珍珠層粉超微粉的制備及藥效學研究

夏 荃， 林傳權， 莫全毅， 李茹柳， 詹若挺， 鄧 雯， 成金樂， 陳蔚文，4*

（1.廣州中醫(yī)藥大學中藥學院， 廣東 廣州 510006； 2.嶺南中藥資源教育部重點實驗室， 廣東 廣州510006；3.廣州中醫(yī)藥大學脾胃研究所， 廣東 廣州 510405；4.廣州中醫(yī)藥大學中藥資源科學與工程研究中心， 廣東 廣州 510006； 5.中山中智藥業(yè)集團有限公司， 廣東 中山 528437）

珍珠層粉超微粉的制備及藥效學研究

夏 荃1， 林傳權2，3， 莫全毅2，3， 李茹柳2，3， 詹若挺2，4， 鄧 雯5， 成金樂5， 陳蔚文2，3，4*

（1.廣州中醫(yī)藥大學中藥學院， 廣東 廣州 510006； 2.嶺南中藥資源教育部重點實驗室， 廣東 廣州510006；3.廣州中醫(yī)藥大學脾胃研究所， 廣東 廣州 510405；4.廣州中醫(yī)藥大學中藥資源科學與工程研究中心， 廣東 廣州 510006； 5.中山中智藥業(yè)集團有限公司， 廣東 中山 528437）

目的 探討珍珠層粉超微粉制備工藝并對其進行質(zhì)量檢測，考察其對大鼠胃黏膜損傷的影響。方法 以粒度和收得率為指標，篩選超微粉碎設備及工藝參數(shù)；以性狀、顯微、粉體特征及碳酸鈣含有量等對珍珠層粉進行質(zhì)量檢測。 建立大鼠急性胃黏膜損傷模型， 考察珍珠層粉抗?jié)児πА?結果 采用氣流粉碎機， 粉碎頻率 25 Hz進行超微粉碎。 珍珠層粉超微粉粒度 D90為 3.97 μm， 碳酸鈣含有量為 93.11%。 超微珍珠層粉組減輕胃黏膜損傷效果優(yōu)于珍珠層粉原料組。結論 確定了珍珠層粉超微粉碎制備工藝，對珍珠層粉超微粉進行了質(zhì)量研究，為建立質(zhì)量評價方法奠定基礎。超微粉碎可以增強珍珠層粉的胃黏膜保護作用。

珍珠層粉；超微粉碎；制備；藥效

珍 珠 層 粉， 為 蚌 科 動 物 三 角 帆 蚌 Hyriopsis cumingii (Lea) 、 褶紋冠蚌 Cristaria plicata(Leach) 或珍珠貝科動物馬氏珍珠貝 Pteriamartensii(Dunker) 的貝殼［1］內(nèi)層部分加工而成的粉末，具有鎮(zhèn)靜安神、明目袪翳、收斂生肌等功效［2］。 研究發(fā)現(xiàn)， 中藥通過超微粉碎技術， 可以提高生物利用度、 增強藥效［3-5］， 因此， 珍珠層粉的超微粉碎技術被廣泛應用。但是，對于珍珠層粉超微粉，目前還沒有制訂相應的質(zhì)量標準［6-7］； 這導致了市售珍珠層粉超微粉質(zhì)量的參差不齊。同時，對超微粉碎帶來的藥效學變化也較少研究。因此，本實驗對珍珠層粉超微粉的制備工藝、質(zhì)量檢測以及珍珠層粉超微粉抗?jié)児πнM行了初步研究，為珍珠層粉超微粉的合理應用提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 試藥 珍珠層粉 (廣州中一藥業(yè)， 批號 070901)； 試劑均為分析純 (廣州試劑廠)。

1.2 動物 SD大鼠， SPF級， 廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供， 許可證號 SCXK2008-0020。

