進行熱修復抗原，待冷卻后采用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，再用過氧化氫阻斷內源性氧化物酶，用正常山羊血清進行封閉孵化。滴加一抗過夜后，滴加二抗，每次滴加后用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，再次滴加過氧化物酶復合物溶液，用DAB顯色，蘇木素染色，烤片中性樹膠封片。用一抗作為陰性對照，與已知BRCA－1陽性標準片為陽性對照。HER－2采用熒光復位雜交檢測［5］。先將標本固定進行包埋切片處理，將組織切片烤片過夜，組織切片脫蠟，脫水，浸入蛋白酶K工作液中，漂洗2次。將組織切片再次進行脫水，干燥玻璃片，與探針雜交過夜，洗片后染色加蓋玻片。

1.3 結果判定 免疫組化法檢測結果判定：400倍視野下清晰見棕黃色顆粒為陽性，表達不清晰為陰性［6］。熒光原位雜交結果判定：計數(shù)細胞集合中各信號清晰可見，細胞核清晰無重疊現(xiàn)象，統(tǒng)計細胞中紅信號數(shù)／細胞中綠信號數(shù)比值，比值小于1.8為陰性，比值大于2.2為陽性［7］。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 BRCA－1基因檢出結果比較 BRCA－1基因在導管內癌陽性率為62.3%（5／8），浸潤性導管癌陽性率為77.3%（54／70），乳腺髓樣癌陽性率為71.4%（5／7），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。BRCA－1基因在有淋巴轉移患者陽性率為62.9%（22／35），無淋巴結轉移患者陽性率為82.5%（33／40），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 HER－2基因陽性檢出結果比較 在85例乳腺癌病理標本中，其陽性檢出率為48.2%（41／85）；有淋巴轉移患者陽性率為88.6%（31／35）例，無淋巴結轉移患者陽性率為25.0%（10／40），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

乳腺癌是復雜的惡性疾病，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重影響女性健康及生活質量?，F(xiàn)階段對乳腺癌的治療主要采用外科手術、輔助藥物及放化療治療，但其預后效果并不理想。早期預防和診斷乳腺癌，采取合理的基因靶向治療是延長患者生存時間，提高預后的有效方法。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展由多種基因參與完成，在這一復雜的病理過程中，對蛋白質表達的深入了解可進一步了解基因的變化和其發(fā)病機制。BRCA－1基因是與乳腺癌發(fā)生相關的抑癌基因，可作為輔助診斷、預防、治療乳腺癌的重要生物學標志物。檢測乳腺癌手術病理組織中的BRCA－1和HER－2情況，可分析兩個基因表達與乳腺癌病理特征之間的關系。

BRCA－1為一種腫瘤抑制基因，其抑癌作用主要呈隱性，在細胞增殖時BRCA－1可抑制細胞分裂，誘發(fā)細胞凋亡，是一種重要的細胞周期負調控制因子［8］。當BRCA－1發(fā)生基因突變后，其喪失調控能力，細胞失去正常分化、增殖作用，導致細胞發(fā)生惡變。BRCA－1基因為乳腺癌的易感基因，具有修復DNA、調節(jié)細胞周期、轉錄激活基因等功能。有文獻報道顯示，家族性乳腺癌患者的BRCA－1基因突變，導致BRCA－1蛋白表達喪失或功能改變，從而使家族性乳腺癌的發(fā)病率明顯升高。

HER－2基因是人類原癌基因的一種，定位在人染色體上，本身具有刺激生長性，是一種跨膜酪氨酸激酶受體，功能區(qū)主要包括細胞內區(qū)、細胞外區(qū)和跨膜區(qū)，對細胞的增殖、分化、轉化、凋亡起到重要的調控作用。正常狀態(tài)下HER－2基因處于非激活狀態(tài)，參與細胞的正常分化、生長。HER－2是乳腺癌重要的預測和預后標志物。當其因外界某種刺激過度表達時，會導致細胞無節(jié)制生長，細胞發(fā)生癌變。有文獻報道顯示［8］，大部分乳腺癌患者均存在HRE－2基因擴增。HER－2的擴增不但與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有相關性，也是制定有效治療方案的重要參考指標。

學者發(fā)現(xiàn)BRCA－1的類型和病理特征與3陰性乳腺癌間存在某種聯(lián)系。本研究結果顯示，BRCA－1基因與HER－2基因在導管內癌、浸潤性導管癌和乳腺髓樣癌之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而在有淋巴轉移和無淋巴轉移患者中的陽性率分別為62.9%、82.5%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。同時，BRCA－1檢出陽性的乳腺癌病理檢查中HER－2陽性率較低，說明HER－2陽性率可作為BRCA－1乳腺癌相對獨立的預后指標。

綜上所述，BRCA－1蛋白、HER－2基因在乳腺癌中發(fā)揮了無法替代的作用，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關系。

［1］利基林，唐艷萍，梁新強，等.乳腺癌患者BRCA－1蛋白表達與 HER－2基因擴增的相關性［J］.廣西醫(yī)學，2013，35（4）：396－398.

［2］孟榮榮，應明真，王雅杰.BRCA基因相關散發(fā)性乳腺癌研究進展［J］.醫(yī)學研究雜志，2012，41（4）：4－7.

［3］阮建波，康東平.乳腺癌手術標本BRCA－1蛋白表達與HER－2基因擴增的臨床意義［J］.求醫(yī)問藥：學術版，2011，9（3）：36.

［4］趙善鵬，于澤平，顧軍，等.乳腺癌組織中BRCA1的蛋白表達與乳腺癌的相關性分析研究［J］.醫(yī)學研究生學報，2011，24（10）：1049－1053.

［5］吳濤，歐江華，哈木拉提·吾甫爾.新疆遺傳性乳腺癌BRCA－1／2基因突變檢測的研究［J］.新疆醫(yī)科大學學報，2013，36（10）：1442－1446.

［6］陳亞民.乳腺癌相關基因表達及其臨床意義［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2011，13（4）：132－136.

［7］解云濤.家族性乳腺癌BRCA1、2基因突變檢測及臨床應用［J］.中國實用外科雜志，2013，33（3）：233－235.

［8］任婕，魏敏杰，金鋒，等.散發(fā)性乳腺癌中影響B(tài)RCA1蛋白失表達的參數(shù)分析［J］.中國腫瘤臨床，2008，35（2）：99－103.