不同方法提取烏墨葉揮發(fā)油化學成分的研究

劉艷清， 汪洪武， 蔡 璇

（1.肇慶學院化學化工學院， 廣東 肇慶 526061； 2.肇慶出入境檢驗檢疫局， 廣東 肇慶 526040）

不同方法提取烏墨葉揮發(fā)油化學成分的研究

劉艷清， 汪洪武1， 蔡 璇2

（1.肇慶學院化學化工學院， 廣東 肇慶 526061； 2.肇慶出入境檢驗檢疫局， 廣東 肇慶 526040）

目的 研究烏墨葉揮發(fā)油的化學成分。方法 采用水蒸氣蒸餾與超聲波萃取分別提取烏墨葉揮發(fā)油，運用毛細管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法結(jié)合計算機檢索對其揮發(fā)油化學成分進行了分析。 結(jié)果 顯示從水蒸汽蒸餾法和超聲波萃取所得揮發(fā)油中分別鑒定出了 34 和 37 種化合物。 用面積歸一法測定了 2 種揮發(fā)油中各種成分的相對百分含有量， 各占總峰面積的 97.31%和 98.19%。 2 種揮發(fā)油化學組成各有異同， 其主要成分為 α-蒎烯、 β-杜松烯、 α-古蕓烯、 丁香烯、 α-蛇麻烯、 β-芹子烯、 異長葉烯-5-酮、 韋得醇、 1，4a-二甲基-7-異丙烯基-4，4a，5，6，7，8-六氫-萘-2-酮。 結(jié)論 不同提取方法所得烏墨葉揮發(fā)油化學成分存在差異，但主要成分基本相同。

烏墨； 揮發(fā)油； 水蒸氣蒸餾； 超聲波輔助提??； 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

烏墨 Syzygium cumini（ L.） Skeels， 又稱烏楣， 海南蒲桃， 為桃金娘 科 Myrtaceae， 蒲桃屬 Syzygium［1］， 是藥用主要輔助蜜粉源植物，常綠喬木。烏墨富含黃酮及黃酮苷類、花青素類、 酚類、 β-谷甾醇、 蒲桃堿、 樺木酸、 齊墩果酸、鞣酸、 烷烴和醇類等主要成分［2-5］。 現(xiàn)代研究表明， 烏墨具有治療 糖 尿 ?。?-8］、 殺 螨 蟲［9］、 抑 菌［10-11］、 抗 氧 化［12-13］、清除自由基［14］、 抗失憶［15］、 預防基因 損傷及氧化 應(yīng)激［16］等多種活性， 葉油具有抑菌活性［17］。 Vijayanand 等［18］對烏墨果實的揮發(fā)油進行了研究，但鮮見烏墨葉揮發(fā)油化學成分的報道。

為了更好利用烏墨資源，擴大其藥用部位，本實驗對烏墨干葉分別采用水蒸氣蒸餾法和超聲波萃取法進行揮發(fā)油提取，采用毛細管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析其化學成分，比較所得各揮發(fā)油化學成分，以便更好地開發(fā)利用烏墨資源。

1 實驗部分

1.1 儀器與材料 揮發(fā)油提取器； Agilent 7890A-5975C氣-質(zhì)聯(lián)用儀 （ 美國 Agilent（ 安 捷 倫） 科 技 公司） ， SK8200H臺式超聲波清洗器 （上海科導超聲儀器有限公司）。

烏墨， 2012 年 7 月采自校園內(nèi)， 經(jīng)肇慶學院生命科學學院 陳 雄 偉 副 教 授 鑒 定 為 Syzygium cumini（ L.） Skeels的葉。

1.2 揮發(fā)油的提取

1.2.1 水蒸氣蒸餾法 稱取 100 g烏墨干葉， 于揮發(fā)油提取器中， 加水 1 000 mL， 按 《中國藥典》 2010 年版提取植物精油的方法［19］， 水蒸氣蒸餾 5 h， 收集揮發(fā)油， 得黃色透明、 濃郁香味的油狀液體， 揮發(fā)油收率為 0.12%。

1.2.2 超聲波輔助提取法 參考文獻 ［20］， 即稱取 100 g烏墨干葉于 1 L圓底燒瓶中， 加入500 mL正戊烷， 置于超聲波清洗器中， 選用 60%的功率于 50 ℃水浴超聲震蕩50 min后， 過濾， 回收溶劑， 得黃色透明、 濃郁香味油狀液體， 揮發(fā)油收率為 0.13%。

