GC-MS分析驢皮、 牛皮、 馬皮的脂肪成分

胡晶紅, 李 佳, 張永清

（山東中醫(yī)藥大學(xué), 山東 濟(jì)南 250355）

GC-MS分析驢皮、 牛皮、 馬皮的脂肪成分

胡晶紅, 李 佳, 張永清*

（山東中醫(yī)藥大學(xué), 山東 濟(jì)南 250355）

目的 比較驢皮、牛皮、馬皮脂肪酸成分差異，為驢皮、牛皮、馬皮的鑒別和驢皮的質(zhì)量控制提供參考。方法采用石油醚回流提取脂肪酸， 氫氧化鉀-甲醇酯化法將提取的脂肪酸甲酯化， GC-MS 分析脂肪酸成分。 結(jié)果 3 種樣品中均含有飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、芳香羧酸、其他成分等，但是各類組分的具體成分和含有量存在差異。結(jié)論驢皮中主要以飽和脂肪酸為主， 主要由棕櫚酸、 （E） -9-十八碳烯酸、 硬脂酸和 8-十八碳烯酸構(gòu)成; 馬皮和牛皮主要是由飽和及不飽和脂肪酸構(gòu)成， 最大量不飽和脂肪酸均為 （E） -9-十八碳烯酸， 其余的大量成分馬皮主要含 （ Z） -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六酸， 而牛皮中主要含 9-十六碳烯酸、 對苯二甲酸和棕櫚酸， 可作為區(qū)分驢皮與馬皮和牛皮的參考依據(jù)。

驢皮; 脂肪酸;GC-MS

阿膠屬于傳統(tǒng)中藥， 為馬科動物驢 Equus asinus的皮經(jīng)煎煮、 濃縮制成的固體膠［1］， 其味甘， 性平， 歸肺、 肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)血滋陰、潤燥、止血等功效，為滋補(bǔ)上品，在 《神農(nóng)本草經(jīng)》、 《本草綱目》 等歷代醫(yī)籍中均有記載?，F(xiàn)代藥理研究表明，阿膠因具有升高紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白的 作用而促進(jìn)造血功能［2-6］; 另 外 具 有 止 血、 抗疲勞、抗休克、滋陰補(bǔ)腎、強(qiáng)筋健骨、利尿消腫及抗腫瘤和增強(qiáng)免疫力等功效［7-11］。

驢皮是加工生產(chǎn)阿膠的基本原料，驢皮的產(chǎn)量與質(zhì)量直接決定著阿膠的產(chǎn)量與質(zhì)量，而在阿膠企業(yè)的生產(chǎn)過程中，存在的普遍問題是驢皮沒有詳細(xì)、完整的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此本課題組致力于驢皮質(zhì)量控制的系列研究，為保證中藥阿膠的質(zhì)量提供原料的保障。在驢皮的質(zhì)量控制中一個重要的問題是如何區(qū)分混偽品，如馬皮、牛皮，甚至是一些混雜皮張。脂肪酸是動物組織的基本組成部分，本實驗主要對驢皮、馬皮及牛皮中的脂肪酸類進(jìn)行分析比較，既可為驢皮、馬皮及牛皮的鑒別提供參考，也可作為評價驢皮藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，從而保證阿膠原料的來源純正。目前還未見有關(guān)驢皮脂肪酸鑒別的相關(guān)報道。

1 材料和儀器

1.1 實驗材料 驢、 馬、 牛皮由山東東阿阿膠有限公司提供，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定，確認(rèn)為馬科動物驢 Equusasinus、 馬 Equus caballus和 牛 科 動 物 牛 Bos taurus的干燥皮。其中驢皮來自德州無棣烏驢養(yǎng)殖基地，系德州烏驢品種。

1.2 主要儀器 Agilent 7890A/5973N GC-MS 聯(lián)用儀 （ 美國 Agilent公 司） ; 色譜柱 Agilent 19091N-213 HP-INNOWax Polyethylene Glyco， 30 m×320 μm×0.5 μm （ 美 國 Agilent公司）;SF-130 型高 速中藥 粉碎機(jī) （ 中 南制藥機(jī)械 廠）; DGG-9000 恒溫干 燥 箱 （ 合肥 賽 帆 試驗設(shè)備有限公司）; NH-4 數(shù)顯 4 孔恒溫水浴 （ 成都貝斯達(dá)公司）;FA-1004 電子天平 （上海精科公司）。