1.3 儀器 LS-POP(6) 型激光粒度分析儀 (珠海歐美客科技有限公司)； BT-1000 粉體綜合特性測試儀 ( 丹東市百特儀器有限公司)； CX31 型光學顯微鏡 (日本 OLYMPUS有限公司)； TC-10 型流化床超音速氣流粉碎分級機 ( 南京天目科技有限公司)； 9FZ-37 型齒爪式萬能粉碎機 (廣東省陽山興業(yè)機械制造有限公司)。

2 實驗方法與結果

2.1 粒度及粒度分布測定 采用激光粒度分析儀對粉體粒度進行分析。分別取微粉粉體適量，用蒸餾水作分散劑，攪拌均勻后超聲分散 2min， 投入高速循環(huán)樣品池。 分散介質(zhì)為超純水； 樣品折射率 2.60； 介質(zhì)折射率 1.33； 單峰及多峰模式分析 (單峰模式: 僅檢測樣品中粒度小于 50 μm的部分， 樣品中粒度大于 50 μm的部分被系統(tǒng)自動剔除。粒度分布呈單峰正態(tài)分布模式。多峰模式:在檢測限內(nèi)，檢測樣品的粒度分布無固定的出峰個數(shù)及峰型)；截斷下限為 0.20 μm； 截斷上限為 5l7.20 μm。

采用多峰模式對珍珠層粉原料粉體進行粒度分析測定，發(fā)現(xiàn)部分粉體分布在 5μm以下。 但另有部分顆粒粒度分布在20 ～100 μm左右。 說明粉體的粒度均勻度較差， 有必要進行進一步粉碎加工。

2.2 制備工藝研究

2.2.1 粉碎設備的篩選 固定粉碎量和粉碎時間， 以粒度和收得率為指標，選用氣流粉碎機和萬能粉碎機兩種粉碎設備， 分別進行粉碎。 結果見表1， 發(fā)現(xiàn)氣流粉碎機粉碎后所得粉體粒度較小，收得率高。故選擇氣流粉碎機進行粉碎。 見表1。

表 1 珍珠層粉粉碎設備篩選試驗結果 （n=5）

2.2.2 粉碎參數(shù)的優(yōu)化 根據(jù)影響珍珠層粉粉碎的因素，同時， 因部分原料藥的粒度已經(jīng)在 20 μm以下， 故在工藝篩選中固定進氣壓力，對分級頻率及粉碎時間兩個因素進行篩選。 通過試驗發(fā)現(xiàn)， 同等粉碎時間下， 分級頻率25 Hz與40 Hz， 所得微粉的粒度相近， 但前者的收率明顯高于后者； 而在粉碎時間的篩選試驗中發(fā)現(xiàn)， 35 min 以后， 無論是微粉粒度還是收得率都沒有明顯變化。故確定分級頻率為 25 Hz， 粉碎時間為 35 min。 見表 2。

表2 珍珠層粉氣流粉碎頻率篩選試驗結果 （n=3）

2.2.3 驗證試驗 采用氣流粉碎機， 粉碎頻率為 25 Hz，投料 3 000 g， 粉碎時間 35 min。 進行驗證試驗， 結果收率94%； 粒度 D90=3.95 μm。 以此工藝生產(chǎn)數(shù)批， 并進一步對成品進行質(zhì)量控制的研究。

2.3 質(zhì)量評價研究

2.3.1 性狀 取供試品適量， 置光滑白紙上， 平鋪約 5 cm2， 將供試品表面壓平， 在自然光下用肉眼觀察， 為類白色顆粒，色澤均勻一致，氣微，無味。

2.3.2 鑒別

2.3.2.1 取供試品適量， 置顯微鏡下觀察。 發(fā)現(xiàn)珍珠層粉原料粉與超微粉均為不規(guī)則小碎塊，半透明，大小不一。少數(shù)呈層狀結構，邊緣為不規(guī)則鋸齒狀。表面觀無顆粒性。珍珠層粉原料粉中偶見稍大的顆粒。 見圖1。

