穿心蓮總內(nèi)酯骨架緩釋片的制備及釋放度測定

李小芳， 舒 予， 劉 玲， 文怡靜， 吳 珊， 尹幫龍

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)， 四川 成都 611137； 2.中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 四川 成都 611137； 3.中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地， 四川 成都 611137）

穿心蓮總內(nèi)酯骨架緩釋片的制備及釋放度測定

李小芳1，2，3， 舒 予1，2，3， 劉 玲1，2，3， 文怡靜1，2，3， 吳 珊1，2，3， 尹幫龍1，2，3

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)， 四川 成都 611137； 2.中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 四川 成都 611137； 3.中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地， 四川 成都 611137）

目的 制備穿心蓮總內(nèi)酯緩釋片， 并考察其體外釋放度及機(jī)制。 方法 采用親水性高分子材料 HPMC為骨架材料，制備穿心蓮總內(nèi)酯緩釋片，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以藥物體外釋藥百分率為指標(biāo)優(yōu)選制劑處方。結(jié)果 最終優(yōu)化處方為20%HPMC K15M作為骨架材料， 乳糖和淀粉比例為3 ∶1， 3%PVP作為致孔劑。 結(jié)論 所制備緩釋片的工藝簡單合理，藥物體外釋放符合零級模型，制得的緩釋骨架片具有較理想的緩釋作用。

穿心蓮總內(nèi)酯；緩釋片；釋放度

穿心蓮 Andrographis paniculata （ Burm.f.） Ness為爵床 科穿心蓮屬植物穿心蓮的干燥地上部 分， 又名一見喜、 斬蛇劍、印度草等。其主要有效成分為黃酮類和穿心蓮內(nèi)酯（ andrographolide） 、 新 穿 心 蓮 內(nèi) 酯 （ neoandrographolide）、脫水穿心蓮內(nèi)酯 （ dehydroan drographolid） 、 14-去氧穿心蓮內(nèi)酯 （DA） 和 14-脫氧-11，12-二去氫穿心蓮內(nèi)酯 （DDA）等， 內(nèi)酯類統(tǒng)稱穿心蓮總內(nèi)酯［1］。 近年來研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮總內(nèi)酯在治療心腦血管疾病方面具有顯著作用［2-3］， 選擇優(yōu)良、高效的劑型也變得尤為重要。為減少心血管疾病患者服藥次數(shù)，增強(qiáng)患者的順應(yīng)性，降低血藥濃度波動，提高血藥濃度的谷峰比值 （T/P）， 提高用藥有效性和安全性，緩釋制劑成為較好的選擇［4］。 而且主要有效成分穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯在小腸中均有較好的吸收，且在不同腸段中的吸收存在的差異性，吸收窗較長，也適于制成緩釋給藥系統(tǒng)［5］。 因此本實(shí)驗(yàn)擬將穿心蓮總內(nèi)酯制成 HPMC親水凝膠緩釋片。

1 材料與儀器

DP-I型單沖壓片機(jī) （上海中藥機(jī)械廠）； ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀 （天大天發(fā)科技有限公司）； UV1100 紫外分光光度儀 （上海天美科技儀器有限公司）； 穿心蓮總內(nèi)酯（含 有 量 90%， 西 安 小 草 植 物 科 技 有 限 公 司， 批 號xc110215）； 穿心蓮內(nèi)酯對照品 （中國藥品生物制品檢定所， 批號 110797-200307）； 羥丙基甲基纖維素 （ 上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司）； 可溶性淀粉 （AR） （成都市科龍化工試劑廠， 批號 20101117）； 乳糖 （AR） （成都市科龍化工試劑廠）； 聚乙烯吡咯烷酮 k30 （AR） （成都市科龍化工試劑廠），其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 分析方法［6-7］

2.1.1 對照品溶液的配制 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品10.2 mg至 50 mL量瓶中， 用 60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻， 配制成質(zhì)量濃度為 0.204 mg/m L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2 供試品溶液的配制 精密稱取穿心蓮總內(nèi)酯供試品適量至 50 mL量瓶中， 用 60%乙醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，配制成供試品溶液。

2.1.3 輔料溶液的配制 按處方配比， 稱取各種輔料適量， 用 60%乙醇溶液配制成不含穿心蓮內(nèi)酯的空白輔料溶液。

2.1.4 測定波長的選擇 精密移取穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液、 供試品溶液各 2.0 mL至 10 mL量瓶中， 分別加入 2 m L 60%乙醇溶液溶解， 分別依次加入 2%3， 5-二硝基苯甲酸甲醇溶液和 2%KOH溶液各1 mL作為顯色劑， 搖勻后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度。 分別置紫外分光光度計(jì)中在 400 ～800 nm間進(jìn)行掃描， 掃描結(jié)果對照品液、供試品液吸收光譜基本相似， 且都在 549 nm處有最大吸收峰， 因此選擇 549 nm的波長處測定穿心蓮總內(nèi)酯的吸收度。

