骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞最新研究進(jìn)展*

魏 紅 彭圣智綜述 王 旭 審校

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，山東 濟(jì)寧 272067)

骨肉瘤是一種常見的骨原發(fā)惡性腫瘤，青少年多見，早期診斷困難，病死率和轉(zhuǎn)移率極高，傳統(tǒng)的手術(shù)治療往往給患者帶來無法彌補(bǔ)的創(chuàng)傷。隨著新輔助化療的廣泛應(yīng)用和手術(shù)技術(shù)的進(jìn)展，骨肉瘤患者的5a生存率得到了很大提高,但受腫瘤細(xì)胞耐藥機(jī)制和免疫逃逸的影響，目前骨肉瘤的療效處于瓶頸狀態(tài)。根據(jù)腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell,CSC)理論，現(xiàn)有的治療手段并沒有將CSC完全殺滅，而只要有CSC的存在，就可以繼續(xù)自我更新和不斷增殖分化重新形成腫瘤，導(dǎo)致復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此本文就骨肉瘤CSC的分離鑒定、多潛能等生物學(xué)特性、起源等問題加以討論，為進(jìn)一步研究骨肉瘤CSC及研發(fā)新的針對(duì)CSC的藥物提供一定的理論依據(jù)。

1 骨肉瘤及腫瘤干細(xì)胞學(xué)說

“腫瘤干細(xì)胞”學(xué)說認(rèn)為,正是CSC的增殖才形成了腫瘤。這些CSC具有共同的特點(diǎn)：耐藥性、形成腫瘤能力及不對(duì)稱分裂。這些特點(diǎn)已經(jīng)被應(yīng)用來鑒別CSC，但要考慮到不同的組織起源。已有證據(jù)顯示從上皮、神經(jīng)外胚層及間葉組織腫瘤中分離出的CSC有不同的生長環(huán)境的需求，表達(dá)不同的細(xì)胞表面蛋白以及存在不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活。

目前，骨肉瘤的起源仍不很清楚，近來很多研究提出骨肉瘤中可能存在CSC。最早提出骨肉瘤中存在CSC的是Parker-Gibbs等[1]，他們利用去血清懸浮培養(yǎng)法從骨腫瘤(骨肉瘤、橫紋肌肉瘤和軟骨肉瘤)中觀察到了類似于乳腺癌和腦腫瘤的肉瘤細(xì)胞球，這些細(xì)胞球有很強(qiáng)的自我更新能力和多向分化能力，能再次形成懸浮細(xì)胞球并且可以向骨和脂肪組織分化。這些懸浮細(xì)胞球有形成腫瘤的能力，對(duì)化療藥物耐受。這種具有干細(xì)胞樣特性的細(xì)胞球高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)特有的表面標(biāo)志物如CD133、CD117和Stro-1[2-3]。人骨肉瘤細(xì)胞系中分離出的懸浮細(xì)胞球中CD133+細(xì)胞可以在裸鼠移植瘤模型中形成腫瘤[3]。

在骨肉瘤小鼠模型中一些干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記物已被證實(shí)。從這些小鼠腫瘤中分離出來的細(xì)胞具有多向分化能力，能形成懸浮細(xì)胞球，表達(dá)鼠干細(xì)胞表面抗原Sca-1。除了形成懸浮細(xì)胞球的能力外，骨肉瘤中的CSC具有外排染料的能力，且高表達(dá)醛脫氫酶(ALDH1)活性[4-6]。另外，細(xì)胞球中INK4、P16INK4α和P19ARF基因表達(dá)下降，提示這種細(xì)胞可以逃避p53、Rb 基因調(diào)節(jié)的老化和凋亡[7]。這些研究和探索為骨肉瘤中含有CSC提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。