圖1 珍珠層粉超微粉顯微鑒別圖

2.3.2.2 取本品 0.5 g， 加稀鹽酸 10 mL， 即產(chǎn)生大量氣泡，濾過，濾液顯鈣鹽的鑒別反應。

2.3.3 水分 依 “水分測定法” ( 《中國藥典》 2010 年版附錄ⅨH第一法測定) 測定［1］。 結果見表 3。

2.3.4 粉體特征

2.3.4.1 粒度 粒度測定分析方法見 “2.1” 項。 結果發(fā)現(xiàn)，珍珠層粉超微粉碎后粉體粒度降低，均勻度提高。結果見圖2， 表3。

圖2 珍珠層粉超微粉體的粒度分布

2.3.4.2 粉體參數(shù) 運用粉體綜合特性儀， 測定粉體的休止角、崩潰角、松裝密度、振實密度等數(shù)據(jù)，以反映粉體特征。 結果見表3。

表 3 珍珠層粉 （ 原料粉， 超微粉） 測定結果 （ ˉ）

表 3 珍珠層粉 （ 原料粉， 超微粉） 測定結果 （ ˉ）

樣品水分/%粉體特征粒度 D90/μm休止角/°崩潰角/°松裝密度/(g·cm-1)振實密度/(g·cm-1)碳酸鈣/%超微粉0.516 3 ±0.023 63.97 ±0.73856.4 ±0.96824.3 ±0.3870.525 5 ±0.024 11.23 ±0.029 493.11 ±0.035 8原料粉0.508 2 ±0.053 616.57 ±5.75952.9 ±0.79820.8 ±0.7420.482 6 ±0.023 61.19 ±0.02392.88 ±0.069 7

2.3.5 碳酸鈣測定 取供試品 0.1 g， 精密稱定， 置 250 m L錐形瓶中， 加稀鹽酸 10 mL， 加熱攪拌使均勻， 部分溶解， 加蒸餾水 100mL與甲基紅指示劑 1 滴， 滴加 6.5%氫氧化鉀試液至溶液顯淺黃色后再多加5mL溶液， 加鈣黃素指示劑 2 滴， 用乙二胺四醋酸二鈉滴定液 (0.05 mol/L)滴定，至溶液的黃綠色熒光消失， 并顯橙色。 每1 m L乙二胺四醋酸二鈉滴定液 (0.05 mol/L) 相當于 5.005 mg的碳酸鈣 (CaCO3)［8-9］。

2.4 抗?jié)儗嶒?/p>

2.4.1 實驗方法 將大鼠隨機分組， 分別為空白對照組、珍珠層粉原料不同劑量組 (8、 4、 2、 1、 0.5 g/kg)、 超微珍珠層粉不同劑量組 (8、 4、 2、 1、 0.5 g/kg)； 每組各 8只動物， 雌 雄 各 半， 體 質(zhì)量 (180 ±20)g。 依 文 獻 方法［10-11］進行實驗， 大鼠禁食不禁水 24 h 后， 各給藥組依照給藥劑量設計， 將珍珠層粉 (原料粉或超微粉) 與蒸餾水混勻制成藥液，灌胃給藥；空白對照組灌服等容積蒸餾水，灌胃體積 10 mL/kg。 給藥后 1 h， 每只大鼠灌服 1.5 mL鹽酸乙醇溶液 (每 100 mL鹽酸乙醇溶液含鹽酸 1.7 mL， 無水乙醇60mL， 蒸餾水配制)， 再過 1 h 后處死動物， 摘取胃，甲醛固定后沿胃大彎剪開胃壁，將胃外翻，用清水輕輕洗去胃內(nèi)容物。觀察胃黏膜損傷情況。潰瘍指數(shù)計算方法［12］為以胃黏膜條索狀損傷的長度計分， 每 1mm為 1 分，若長度小于 1mm者計 0.5 分。