1.3 主要試劑 石油醚， 氫氧化鉀， 甲醇， 苯等有機(jī)溶劑均為國產(chǎn)分析純。

2 實驗方法

2.1 樣品處理 為保證試驗的可對照性， 分別取驢、 馬、牛皮的皮張背部正中相同部位 20 cm×20 cm大小， 剪除并刮凈表面的毛發(fā)，用去離子水將表皮的污垢清洗干凈，于40℃恒溫干燥箱中烘干至恒定質(zhì)量。 剪碎皮張， 用粉碎機(jī)高速粉碎 5 min， 過 100 目篩。

2.2 脂肪酸提取 精密稱取 “2.1” 項的皮張細(xì)粉 1 g左右， 石油醚 （60 ～90 ℃） 30 mL 60 ℃回流提取 2 h， 提取液揮干溶劑，備用。驢皮、牛皮和馬皮的脂肪的提取率分別為 11.23%、 12.15%和 11.56%。

2.3 脂肪酸甲酯化 參照文獻(xiàn)中報道的脂肪酸甲酯化的方法［12］， 采用氫氧化鉀-甲醇室溫酯化法。

稱取 “2.2” 項中提取的脂肪 50 mg， 置于 10 mL量瓶內(nèi)， 加入2 mL石油醚和苯的混合溶劑 （1 ∶1）， 輕輕搖動使之溶解。 再加入 2 mL 0.4 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液， 混勻。 在室溫靜置 30 min， 加蒸餾水使全部有機(jī)相甲酯溶液升至瓶頸上部。澄清后吸取上清液，所得上清液用于氣相色譜分析。

2.4 GC-MS 分析

2.4.1 色譜條件 進(jìn)樣口溫度， 程序升溫， 100 ℃保持 3 min， 10 ℃ /m in 升到 240 ℃， 保持 20 min; 載氣 He氣體積流量 1.0 mL/min; 手動進(jìn)樣;10 μL注射器進(jìn)樣量 0.2 μL，分流比 5 ∶1， 分流體積流量 10 mL/min。

2.4.2 質(zhì)譜條件 電子轟擊 （EI） 離子源; 電子能量70 eV; 傳輸線溫度 230 ℃; 離子源溫度 170 ℃; 離子阱溫度 150 ℃， 質(zhì)量掃描范圍 m/z30 ～800。

2.5 數(shù)據(jù)處理 對總離子流圖中各峰經(jīng)過質(zhì)譜掃描后， 通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)系統(tǒng) （ NIST和 Willey標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)庫） 進(jìn)行檢索，并結(jié)合人工解析，鑒定出驢皮、馬皮和牛皮脂肪成分，采用積分面積歸一化的方法確定各組分的相對百分含有量，匹配度在 70 （滿分是 100） 以上的組分才予以報道。

3 結(jié)果與分析

3.1 脂肪酸種類及其含有量 提取驢皮、 牛皮和馬皮脂肪成分， 經(jīng)過 GC-MS 分析， 獲得各種脂肪酸種類及其含有量， GC-MS 離子流圖分別見圖 1 ～3， 含有量結(jié)果見表1～3。

圖 1 德州無棣烏驢基地烏驢皮樣品脂肪的 GC-M S離子流圖

圖 2 牛皮樣品脂肪的 GC-MS離子流圖

圖 3 馬皮樣品脂肪的 GC-MS離子流圖

表 1 ～3 結(jié)果顯示， 從驢、 牛、 馬皮中各獲得 27、 36和 37 種成分， 驢皮中共獲得 23 種脂肪酸類成分， 占全部檢出組分的 85.19%， 其中飽和脂肪酸 17 種， 不飽和脂肪酸2種， 芳香羧酸4種; 在牛皮中共獲得22種脂肪酸， 占全部檢出組分的 63.89%， 其中飽和脂肪酸 12 種， 不飽和脂肪酸6 種， 5 種芳香羧酸; 從馬皮中共獲得29種脂肪酸，占全部檢出組分的 78.38%， 其中飽和脂肪酸 18 種， 不飽和脂肪酸7種，4種芳香羧酸。另外驢、牛、馬皮張中還分別含有 4、 13、 8 種其它成分， 分別占檢出組分總數(shù)的14.81%、 36.11%和 21.62%， 這些組分主要是烷烴、 烯烴、酚、醛、酮及一些芳香類化合物。