2 骨肉瘤干細(xì)胞的分離鑒定

骨肉瘤干細(xì)胞的分離是一個(gè)關(guān)鍵問題。目前分離鑒定CSC的方法主要是先通過細(xì)胞表面分子標(biāo)志分離腫瘤細(xì)胞亞群，然后找出具有自我更新、分化增殖能力、成瘤能力的亞群，從而鑒定出CSC或者是應(yīng)用無血清培養(yǎng)基、懸浮培養(yǎng)法來分離CSC。這些技術(shù)方法大多都是依賴于CSC與普通腫瘤細(xì)胞的區(qū)別點(diǎn)。如果我們分離鑒定的依據(jù)是不可逆的，分選的結(jié)果只能是獲得一類CSC亞群，而其他的CSC亞群很可能會(huì)被遺漏，同時(shí)也不能完全排除非干細(xì)胞性腫瘤細(xì)胞的干擾，因此目前的分離鑒定方法仍需要不斷完善。應(yīng)用不同的方法分選CSC的報(bào)道總結(jié)較多，在此對(duì)這些方法及存在的問題加以綜述。

2.1 基于表面標(biāo)記物的分選

作為間葉組織起源的腫瘤，MSC的特異性表面標(biāo)記物常被用來分離骨肉瘤干細(xì)胞。由于目前沒有公認(rèn)的MSC的標(biāo)記物，一些表面標(biāo)記物被單獨(dú)或聯(lián)合用來從細(xì)胞系或者人腫瘤標(biāo)本中分離和鑒定骨肉瘤干細(xì)胞。然而，目前的研究結(jié)果常需進(jìn)一步驗(yàn)證，因?yàn)闃?biāo)記物的表達(dá)很多情況下依賴于使用的是哪一種細(xì)胞系(新鮮分離的腫瘤組織，原代細(xì)胞，傳代的細(xì)胞)，以及傳代的范圍(體內(nèi)還是體外)；另外，不同的物種，不同的分離方法(酶裂解或機(jī)械性裂解)標(biāo)記物表達(dá)也是不同的。例如，不同的培養(yǎng)環(huán)境可以使CSC中CD133陽性細(xì)胞所占比例有所不同[8]。因此由于缺乏明確的間充質(zhì)源性CSC的標(biāo)記物，而且多因素影響這些標(biāo)記物的表達(dá)，所以單純依賴表面標(biāo)記物分選CSC是不夠的，還要結(jié)合CSC功能方面的特點(diǎn)才能做到有效分選。不同的細(xì)胞亞群可用不同的表面標(biāo)記物分選出來，這也提示在腫瘤中可能存在不同類型的干細(xì)胞，或者說CSC也分等級(jí)，既存在靜止期的干細(xì)胞，又有活動(dòng)期的干細(xì)胞，而且在不同的環(huán)境中CSC可以相互轉(zhuǎn)化[9]。

2.2 基于細(xì)胞本質(zhì)特性的分離鑒定

2.2.1保留染料能力 CSC因?yàn)槠漭^慢的增殖速度以及不對(duì)稱細(xì)胞分裂方式被認(rèn)為是相對(duì)靜止的細(xì)胞。PKH26 和 PKH67是一類脂類染料，能均勻地標(biāo)記細(xì)胞膜，并在細(xì)胞分裂時(shí)對(duì)等的分離到兩個(gè)子代細(xì)胞內(nèi)。因此，染料隨著細(xì)胞的分裂成比例的被稀釋。分裂慢的細(xì)胞可有效保留染料，分裂快的細(xì)胞染料濃度迅速被稀釋。由于CSC不對(duì)稱分裂，靜止期的CSC可長期保留標(biāo)記，而其子代細(xì)胞隨著其快速分裂形成腫瘤，細(xì)胞中的標(biāo)記物被迅速稀釋，這一技術(shù)被稱為標(biāo)記滯留細(xì)胞技術(shù)，已被用來在骨肉瘤細(xì)胞系中分離PKH26陽性細(xì)胞[4]。基因表達(dá)顯示PKH26陽性細(xì)胞與其他能夠貼壁生長的細(xì)胞相比是一類幼稚的細(xì)胞。然而，PKH26陽性細(xì)胞群比CD133陽性細(xì)胞群的范圍大，這也進(jìn)一步說明不同的分離方法所獲得的CSC是不同的。