2.4.2 實驗結果 結果見表 4。

表 4 珍珠層粉 （ 原料粉、 超微粉） 鹽酸乙醇潰瘍模型潰瘍指數(shù)比較結果 （ ˉ）

表 4 珍珠層粉 （ 原料粉、 超微粉） 鹽酸乙醇潰瘍模型潰瘍指數(shù)比較結果 （ ˉ）

注: 與空白對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05； 與珍珠層粉原料組比較， 差異有統(tǒng)計學意義，△P＜0.05

組別動物/只S潰瘍指數(shù)/分8 g/kg4 g/kg2 g/kg1 g/kg0.5 g/kg空白對照組8136.13 ±59.6原料粉組 8―69.3 ±31.7**105.9 ±35.673.8 ±33.3**115.8 ±45.4超微粉組 8―41.6 ±21.7**70.1 ±40.2*△91.0 ±75.371.5 ±51.8*△

2.4.3 結果分析 珍珠層粉原料組、 珍珠層粉超微粉組均有抗胃潰瘍的效果；超微珍珠層粉抗胃潰瘍效果多優(yōu)于珍珠層粉組原料。珍珠層粉超微粉碎有利于發(fā)揮其抗?jié)兊寞熜А?/p>

3 討論

超微粉碎技術在中藥的加工中已有較多的應用，但相關的研究還不夠深入。本實驗從珍珠層粉的超微粉碎工藝著手，對制備工藝參數(shù)進行了優(yōu)化，并對珍珠層粉超微粉進行了質(zhì)量檢測研究?？紤]到超微粉體的特殊性，在質(zhì)量控制研究中，增加了粒度、休止角、振實密度等粉體特征項目。振實密度是指粉體裝填在特定容器后，對容器進行振動，從而破壞粉體中的空隙，使粉體處于緊密填充狀態(tài)后的密度。通過測量振實密度可以知道粉體的流動性和空隙率等數(shù)據(jù)。松裝密度是指粉體在特定容器中處于自然充滿狀態(tài)后的密度。同一個試樣的振實密度與松裝密度之差與振實密度之比為壓縮度。壓縮度越小，粉體的流動性越好。休止角是指粉體堆積層的自由表面在靜平衡狀態(tài)下，與水平面形成的最大角度。休止角與崩潰角之差稱為差角。差角越大， 粉體的流動性與噴流性越強［13］。 通過這些粉體特征項目的考察，可以綜合評價粉體的大小、流動性等質(zhì)量特點。

通過測試，發(fā)現(xiàn)珍珠層粉經(jīng)超微粉碎后，粉體粒度降低，粉體均勻度提高，水分和碳酸鈣量變化不明顯；通過測定差角和壓縮度發(fā)現(xiàn)，二者的流動性無明顯差別。而通過對大鼠急性胃黏膜損傷影響的藥效學試驗發(fā)現(xiàn)，超微粉碎可以明顯增強珍珠層粉抗?jié)兊乃幮?，可以推測粉體粒度降低與均勻度提高帶來了藥物生物利用度的提高。因此，研究需要不斷的深入，如對體內(nèi)過程的研究等，同時，在研究中，還有一些待完善的內(nèi)容，如重金屬的檢測、珍珠層粉中氨基酸的含量測定等，尚需進一步的研究探討。

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R944.2

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:1001-1528(2014)02-0396-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.042

2013-04-07

粵港關鍵領域重點突破項目 (GMTC074B065QFG163J0)

夏 荃 (1971—) ， 女， 副 教 授， 博 士， 研 究 方 向: 中 藥 炮 制 工 藝 及 標 準 化。 Tel:(020)39358042， E-mail:xiaquan71@ 126.com

*通信作者: 陳蔚文， 教授， 博士生導師。 E-mail:chenww@gzucm.edu.cn