1.3 GC-MS 分析條件 氣相色譜條件： DB-5ms石英毛細管柱 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）； 升溫程序從 70 ℃開始， 保溫 2 min， 以 20 ℃ /min 升 溫 到 120 ℃， 然 后 以2 ℃ /min 升溫到 200 ℃， 最后以 30 ℃ /min 升溫到 250 ℃，保溫 1 min。 汽化室溫度 240 ℃； 載氣為高純氦氣； 載氣體積流量 0.75 mL/min； 分流比 30 ∶1， 進樣量 1.0 μL。

質(zhì)譜條件： 電離方式為 EI， 燈絲電流 0.6 mA； 電子能量 70 eV， 倍增器電壓1.0 kV， 離子源溫度200 ℃， 掃描周期 0.5 s， 溶劑延遲 3 min。

1.4 分析 分別取 1.0 μL揮發(fā)油， 用氣相色譜 -質(zhì)譜進行分析鑒定。所得各色譜峰經(jīng)峰純度檢測，并將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng) NIST’ 05.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索， 以確認揮發(fā)油中各化學成分。 然后通過 Agilent ChemStation 化學工作站， 按照峰面積歸一法進行定量分析，求出不同揮發(fā)油中各化學成分的相對質(zhì)量分數(shù)。

2 結(jié)果與討論

不同方法提取所得烏墨葉揮發(fā)油化學組分經(jīng) GC-MS 測定， 結(jié)果見圖 1、 圖 2 及表 1。

由表1可知，烏墨葉水蒸氣蒸餾法所得揮發(fā)油中共鑒定出 34 種化合物， 占總峰面積的 97.31%， 其中單萜 7種， 占 19.77%； 單萜氧化物 5 種， 占 8.78%； 倍半萜8 種， 占 31.18%； 倍半萜氧化物 10 種， 占 32.36%； 其他5 種， 占 5.04%。 在所鑒定出的化合物中， 丁香烯的質(zhì)量分數(shù)高達 11.24%， 其次是 α-蛇麻烯 （10.36%）、 1，4a-二甲基-7-異 丙 烯 基-4， 4a， 5， 6， 7， 8-六 氫-萘-2-酮 （ 8.01%） 、異長葉烯-5-酮 （6.91%） 和 α-蒎烯 （6.40%）。

圖1 水蒸汽提取烏墨葉揮發(fā)油總離子流色譜圖

圖2 超聲波提取烏墨葉揮發(fā)油總離子流色譜圖

表1 不同方法所得烏墨葉揮發(fā)油成分表

續(xù)表1

而烏墨葉超聲波法所得揮發(fā)油中共鑒定出 37種化合物， 占總峰面積的 98.19%， 其中單萜類化合物 6 種， 占10.38%； 單萜氧化物 5 種， 占 10.45%； 倍半萜 10 種， 占32.14%； 倍半萜氧化物 13 種， 占 41.06%； 其他 3 種， 占4.16%。 在鑒定出的 37 種化合物中， α-古蕓烯的質(zhì)量分數(shù)最高， 達 8.05%， 其次是 1，4a-二甲基-7-異丙烯基-4，4a，5，6，7，8-六 氫-萘-2-酮 （ 7.81%）、 異 長 葉 烯-5-酮 （ 7.23%） 、β-杜 松 烯 （ 6.41%）、 韋 得 醇 （ 5.66%） 和 β-芹 子 烯（4.36%）。

兩種方法共鑒定出41種化合物， 不同提取方法烏墨葉揮發(fā)油成分存在差異， 其中丁香烯、 α-蛇麻烯、 1，4a-二甲基-7-異丙 烯 基-4，4a，5，6， 7， 8-六 氫-萘-2-酮、 異 長 葉 烯-5-酮、 α-蒎烯、 α-松油醇、 b-香葉烯、 α-古蕓烯、 喇叭茶醇、橙花叔醇、 （-） 藍桉醇、 馬兜鈴酮、 β-杜松烯、 石竹烯氧化物、 b-沒藥醇、 反-羅勒烯、 β-芹子烯、 桃金娘醇、 反-Z-α-甜沒藥烯氧化物、 β-桉葉烯 30 種化合物為 2 種揮發(fā)油共有，但所占的質(zhì)量分數(shù)具有一定差異。

