氣相色譜法測(cè)定豆粉中脂肪殘留量

毛全貴，賴 珅，邢繼紅

（河南天方藥業(yè)股份有限公司，河南 駐馬店 463000）

氣相色譜法測(cè)定豆粉中脂肪殘留量

毛全貴，賴 珅，邢繼紅

（河南天方藥業(yè)股份有限公司，河南 駐馬店 463000）

為建立快速準(zhǔn)確的方法測(cè)定豆粉中脂肪酸的殘留量，以氫氧化鉀甲醇溶液為酯化劑，采用氣相色譜法，測(cè)定豆粉中殘留脂肪酸組成。結(jié)果 5 種主要脂肪酸能在 15 min 內(nèi)基線分離，線性、精密度、重現(xiàn)性良好。此方法簡(jiǎn)單快捷，可用于豆粉中脂肪酸的殘留組成測(cè)定。

豆粉；脂肪酸；氣相色譜

豆粉是發(fā)酵培養(yǎng)基常用的氮源，主要分為冷軋和熱軋兩種，熱軋是采用的傳統(tǒng)的壓榨法軋油后剩下的，冷扎是溶劑提取，即浸出法提取后的渣子。由于浸出法在后道工序中為脫除溶劑，也采用了高溫蒸粕，因而兩者都經(jīng)過了熱處理。熱軋餅中的脂肪相對(duì)比冷軋餅中的高，因而在培養(yǎng)基配制時(shí)能夠起到一定的消泡作用或在如吉他霉素等抗生素的發(fā)酵中作為碳源、前體被利用。在生產(chǎn)工藝中，豆粉中的脂肪并不能完全去除，殘留的脂肪對(duì)一些發(fā)酵生產(chǎn)有正面或負(fù)面的影響，且脂肪中亞油酸的含量低于 48%時(shí)會(huì)影響抗生素的發(fā)酵。為此，在豆粉質(zhì)量檢測(cè)中對(duì)脂肪含量和亞油酸含量分別做了要求。

目前對(duì)豆粉中脂肪的含量測(cè)定主要是索氏抽提法，這個(gè)方法缺點(diǎn)主要是方法步驟繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，且只能檢測(cè)脂肪含量不能檢測(cè)到亞油酸、棕櫚酸等的含量；因此尋找新的檢測(cè)豆粉中脂肪含量的方法顯得尤為重要。為此建立的 GC法測(cè)定豆粉中殘留脂肪和亞油酸含量，結(jié)果 5種主要脂肪酸（油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞麻酸）能在 15min內(nèi)基線分離，線性、精密度、重現(xiàn)性良好。結(jié)論 此方法簡(jiǎn)單快捷，可用于豆粉中脂肪的殘留組成和油酸、亞油酸等成分含量的測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

島津 GC2010 氣相色譜儀，氫焰離子檢測(cè)器；Agilent DB-wax 色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25μm）；Varian CP-Sil 88 色譜柱（50 m×0.25 mm，0.20μm）。

1.2 對(duì)照品與試劑

棕櫚酸甲酯（批號(hào)：35571）、硬脂酸甲酯（批號(hào)：38362）、油酸甲酯（批號(hào)：37488）、亞油酸甲酯（批號(hào)：36364）、亞麻酸甲酯（批號(hào)：39451）都為 Aladdin 公司、氫氧化鉀（批號(hào)：111202，四川西隴化工有限公司）、乙醚（批號(hào)：080601，四川西隴化工有限公司）、石油醚（批號(hào)：130821，天津市大茂化學(xué)試劑廠）、甲醇（批號(hào)：130311，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）、正己烷（批號(hào)：20120912,天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）、豆粉（批號(hào)：20140101、20140102、20140103，河南天方科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

氣化溫度 250 ℃，檢測(cè)器溫度 260 ℃，柱溫 220℃，保持 15 min；載氣氮?dú)?，流?179 mL/min，分流比 60∶1；氫氣流速 40mL/min；空氣流速 400 mL/min。理論塔板數(shù)按亞油酸峰計(jì)算應(yīng)不低于 5 000，對(duì)照品各色譜峰之間的最小分離度應(yīng)不低于 1.5。

2.2 試劑制備

乙醚-石油醚混合液：取乙醚和石油醚按 1:1 混合均勻后備用。

1 mol氫氧化鉀甲醇溶液：取氫氧化鉀 56 g，精密稱定，溶解于 1 L 甲醇中，完全溶解后備用。

對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸甲酯對(duì)照品、硬脂酸甲酯對(duì)照品、油酸甲酯對(duì)照品、亞油酸甲酯對(duì)照品、亞麻酸甲酯對(duì)照品各 10 mg，置于 100 mL 容量瓶中，加正己烷溶解并稀釋到刻度，制成每 1 mL 中含上訴對(duì)照品各 0.1 mg 的溶液。

2.3 供試品制備

取豆粉 0.1 g，置 10 mL 具塞試管中，加 2 mL 乙醚-石油醚混合液，震蕩，加 1 mol/L 氫氧化鉀甲醇溶液 1 mL，震搖 30 s，加純化水接近管口，靜止 5 min取上清液用氣相色譜儀測(cè)定。