表 1 驢皮脂肪 GC-MS成分分析

表 2 牛皮脂肪 GC-MS成分分析

續(xù)表2

表 3 馬皮脂肪 GC-MS成分分析

續(xù)表3

3.2 不同動物皮脂肪酸類成分的類別分布 驢、 牛、 馬皮中的成分在總脂肪酸中的種類百分?jǐn)?shù)及含有量質(zhì)量分?jǐn)?shù)見表4。

表4 驢、 馬、 牛皮中的各類脂肪成分?jǐn)?shù)目和含有量

3.3 不同動物皮脂肪中的主要成分與特有成分分析 驢、馬、 牛皮脂肪中占所有檢出組分百分含有量超過2%的成分按照含有量高低順序排列如下:①驢皮，棕櫚酸25.00%;8-十八碳烯酸 16.65%; 硬脂酸 12.64%; （E） -9-十八碳烯酸 7.64%; （Z） -9-十六碳烯酸 6.48%; 二十四酸 4.53%;18-十九碳烯酸 3.11%; 二十二酸 2.99%; 十四 酸 2.39%;9-cis-11-trans-十 八 酸 2.04%。 ② 馬 皮，（E） -9-十八碳烯酸 38.89%; 十六烷酸 22.09%; 硬脂酸9.34%; （ Z） -9-十 六 碳 烯 酸 7.61%; 十四酸 6.05%。③牛皮， （ E） -9-十八碳烯酸 28.88%; 棕櫚酸 23.85%;對苯 二 甲 酸 11.34%;9-十 六 碳 烯 酸 8.16%; 硬 脂 酸3.96%; 十四酸 3.62%。 驢皮脂肪主要以飽和脂肪酸為主，主要由棕櫚酸、 （E） -9-十八酸、 硬脂酸和 8-十八酸構(gòu)成;馬皮和牛皮最大量不飽和脂肪酸均為 （E） -9-十八碳烯酸，其余大量成分馬皮主要含 （Z） -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六烷酸， 而牛皮主要含 9-十六碳烯酸、 對苯二甲酸和棕櫚酸，依此可將驢皮與馬皮、牛皮區(qū)分開。

［ 1 ］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010 年版一部［S］.北京: 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010:175-176.

［2］ 鄭筱祥， 楊 勇，葉劍鋒， 等.東阿阿膠的升白作用及機(jī)制研究 ［ J］.中國現(xiàn) 代應(yīng) 用藥學(xué)雜志， 2005， 22 （2）: 102-105.

［3］ 魏 東， 王 瑛，張 濤， 等.大劑量阿膠治療晚期腫瘤化療后血小板減少癥的臨床研究［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2002， 25（1）:23-24.

［4］ 蘇曉妹， 魏 東，張 濤， 等.阿膠對血虛證動物模型的作用［ J］ .中國藥師， 2006， 9（7） :597-599.

［ 5 ］ 趙鐵英， 陶貴源.張仲景運(yùn)用阿膠治療血證淺析［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志， 2010， 16（12）:1146-1147.

［6］ 吳宏忠， 楊 帆，崔書亞， 等.阿膠酶解成分對貧血小鼠造血系統(tǒng)的保護(hù)機(jī)制［J］.華東理工大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版， 2008， 34（1）:47-52.

［7］ 吳長虹， 王若光.阿膠的止血功效與硫酸皮膚素的關(guān)聯(lián)性分析［ J］ .湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報， 2010， 30（10） :9-11.

［ 8 ］ Wang D， Liu M， Cao J， et al.Effect of Colla Corii asini（ E' jiao） on D-galactose induced agingmice［ J］ .Biol Pharm Bull，2012， 35（12）:2128-2132.

［ 9 ］ Wu H， Yang F， Cui S， et al.Hematopoietic effect of fractions from the enzyme-digested Colla Corii asini on mice with 5-fluorouracil induced anemia［J］ .Am JChin Med， 2007， 35（5 ）: 853-866.

［10］ 栗 敏， 馬洪宇， 沈繼朵， 等.復(fù)方阿膠漿對 H22 肝癌荷瘤小鼠 5-FU化療的增效減毒作用［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志， 2012， 18（20） :216-219.

［11］ 李 志， 陳壁鋒， 黃俊明， 等.阿膠口服液對小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫功能的影響［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2008， 18（7）:1426-1427+1437.

［12］ 寇秀穎， 于國萍.脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究［J］.食品研究與開發(fā)， 2005， 26（2）:46-47.

R284.1

:B

1001-1528（2014）12-2648-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.050

2013-12-23

山東省科技發(fā)展計劃項目 （2008GG2NS02022）

胡晶紅 （1974—）， 女， 講師， 博士， 從事中藥資源及其質(zhì)量控制研究。 E-mail:hujinghong97@126.com

*通信作者: 張永清 （1962 —） ， 男， 教授， 博士生導(dǎo)師， 從事中藥資源及其質(zhì)量控制研究。 E-mail:zyq622003@126.com