2.1.5 空白輔料溶液吸光度的測定 精密移取 2.0 mL空白輔料溶液于 10 mL量瓶中， 加入 2 mL 60%乙醇溶液溶解， 依次加入顯色劑， 搖勻后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度。 于 400 ～800 nm掃描， 結(jié)果顯示在 549 nm處無吸收。

2.1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密移取穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0 mL于 10 mL量瓶中，分別依次加入顯色劑， 搖勻后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度， 分別于 549 nm處測定吸光度。 以取樣標(biāo)準(zhǔn)品溶液質(zhì)量濃度 （C） 對吸光度 （A） 進(jìn)行線性回歸， 得回歸方程A=4.871C+0.017 3 （r=0.999 2）， 結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯在0.010 2 ～0.102 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.1.7 精密度考察 精密移取穿心蓮標(biāo)準(zhǔn)溶液 2.0 mL于10 mL量瓶中。 余下操作同測定波長的選擇一致， 于 549 nm處 連 續(xù) 6 次 測 定 吸 收 值， 平 均 為 0.173， RSD 為0.68%， 表明該儀器精密度良好。

2.1.8 回收率試驗(yàn) 分別取線性范圍內(nèi)高、 中、 低 3 種質(zhì)量濃度的穿心蓮總內(nèi)酯溶液按處方比例加入輔料進(jìn)行回收率的測定，每一質(zhì)量濃度各做3個樣品。計(jì)算回收率值為98.04%， RSD為 1.03%， 結(jié)果詳見表 1。

表 1 穿心蓮總內(nèi)酯回收率結(jié)果 （n=3）

2.2 穿心蓮骨架緩釋片的制備 將穿心蓮內(nèi)酯和輔料分別過80目篩。 按處方稱取各組分， 將穿心蓮內(nèi)酯與輔料按等量遞加法混合均勻， 加適量的黏合劑制軟材， 制顆粒， 60℃干燥 1 h， 2 號篩整粒， 加入顆粒質(zhì)量的 1%的潤滑劑硬脂酸鎂， 壓片壓力控制在 7 ～9 kg/cm即得。 本品每片約含穿心蓮內(nèi)酯主藥 80mg， 片重約為 300 mg。

2.3 釋放度測定方法 取本穿心蓮總內(nèi)酯骨架緩釋片， 按《中國藥典》 2010 年版［8］二部釋放度測定法， 附錄第一法（轉(zhuǎn)籃法） 操作， 釋放介質(zhì)為 1.0%十二烷基硫酸鈉溶液（SDS） 800mL， 轉(zhuǎn)速為 100 r/min， 溫度為 （37 ±0.5）℃，分別于 2、 4、 6、 8、 10 h 取樣 5 m L， 30 s內(nèi)經(jīng) 0.45 μm微孔濾膜過濾，同時補(bǔ)充等體積同溫介質(zhì)，定量移取續(xù)濾液4 mL于 10 mL具塞試管中， 揮干溶劑， 加入60%乙醇適量溶解， 照分光光度法于 549 nm波長處測定吸光度， 代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度，計(jì)算累積釋放百分率。

2.4 緩釋片處方優(yōu)化

2.4.1 正交設(shè)計(jì) 在單因素考察的基礎(chǔ)上確定了進(jìn)行正交試驗(yàn)的輔料種類與用量范圍，選擇影響藥物釋放的因素，4個因素分別為： A、 HPMC規(guī)格； B、 HPMC用量； C、 乳糖與淀粉比例； D、 致孔劑 PVP用量。 擬將本品制成 12 h釋放的骨架片。 根據(jù) 《中國藥典》 2010 年版有關(guān)規(guī)定確定以下處方釋放標(biāo)準(zhǔn)： ①藥物釋放初期 （1 ～2 h） 累積釋放度20% ～30%， 用于考察藥物是否有突釋。 ②藥物釋放中期（4 ～6 h） 時累計(jì)釋放度 40% ～70%， 用于確定釋藥特性。③藥物釋放后期 （8 ～12 h） 時累計(jì)釋放度 80% ～100%，用于考察釋藥是否基本完全。 參考文獻(xiàn)［9-10］， 設(shè)計(jì)綜合評分 Y值為篩選指標(biāo)， 即 （Q10- ［ （ Q2-30）2+ （ Q6-50）2］1/2）。 ［ （ Q2-30）2+ （ Q6-50）2］1/2反映了 2、 6 h 釋放度的偏差， 此偏差越小越佳； 10 h 時應(yīng)釋放 80%以上，Q10應(yīng)越大越佳， 故以綜合評分 Y值與釋放度指標(biāo)共同描述其體外釋放情況。對4個因素進(jìn)行考察，每因素分設(shè)3水平， 按 L9（34） 正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案， 測定各處方的體外釋放度， 并對結(jié)果進(jìn)行分析， 結(jié)果見表2～4。