2.4 專屬性

取對(duì)照品溶液 1μL注入氣相色譜儀，各色譜峰分離度均大于 1.5，亞油酸理論塔板數(shù)為 32 034。如圖1。

圖 1 對(duì)照品譜圖Fig.1 The control product spectra

取供試品溶液 1μL注入氣相色譜儀，各對(duì)照品峰分離度符合要求（圖 2）。

2.5 線性

取對(duì)照品溶液稀釋至5個(gè)濃度，依次進(jìn)樣，以各對(duì)照品濃度為X軸，相對(duì)應(yīng)峰面積為Y軸進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表 1、表 2。

圖 2 供試品譜圖Fig.2The test product spectra

表 1 不同濃度脂肪酸峰面積Table 1 The peak area of the fatty acid with different concentration

2.6 精密度

取對(duì)照品溶液溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，按相應(yīng)面積計(jì)算各組分。各成分 RSD 均小于 2.0%，結(jié)果見表 3。

表 3 6 次進(jìn)樣 RSD 結(jié)果Table 3 Six times injection RSD results

2.7 檢測(cè)限

取對(duì)照品溶液，稀釋至合適濃度，記錄信噪比為 3∶1 時(shí)相應(yīng)的峰值。得各個(gè)組分的檢測(cè)限分別為棕櫚酸 1.3 ng、硬脂酸 1.2 ng、油酸 1.1 ng、亞油酸1.4 ng。

2.8 供試品鑒定結(jié)果

照 2.2 項(xiàng)下處理方法考察 3 批冷軋豆粉供試品（批號(hào)：20140101、20140102、20140103），按外標(biāo)法計(jì)算各脂肪酸組成含量相加與索氏抽提法結(jié)果比較，結(jié)果見表4。

表 4 不同色譜柱及方法測(cè)定 3 批供試品脂肪酸含量Table 4 Determining results of fatty acid content in three test samples by using different polarity of columns and test method%

3 結(jié) 論

豆粉殘留脂肪中的硬脂酸與油酸都為 18 個(gè)碳原子脂肪酸，在色譜中保留時(shí)間比較接近，不易分離。但本實(shí)驗(yàn)使用 DB-wax 色譜柱具有高極性，使五種脂肪酸在色譜中的保留時(shí)間比較短且分離效果達(dá)到要求。與索氏抽提法進(jìn)行比較，GC測(cè)定法能夠在測(cè)定脂肪量的同時(shí)測(cè)定各組分的含量。在抗生素生產(chǎn)中亞油酸的含量對(duì)發(fā)酵有一定的促進(jìn)作用，使用 GC法能同時(shí)判斷脂肪組分是否會(huì)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)生影響；在試劑使用上，GC 法使用試劑較少，安全性、準(zhǔn)確度較高；在檢測(cè)時(shí)間上 GC法比索氏抽提法速度提高了 10倍，極大的減少了測(cè)樣時(shí)間，更快捷地服務(wù)生產(chǎn)。

在與索氏抽提法做結(jié)果比較時(shí)，結(jié)果上存在差異。根據(jù)這種情況在實(shí)驗(yàn)操作中需要注意對(duì)照品與樣品是否完全溶解在試劑中，在震搖溶液時(shí)要達(dá)到要求這，樣能減少誤差，使結(jié)果準(zhǔn)確性更高。

在使用氣相測(cè)定時(shí)，因每次測(cè)定時(shí)氣相實(shí)際條件不能達(dá)到完全一致性，在每次測(cè)定時(shí)都要進(jìn)對(duì)照品進(jìn)行進(jìn)樣以便外標(biāo)測(cè)定各組分含量和定位。

［1］中國(guó)藥典,二部.2010:附錄 52-附錄 53[S]..

［2］ 馮慧，洪家敏.索氏抽提法測(cè)定大豆粉中脂肪含量方法改進(jìn)研究[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2008(8):50-51.

［3］ 李群,周淑萍,丁銳,等.氣相色譜法測(cè)定魚多烯乙酯的含量[J].中國(guó)生化藥物雜志,2002 ,23 (2) :72274.

［4］李丹華，朱圣陶.氣相色譜法測(cè)定常見植物油中脂肪酸[J].糧食與油脂，2006(8):46-

［5］侯向昶.花生油中摻偽棕櫚油、豆油、菜籽油定性、定量分析[J].質(zhì)量與市場(chǎng)，2004(8):6-

［6］王肇慈.糧油食品品質(zhì)分析[M].2 版.北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2000:156-178.

Determination of Fat Residues in Soybean Flour by Gas Chromatography

MAO Quan-gui, LAI Shen, XING Ji-Hong
(Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd., Henan Zhumadian 463000, China)

A fast accurate method for determining fatty acid residues in soybean flour was established by using gas chromatography with potassium hydroxide methanol solution as esterifying agent, and composition of residual fatty acid in the flour was determined. The results showed that a baseline separation of five kinds of main fatty acids was obtained within 15 min; linearity, precision and repeatability were good. This method is simple and quick, can be used in determination of residual composition of fatty acids in soybean flour.

Soybean flour; Fatty acid; Gas chromatography

O 657

： A文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： 1671-0460（2014）07-1400-03

2014-04-08

毛全貴（1969-），男，河南駐馬店人，高級(jí)工程師，碩士，2004 年畢業(yè)于華東理工大學(xué)，研究方向?yàn)榘l(fā)酵工程，從事抗生素生產(chǎn)及廢水處理相關(guān)工作。E-mail：maoquangui@topfond.com。

賴珅 （1980-），男，工程 師，碩士，研究方 向?yàn)樯镏扑帯-mail：8176989@qq.com。