2.2.2外排染料能力及側(cè)群細(xì)胞 研究顯示CSC具有抗藥能力，它高表達(dá)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體如ABC抗藥外排轉(zhuǎn)運(yùn)體。基于CSC具有外排DNA標(biāo)記熒光染料Hoechst33342的能力，有學(xué)者應(yīng)用這一特性從已建立細(xì)胞系及人骨肉瘤活檢標(biāo)本[5]中分離鑒定骨肉瘤CSC。這部分能夠外排染料的細(xì)胞群被稱為側(cè)群(side population，SP)細(xì)胞，SP細(xì)胞可形成細(xì)胞球并可以高效快速的形成腫瘤。SP細(xì)胞也表現(xiàn)為不對(duì)稱分裂，可以產(chǎn)生SP子代細(xì)胞以及非SP子代細(xì)胞。

2.2.3醛脫氫酶活性 醛脫氫酶1可能成為正常及CSC的候選標(biāo)記物。醛脫氫酶1可以將非熒光物轉(zhuǎn)化為熒光物，因此可以通過分選熒光反應(yīng)陽性的細(xì)胞來篩選醛脫氫酶陽性細(xì)胞。醛脫氫酶1陽性的骨肉瘤細(xì)胞富集于肉瘤樣細(xì)胞球中，并有很強(qiáng)的呈瘤及侵襲能力[6]。

2.3 骨肉瘤干細(xì)胞功能特性

應(yīng)用CSC 2個(gè)方面的功能特性來鑒定骨肉瘤干細(xì)胞：1)在免疫抑制宿主動(dòng)物體內(nèi)可形成與原發(fā)瘤一樣的腫瘤；2)能分化產(chǎn)生構(gòu)成起源組織的各種細(xì)胞成分。這兩方面的特性常被用作分離技術(shù)的后續(xù)驗(yàn)證，而且它是建立純化的CSC系所必需的。有實(shí)驗(yàn)顯示腫瘤細(xì)胞形成肉瘤樣細(xì)胞球的能力與其形成移植瘤的能力有關(guān)[4]。

2.3.1無限稀釋分選法 是分離純化CSC的金標(biāo)準(zhǔn)。該項(xiàng)技術(shù)依賴于CSC即使在濃度很低時(shí)也能高效的形成腫瘤。其可靠性依賴于CSC數(shù)與呈瘤能力之間的線性關(guān)系、使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系、體內(nèi)腫瘤生長的重要調(diào)節(jié)閥即免疫反應(yīng)的缺乏狀態(tài)、物種特異性信號(hào)的存在等因素的影響，因此使用這種方法時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎?？紤]到腫瘤和其生長微環(huán)境的密切關(guān)系，成瘤率與接種部位也有關(guān)。目前認(rèn)為，直接將腫瘤細(xì)胞局部注射到骨組織而建立的移植瘤模型是公認(rèn)的鑒定CSC的模型。無限稀釋分選法可被用來在體外評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞形成群落的能力。盡管CSC具有優(yōu)先形成細(xì)胞群落能力的具體機(jī)制還不明確，但利用這種方法可以對(duì)無血清培養(yǎng)基中懸浮生長的細(xì)胞進(jìn)行自我更新能力的評(píng)價(jià)。體外形成群落法可被用來分離干細(xì)胞，國內(nèi)有學(xué)者[10]報(bào)道運(yùn)用簡化的無血清培養(yǎng)法成功從骨肉瘤細(xì)胞中分離出具有增殖和分化能力腫瘤細(xì)胞球,并在體外連續(xù)傳代。這種方法簡化了CSC的培養(yǎng)，有較高的應(yīng)用價(jià)值，但這種方法有2個(gè)方面的局限性：一方面不能從高濃度成群的細(xì)胞群中分離干細(xì)胞，另一方面不能分離靜止的干細(xì)胞。在實(shí)體瘤標(biāo)本的高濃度細(xì)胞群中培養(yǎng)建立干細(xì)胞群落是非常困難的，但聯(lián)合應(yīng)用無限稀釋法就可有效避免這一問題。有學(xué)者就聯(lián)合應(yīng)用體外形成群落法及無限稀釋法證實(shí)Sca-1表達(dá)陽性率與小鼠骨肉瘤干細(xì)胞形成群落的能力有關(guān)，還證實(shí)CSC表達(dá)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Sox2[11]。

