不同植體和激素配比對(duì)五指毛桃愈傷組織誘導(dǎo)的影響

梁春輝，黃敏，黎土英，王星，張斌偉

（廣東農(nóng)工商職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東廣州 510507）

不同植體和激素配比對(duì)五指毛桃愈傷組織誘導(dǎo)的影響

梁春輝，黃敏，黎土英，王星，張斌偉

（廣東農(nóng)工商職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東廣州 510507）

[目的]利用五指毛桃不同外植體和激素配比對(duì)其愈傷組織形成進(jìn)行研究，建立起培養(yǎng)體系。[方法]以五指毛桃的葉片、葉柄和莖段為外植體，分別接種于1/2MS附加不同激素配比的培養(yǎng)基上，比較不同外植體及激素配比對(duì)五指毛桃愈傷組織誘導(dǎo)的影響。[結(jié)果]葉片最易誘導(dǎo)愈傷組織，葉片的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；其次是葉柄，葉柄的最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。莖段不適合作為五指毛桃組織培養(yǎng)的外植體。[結(jié)論]葉片為五指毛桃誘導(dǎo)愈傷組織的最佳外植體，適合進(jìn)一步繼代培養(yǎng)，這一結(jié)論可為今后建立繁育體系和規(guī)?；缣峁┪镔|(zhì)和技術(shù)參考。

五指毛桃；外植體；激素；愈傷組織

五指毛桃（Radix Fici Hirtae.）屬桑科（Moraceae）榕屬（Ficus），多為灌木，稀為小喬木，全株密被粗毛，自然生長于深山幽谷中，因其葉子形如五指，表面有細(xì)毛覆蓋，果實(shí)成熟時(shí)像毛桃而得名。五指毛桃為嶺南習(xí)用草藥，味辛、甘、性平，以根入藥，有健脾補(bǔ)肺、利濕舒筋之功，用于脾虛浮腫、食少無力、肺癆咳嗽、盜汗、風(fēng)濕痹痛、產(chǎn)后無乳等癥[1]，在廣東地區(qū)民間用來煲湯，稱之為“南芪”。其應(yīng)用歷史悠久，保健作用廣為認(rèn)可[2]。五指毛桃主要分布于廣東、廣西、云南等地[3]，以野生為主，極少人工栽培，近年來，由于大量采挖，野生資源十分匱乏。隨著藥用植物組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷發(fā)展，紫蘇、單參、黃芩、廣藿香等經(jīng)組織培養(yǎng)已獲得再生植株[4]。然而由于五指毛桃植株多漿、體表多硬毛，不易誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽，很難獲得組培苗[5]。目前關(guān)于五指毛桃組織培養(yǎng)研究方面的報(bào)道十分有限，且僅處于探索階段，對(duì)五指毛桃不同外植體，如葉片和葉柄愈傷組織誘導(dǎo)的研究未見報(bào)道。為了解決五指毛桃的藥用資源問題，該試驗(yàn)從外植體的取材部位、培養(yǎng)基組成等方面對(duì)五指毛桃離體快繁的條件進(jìn)行研究，旨在找出最適合進(jìn)行組織培養(yǎng)的材料及培養(yǎng)基配方，為優(yōu)質(zhì)中草藥專業(yè)化種植以及規(guī)?；庇峁┛茖W(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自廣東農(nóng)工商職業(yè)技術(shù)學(xué)院（增城校區(qū)）后山。

1.2 外植體滅菌

于2014年3月從生長健壯、無病蟲害的五指毛桃當(dāng)年生枝條上切取葉片、葉柄和莖段，先用流水沖洗，加入稀釋的洗潔精清洗，最后用毛刷把體表的硬毛刷去，置于超凈工作臺(tái)上。用75%的酒精浸泡60 s，無菌水沖洗3次，然后用0.1%HgCl2滅菌10 min，無菌水沖洗6次。用無菌濾紙吸干水分，在無菌條件下，把經(jīng)消毒滅菌的葉片切成0.5 cm×1.0 cm的小塊，莖段和葉柄均切成0.5 cm的小段，分別接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。葉片、葉柄、莖段每個(gè)處理均接種30瓶，每瓶3個(gè)材料。