表2 因素水平

表3 正交試驗(yàn)分析及結(jié)果

表4 方差分析

2.4.2 方差分析與結(jié)論 由直觀方差分析結(jié)果可見， D因素極差比其他因素極差小得多，故可以D項(xiàng)為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析。結(jié)果表明，B因素差異有極顯著性，A和 C因素差異無顯著性。 根據(jù)極差分 A3＞A2＞A1， C1＞C2＞C3，而綜合考察指標(biāo)Y值越大，藥物緩釋越接近理想，因此選取三因素 Y值最大的水平， D因素則選取 PVP用量最少的水平， 穿心蓮總內(nèi)酯緩釋片的最佳處方， 即藥物與20% HPMC K15M混合， 乳糖和淀粉 3 ∶1 加至足量， 過 80 目篩， 用85%乙醇溶液為黏合劑制軟材， 濕法制粒， 加1%硬脂酸鎂壓片，即得。

2.4.3 優(yōu)選處方的驗(yàn)證 按篩選出來的最佳制劑處方制得3批樣品，在各時間點(diǎn)的體外釋放度，進(jìn)行工藝重復(fù)性考察， 結(jié)果如表5。

表5 3批樣品的體外釋放度測定結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明：3批骨架緩釋片中藥物的釋放度均較理想， 12 h 的釋放量均達(dá)90%以上， 且重復(fù)性好， 工藝設(shè)計(jì)合理，可行。

2.5 穿心蓮總內(nèi)酯緩釋片釋藥模型的擬合 將穿心蓮總內(nèi)酯的釋放數(shù)據(jù)， 分別以下列方程擬合。 零級方程 Q=kt+ b； 一級方程 ln （100-Q） =kt+b； Higuchi方程 Q=k t1/2；Peppas方程 Q=ktn。 其中 Q為累計(jì)釋放分率， t為時間，結(jié)果見表6。

表6 穿心蓮總內(nèi)酯釋藥機(jī)制的模型

2.6 釋放機(jī)理考察 藥物從親水凝膠骨架片中心釋放一般通過兩種機(jī)制： 藥物擴(kuò)散和凝膠骨架溶蝕［11］。 對于圓柱型制劑 （如片劑） 而言， 當(dāng) 0.45 ＜n ＜0.89 時， 表現(xiàn)釋放規(guī)律是擴(kuò)散和骨架溶蝕綜合作用的結(jié)果，為不規(guī)則轉(zhuǎn)運(yùn)；當(dāng)n ＜0.45 時， 為 Fick 擴(kuò)散； 當(dāng) n ＞0.89 時 為 溶 蝕 機(jī) 制［12］。用 peppas方程來考察穿心蓮總內(nèi)酯緩釋片的釋放， 首先將方程轉(zhuǎn)化為下列形式： ln Q∞=ln K+n ln t， 將 3 批緩釋片體外釋放度結(jié)果數(shù)據(jù)代入公式計(jì)算， 求得釋放指數(shù)值 （n）為 0.67 （r=0.996 5）， 表現(xiàn)為擴(kuò)散和骨架溶蝕綜合作用。

3 討論

本研究以HPMC為骨架材料， 以乳糖、 淀粉為填充劑，PVP為致孔劑， 制備了穿心蓮總內(nèi)酯骨架型緩釋片， 2 h 釋放約 30%， 6 h 釋放約 60%， 10 h 釋放約 80%， 12 h 釋放90%以上， 結(jié)果證明其緩釋藥效果理想， 符合設(shè)計(jì)要求。

本研究采用的模型藥物穿心蓮總內(nèi)酯為水難溶性藥物，因此加入表面活性 1.0%十二烷基硫酸鈉以增大其溶解度，以滿足漏槽條件［13］。

本研究采用比色法測定穿心蓮總內(nèi)酯的吸光度，參考文獻(xiàn)［14］， 表明穿心蓮總內(nèi)酯在 15 ～25 min 之內(nèi)穩(wěn)定， 因此選擇在 15 min 測定穿心蓮總內(nèi)酯的吸光度。

藥物釋放動力學(xué)方程符合零級方程和 Peppas方程， 應(yīng)用 Peppas方程作為擬合方程， 計(jì)算 n 值等于 0.67， 說明藥物釋放更傾向于骨架的溶蝕。這與緩釋片在溶出過程中的實(shí)際情況一致。

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R944

： B

： 1001-1528（2014）03-0634-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.044

2013-03-14

成都中醫(yī)藥大學(xué)科技發(fā)展基金 （ZRMS201240）

李小芳 （1964—） ， 女， 醫(yī)學(xué)博 士， 教授， 從 事 中 藥新劑 型 及 中藥新 技 術(shù) 研究。 Tel： 13808195110， E-mail： lixiaofang918 @163.com