2.3.2多向分化能力 與大部分腫瘤細(xì)胞不同，CSC可以通過對(duì)稱或不對(duì)稱的方式分裂，分化形成各種類型的細(xì)胞，稱為多向分化能力。同MSC一樣，骨肉瘤干細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下可以向骨母細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨方向分化。由于誘導(dǎo)骨肉瘤干細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)及各種類型細(xì)胞的鑒定相對(duì)簡單，我們就可以利用這種多向分化能力進(jìn)一步對(duì)CSC進(jìn)行鑒定。這種分選法常是在標(biāo)記物分離法之后用來對(duì)干細(xì)胞及非干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。因此，檢測多向分化能力及無限稀釋法的聯(lián)合應(yīng)用是非常有效的對(duì)CSC的鑒定方法。

3 腫瘤干細(xì)胞具有多潛能的原因

CSC是一種未分化的、干細(xì)胞樣的細(xì)胞群，它能呈球樣生長，表達(dá)多能干細(xì)胞相關(guān)的胚胎干細(xì)胞因子Oct4、Sox2 和 Nanog[11-12]。胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子在CSC中的表達(dá)最早是在p53和Rb基因缺失的小鼠骨肉瘤模型中發(fā)現(xiàn)的。陽性表達(dá)鼠MSC標(biāo)記物Sca-1的腫瘤細(xì)胞具有形成肉瘤樣細(xì)胞球的能力，并且表達(dá)胚胎干細(xì)胞因子Sox2。這些肉瘤樣細(xì)胞球高表達(dá)Sca-1及Sox2，而骨分化標(biāo)記物Runx2 及osterix表達(dá)量降低。Sox2基因敲除可使腫瘤細(xì)胞失去呈肉瘤樣細(xì)胞球的能力及呈瘤能力，同時(shí)Sox2基因敲除可使Sca-1表達(dá)降低及細(xì)胞周期抑制因子p21 及p27表達(dá)增多，繼而腫瘤細(xì)胞重新向骨方向分化。另外，在人骨肉瘤活檢組織、骨肉瘤細(xì)胞系中也檢測到Sox2的表達(dá)，并且這些細(xì)胞呈肉瘤樣細(xì)胞球的能力與Sox2的表達(dá)有關(guān)[11]。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)Sox2很可能是CSC保持其多潛能的非常重要的因素。

因此，我們推測小鼠及人的骨肉瘤組織中至少包含這樣2類細(xì)胞群，一類高表達(dá)Sox2，具有干細(xì)胞的特性，但缺乏向骨方向分化的能力；另一類低表達(dá)Sox2，能分化為成熟的骨組織并存在有Wnt通路的激活。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)Sox2可作為CSC的標(biāo)記物，并提示我們可以通過抑制Sox2的表達(dá)達(dá)到骨肉瘤靶向治療的目的。

4 骨肉瘤干細(xì)胞的起源

隨著干細(xì)胞生物學(xué)研究的日益深入和完善，有新的理論認(rèn)為遺傳或者后天的一些因素干擾了MSC成骨分化的過程，從而導(dǎo)致骨肉瘤的發(fā)生，即骨肉瘤起源于MSC。MSC是骨髓中非造血干細(xì)胞，具有分化為多種基質(zhì)細(xì)胞的潛能,能分化為骨、軟骨、肌肉、韌帶、跟腱、脂肪細(xì)胞和基質(zhì)等。體外培養(yǎng)鼠MSC可以發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化為骨肉瘤或者是纖維肉瘤細(xì)胞[13]。體外轉(zhuǎn)染了人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)的人MSC[14]也可以發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。另外，Ewing肉瘤可能也起源于MSC[15]。這些研究均提示MSC很可能是骨肉瘤的起源細(xì)胞。