1.3 培養(yǎng)條件

試驗(yàn)以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同的激素配比，各培養(yǎng)基均加蔗糖30 g/L和瓊脂粉6.8 g/L，pH 5.8，在121℃下高壓滅菌20 min，培養(yǎng)室溫度為（26±1）℃。

1.4 培養(yǎng)基

根據(jù)不同激素種類及濃度對(duì)五指毛桃愈傷組織誘導(dǎo)的影響設(shè)計(jì)4種培養(yǎng)基，各外植體均接種，培養(yǎng)基具體如下：處理①1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L；處理②1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L；處理③1/2MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；處理④1/2MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 葉片愈傷組織誘導(dǎo)

葉片接種在含NAA 0.5 mg/L和6-BA 0.5～1.5 mg/L的培養(yǎng)基上均無愈傷組織形成，也無芽的分化。當(dāng)NAA濃度提高到1.0 mg/L時(shí)均有愈傷組織產(chǎn)生，但愈傷組織的生長情況與6-BA與NAA濃度配比有關(guān)，當(dāng)NAA濃度為1.0 mg/L，6-BA濃度為3.0 mg/L，即二者比例為1∶3時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高為53.33%，且愈傷組織塊較大，顏色為綠色，且半透明，出現(xiàn)少量分化。而當(dāng)6-BA濃度為1.0mg/L時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)率為30%，愈傷組織偏黃，未見分化。綜合愈傷組織的質(zhì)地、顏色、誘導(dǎo)率等，6-BA濃度為3.0 mg/L，NAA濃度為1.0 mg/L時(shí)，愈傷組織塊最大，且產(chǎn)生的時(shí)間較早（接種21 d后接觸到培養(yǎng)基的外植體表面可見米粒狀愈傷組織，比6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L早4 d），誘導(dǎo)效果最理想。

表1 不同激素配比對(duì)五指毛桃葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.2 葉柄愈傷組織誘導(dǎo)

將葉柄接種在6-BA與NAA不同配比的培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)只有6-BA濃度為1.0 mg/L，NAA濃度為1.0 mg/L（二者比例為1）時(shí)誘導(dǎo)出愈傷組織，愈傷組織誘導(dǎo)率比葉片低，僅為28.33%，且愈傷組織誘導(dǎo)的時(shí)間較長，接種35 d后葉柄愈傷組織化，切口部位慢慢出現(xiàn)淡黃色愈傷組織，42 d后愈傷組織大量生長，但仍沒有出現(xiàn)分化現(xiàn)象。而其他配比均無愈傷組織的產(chǎn)生。從愈傷組織誘導(dǎo)率、質(zhì)地等指標(biāo)結(jié)合來看，6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L是葉柄愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

表2 不同激素配比對(duì)五指毛桃葉柄愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.3 莖段愈傷組織誘導(dǎo)

將五指毛桃莖段接種在含6-BA 0.5～3.0 mg/L，NAA0.5～1.0 mg/L的培養(yǎng)基上，均無愈傷組織的形成，也沒有芽的分化，而且莖段接種一周后就開始出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，且黃化較嚴(yán)重。