在骨的形成過程中，不成熟的骨細(xì)胞向成熟的骨細(xì)胞分化要經(jīng)歷骨基質(zhì)的合成、沉積、骨化幾個(gè)階段。原始的骨原細(xì)胞由間充質(zhì)細(xì)胞分化而來，繼而分化為前成骨細(xì)胞、骨母細(xì)胞，最終成熟為骨細(xì)胞，這是一個(gè)非常復(fù)雜的過程。目前尚缺乏明確的各階段的分化標(biāo)記物。已知的骨分化過程中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子是RUNX2/CBFA1以及其下游的osterix。前成骨細(xì)胞表達(dá)RUNX2及osterix，而后向骨母細(xì)胞分化，細(xì)胞停止增殖，同時(shí)合成基質(zhì)蛋白主要是I型膠原并沉積下來。隨后分化為成熟的骨母細(xì)胞，表達(dá)osteocalcin (OCN)，最后基質(zhì)鈣化形成成熟的骨組織。雖然骨肉瘤腫瘤組織具有異質(zhì)性，其構(gòu)成成分混雜有一些分化成熟的骨樣基質(zhì)及骨組織，但骨肉瘤的發(fā)生卻被認(rèn)為是細(xì)胞的異常增生及分化障礙所致。2類抑癌基因Rb 及 p53，在骨的分化過程中具有重要的調(diào)控作用，在骨肉瘤中常存在表達(dá)缺失。Rb蛋白可以與RUNX2相互作用并可增加RUNX2的轉(zhuǎn)錄活性，因此，可促進(jìn)細(xì)胞向骨母細(xì)胞分化。在特異性Rb基因缺陷小鼠表現(xiàn)出骨發(fā)育障礙，在這類小鼠骨發(fā)育中有較多分化障礙的骨原細(xì)胞，不能順利通過細(xì)胞周期發(fā)育為成熟的骨細(xì)胞[16]。無獨(dú)有偶，在特異性p53基因缺陷小鼠中也表現(xiàn)出骨分化障礙，并有進(jìn)一步發(fā)展為骨肉瘤的傾向[17]。因此，Rb 及 p53的突變干擾了骨的分化過程，DNA損傷修復(fù)關(guān)鍵點(diǎn)出現(xiàn)功能障礙，這為骨肉瘤的發(fā)生進(jìn)一步積累突變奠定了基礎(chǔ)。因此，盡管骨肉瘤干細(xì)胞可能具有不對(duì)稱分裂的能力，能夠產(chǎn)生一定數(shù)量的分化成熟的細(xì)胞，但實(shí)際上骨肉瘤還是一種分化障礙性疾病。

骨髓微環(huán)境也是影響骨母細(xì)胞分化的一個(gè)重要因素。骨髓富含造血干細(xì)胞及MSC，而且這2類細(xì)胞可根據(jù)不同的表型和功能向不同的方向分化。MSC可以通過產(chǎn)生IL-6等細(xì)胞因子使骨肉瘤細(xì)胞長期處于一種未分化狀態(tài)[18]。從人骨肉瘤組織中分離出的MSC與正常骨髓中的MSC在遺傳學(xué)上有著明顯的區(qū)別，這也說明MSC所提供的微環(huán)境在維持骨肉瘤細(xì)胞的未分化狀態(tài)方面的重要性[19]。

盡管大多數(shù)研究認(rèn)為骨肉瘤起源于MSC，但卻很難準(zhǔn)確定位腫瘤起源細(xì)胞所處的發(fā)育階段。通過研究小鼠自發(fā)骨肉瘤模型發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤細(xì)胞系中Rb 和p53的突變可追溯到骨原細(xì)胞。在這個(gè)模型中osx-Cre轉(zhuǎn)基因(介導(dǎo)Rb及p53敲除的floxed等位基因)的表達(dá)需要osterix 啟動(dòng)子的激活，而osterix 啟動(dòng)子在骨原細(xì)胞才有表達(dá)[20]。這一發(fā)現(xiàn)提示骨肉瘤很可能起源于限制單向或者雙向潛能的前成骨細(xì)胞。但是，也不能排除轉(zhuǎn)基因被其它因素誘導(dǎo)表達(dá)，也可能會(huì)在骨發(fā)育過程中更早的階段就有所表達(dá)。換句話說，Rb 及 p53的缺失賦予了CSC去分化的能力，可使其向更原始的階段分化。因此有人提出骨肉瘤干細(xì)胞之所以具有多潛能性，一種可能是起源于去分化的骨原細(xì)胞，這類細(xì)胞可重新獲得MSC樣的特性，第二種可能就是直接起源于MSC。

5 結(jié)論與展望

如果說癌基因與抑癌基因的提出揭示了腫瘤基因?qū)W的本質(zhì)，那么CSC理論的提出可以說是腫瘤學(xué)上的一個(gè)新的里程碑，它激勵(lì)了不少學(xué)者在過去幾十年里在不停地探索腫瘤的起源。CSC理論同樣在高度惡性的骨肉瘤中也得到了證實(shí)，很多研究者已經(jīng)從人或鼠骨肉瘤細(xì)胞中分離出了這樣一類細(xì)胞亞群，它們表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記物，能夠形成腫瘤，在無血清培養(yǎng)基中能形成懸浮生長的細(xì)胞球。與成體干細(xì)胞不同的是，這種細(xì)胞可無限增殖，并且附帶有多種基因突變(最常影響的是p53及Rb基因通路)可使細(xì)胞具有持續(xù)的自我更新能力。

目前研究較多的是一些上皮組織起源CSC的特性，它們往往表現(xiàn)為慢周期性，處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)。而這一點(diǎn)在骨肉瘤干細(xì)胞卻有所不同，骨肉瘤干細(xì)胞的增殖速度比普通干細(xì)胞都快，這可能是MSC起源的CSC與上皮源性的CSC的不同之處。有一種假設(shè)能夠解釋這種現(xiàn)象，干細(xì)胞在漫長的生活周期內(nèi)，可以是活化的，也可以是靜止的，總體上維持一種相對(duì)平衡狀態(tài)。而靜止期干細(xì)胞的主要功能可能是取代那些“損傷”的細(xì)胞。在不同數(shù)量和性質(zhì)的致癌基因的作用下，最原始的干細(xì)胞可演變?yōu)橄鄬?duì)靜止的或者活化的一些CSC。而實(shí)際上，懸浮成球培養(yǎng)法很可能只能篩選出自我更新相對(duì)快一些的干細(xì)胞群，而篩選不出靜止期的細(xì)胞群。因此，這也是我們?cè)趹?yīng)用無血清懸浮培養(yǎng)法篩選CSC時(shí)應(yīng)考慮到的一個(gè)問題。

骨肉瘤干細(xì)胞研究中另外一個(gè)亟待解決的問題是CSC的分裂方式是否為單向不對(duì)稱性的，即一些低分化的祖細(xì)胞是否可去分化演變?yōu)镃SC。雖然目前研究并沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在自發(fā)性的去分化現(xiàn)象，但有研究顯示低水平轉(zhuǎn)錄因子就可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為原始的多能干細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)也提示我們CSC當(dāng)中也可能存在類似的現(xiàn)象。例如：成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)信號(hào)通路可以維持CSC生長微環(huán)境，與骨肉瘤干細(xì)胞的生長有一定關(guān)系，其機(jī)制可能就是通過誘導(dǎo)Sox2 表達(dá)使骨肉瘤祖細(xì)胞去分化。

骨肉瘤干細(xì)胞研究的另一個(gè)潛在的意義就是針對(duì)CSC的靶向治療。目前這方面的報(bào)道寥寥無幾。有學(xué)者提出CSC抑制劑鹽霉素(Salinomycin)是一個(gè)新的Wnt信號(hào)通路抑制劑，可以抑制CSC的生長[21]，另外，也有學(xué)者應(yīng)用修飾的T淋巴細(xì)胞免疫治療法清除CSC[22]。需要注意的是，目前所認(rèn)識(shí)的CSC的一些標(biāo)記物可能并不是維持CSC生存或再生所必需的，而只是它們分化程度的一種標(biāo)志。而在多種器官干細(xì)胞中均有表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子Sox2在骨肉瘤中存在過表達(dá)，而且是維持其生存和腫瘤形成所必需的，這就為研究CSC的其他關(guān)鍵因子及靶向治療提供了新的思路。只有更準(zhǔn)確地分離CSC，闡明其相關(guān)的分子生物學(xué)特性，才能使骨肉瘤的藥物靶向治療得以早日實(shí)現(xiàn)。

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