表3 不同激素配比對(duì)五指毛桃莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響

3 結(jié)論與討論

在植物組織培養(yǎng)過程中，細(xì)胞分裂素與生長素的比例決定著外植體的發(fā)育方向，影響愈傷組織的誘導(dǎo)[6]。前人對(duì)苜蓿[7]、薺菜[8]、月見草[9]等植物的研究表明，植物激素6-BA和NAA影響愈傷組織的形成。該試驗(yàn)結(jié)果表明，五指毛桃愈傷組織的誘導(dǎo)與細(xì)胞分裂素6-BA和生長素NAA的配比有密切關(guān)系，適當(dāng)?shù)呐浔饶茱@著提高愈傷組織誘導(dǎo)率。在1/2MS培養(yǎng)基上添加不同配比的6-BA和NAA，以葉片為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，NAA濃度為1.0 mg/L，6-BA濃度為3.0 mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率為53.33%。但以葉柄為外植體時(shí)卻有所不同，當(dāng)6-BA與NAA比值為1（二者濃度均為1.0 mg/L）時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，為28.33%，低于葉片的誘導(dǎo)率。然而6-BA和NAA的添加對(duì)五指毛桃莖段誘導(dǎo)愈傷組織沒有影響，這可能與五指毛桃的莖中空有關(guān)[10]。蔣林曾報(bào)道在含有BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L的1/2 MS培養(yǎng)基上莖節(jié)（帶頂芽或腋芽）誘導(dǎo)率較高[5]，但在該試驗(yàn)中，莖段在此培養(yǎng)基上并沒有誘導(dǎo)出愈傷組織，可能與采樣的部位有關(guān)，該試驗(yàn)接種的莖段不帶有頂芽，另外與采樣時(shí)間、滅菌條件和培養(yǎng)環(huán)境有關(guān)，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。通過不同外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)比較分析，發(fā)現(xiàn)葉片、葉柄和莖段等外植體接種在同一培養(yǎng)基上，其誘導(dǎo)時(shí)間、誘導(dǎo)率和愈傷組織生長情況等方面存在顯著差異，總體而言，誘導(dǎo)的難易程度為：葉片優(yōu)于葉柄，而莖段不適合作為外植體。今后研究中可優(yōu)先考慮葉片作為五指毛桃組織培養(yǎng)的外植體。該結(jié)果為進(jìn)一步摸索五指毛桃再生體系的建立和快速繁殖技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。

經(jīng)過長期試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，黃化現(xiàn)象是影響五指毛桃離體培養(yǎng)質(zhì)量主要因素之一，而這一現(xiàn)象與激素的種類和配比有關(guān)，可以考慮采用其他植物激素著手研究激素種類對(duì)五指毛桃組織培養(yǎng)過程中黃化現(xiàn)象的影響來解決這一問題。

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（責(zé)任編輯 戚佳妮）

表4 參試品種產(chǎn)量比較

（2）品種Hg-6在試驗(yàn)中整體性狀表現(xiàn)較好，株型直立，株高53.0 cm，正常片葉數(shù)12片，抗白粉病，肉質(zhì)根表皮光滑，心部紅色，髓心條紋明顯，圓柱根形，根長22 cm，根頭部直徑4.2 cm，根尾部直徑2.7 cm，單根重222 g，折合商品產(chǎn)量為52 566.0 kg/hm2，商品產(chǎn)量比對(duì)照助農(nóng)大恨品種增產(chǎn)率為2.5%。建議推薦繼續(xù)參加下一年度品比試驗(yàn)，進(jìn)一步觀察比較。

（3）其他品種的植物學(xué)性狀雖表現(xiàn)不錯(cuò)，但商品產(chǎn)量均比對(duì)照減產(chǎn)，建議下年挑選其中較優(yōu)的1～2個(gè)品種繼續(xù)進(jìn)行比較試驗(yàn)，進(jìn)一步觀察篩選。

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（責(zé)任編輯 張楊林）

Effect of Different Explants and Phytohormone Combinations on Callus Induction of Radix Fici Hirtae.

Liang Chun-hui et al.(Guangdong Agriculture Industry Business Polytechnic College,Guangzhou 510507, China)

[Objective]The aim was to find the tissue culture system of different explants and phytohormone combinations on callus induction of Radix Fici Hirtae.[Method]Leaf,petiole and stem were inoculated on 1/2 MS medium with different phytohormone combinations to study the effect of different explants and phytohormone combinations on callus induction of Radix Fici Hirtae.[Result]Results show that leaf was the best explants for callus induction,while on 1/2 MS medium with phytohormones of 3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA.Petiole,second to leaf,proper circumstance is 1/2 MS medium with phytohormones of 1.0 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA.Stem is not a suitable explant for tissue culture of Radix Fici Hirtae.[Conclusion]It was proved by comparing examination,that leaf was the best chioce for callus induction,and further subculture,this conclusion can provide material and technical references for future establishment of breeding system and scale seedling.

Radix Fici Hirtae.;Explants;Phytohormone;Callus

S662.1

A

2095-0896（2014）10-003-03

梁春輝（1985-），女，山東濟(jì)寧，碩士，主要從事植物組織培養(yǎng)教學(xué)與研究工作。

2014-09-15