α-蒎烯、 β-杜松烯、 α-古蕓烯、 丁香烯、 α-蛇麻烯、 β-芹子烯、 異長葉烯-5-酮、 韋得醇、 1，4a-二甲基-7-異丙烯基-4，4a，5，6，7，8-六氫-萘-2-酮等為烏墨葉的主要成分 （見表2）。 而 α-蒎 烯、 β-蒎 烯、 β-檸 檬 烯、 β-香 葉 烯、 反-羅 勒烯、 二氫香芹酮、 桃金娘醇、 α-松油醇、 β-杜松烯、 α-古蕓烯、 丁香烯、 α-蛇麻烯、 β-桉葉烯、 β-芹子烯、 δ-杜松烯、 橙花叔醇、 石竹烯氧化物、 反-α-甜沒藥烯氧化物、 喇叭茶醇、 馬兜鈴酮、 （-） 藍桉醇、 異長葉烯-5-酮、 韋得醇、1，4a-二甲基-7-異丙烯基-4，4a，5，6，7，8-六氫-萘-2-酮、 β-沒藥醇等構(gòu)成了烏墨的特有香味。烏墨葉揮發(fā)油主要成分見表 2。 所得結(jié)果與 Vijayanand 等人所研究的果實揮發(fā)油成分具有較大差別， 果實揮發(fā)油的主要成分是順式-羅勒烯（29.95%）、 反式-羅勒烯 （23.03%）、 β-月桂烯 （6.99%）α-松油醇 （6.46%）。 說明不同部位揮發(fā)油的成分具有一定差異。

3 結(jié)論

不同提取方法所得烏墨葉揮發(fā)油化學成分存在差異，但主要成分基本相同， 均為 α-蒎烯、 β-杜松烯、 α-古蕓烯、丁香烯、 α-蛇 麻烯、 β-芹子 烯、 異長葉烯-5-酮、 韋 得 醇、1，4a-二甲基-7-異丙烯基-4，4a，5，6，7，8-六氫-萘-2-酮， 但所占的質(zhì)量分數(shù)具有一定差異。

［1］ 中國科學院中國植物志編委會.中國植物志第五十三卷第1分冊 ［M］.北京： 科學出版社， 1984： 101.

［ 2 ］ Bigoniya P， Singh C S， Srivastava B.Pharmacognostical and physico-chemical standardization of Syzygium cumini and Azadirachta indica seed ［ J］ .Asian Pacific J Trop Med， 2012， 2（1）： S290-S295.

［ 3 ］ Benherlal PS， Arumughan C.Chemical composition and in vitro antioxidant studies on Syzygium cumini fruit［J］ .JSci Food Agricul， 2007， 87（14） ： 2560-2569.

［ 4 ］ Sagrawat H， Mann A S， KharyaM D.Pharmacologicalpotential of Eugenia jambolana： a review［J］ .Pharmacognosy Magazine，2006， 2（6）： 96-105.

［ 5 ］ Baliga M S， Bhat H P， Baliga B R V， et al.Phytochemistry，traditional uses and pharmacology of Eugenia jambolana Lam（ black plum） ： a review［ J］ .Food Res Int， 2011， 44 （ 7 ） ：1776-1789.

［ 6 ］ Trojan-Rodrigues M， Alves T L S， Soares G LG， et al.Plants used as antidiabetics in popularmedicine in Rio Grande do Sul，southern Brazil［ J］.J Ethnopharmacol， 2012， 139 （ 1 ） ：155-163.

［ 7 ］ Middha SK， Usha T， Tripathi P， et al.An in vitro studies on indigenous ayurvedic plants， having hypoglycemic activity［ J］ . Asian Pac J Trop Med Dis， 2012， 2（ S1） ： S46-S49.

［ 8 ］ de Bona K S， BelléL P， Bittencourt PE R， et al.Erythrocytic enzymes and antioxidant status in people with type 2 diabetes：Beneficial effect of Syzygium cumini leaf extract in vitro［ J］ .Diabetes Res Clin Practice， 2011， 94（1） ： 84-90.

［ 9 ］ El-Moneim A， Afily M， El-Beltagi H S， et al.Acaricidal activity of differentextracts from Syzygium cumini L.Skeels（ Pomposia） against Tetranychus urticae Koch［ J］ .Asian Pac J Trop Biomed， 2011， 1（5） ： 359-364.

［10］ Shafi PM， Rosamma M K， Jamil K， etal.Antibacterialactivity of Syzygium cumini and Syzygium travancoricum leaf essential oils［ J］.Fitoterapia， 2002， 73（5） ： 414-416.

［11］ de Oliveira G F， Furtado N A JC， da Silva-Filho A A， et al. Antimicrobial activity of Syzygium cumini（ Myrtaceae） leaves extract［J］ .Brazzilian JMicrobiol， 2007， 38 （2）： 381-384.

［12］ Faria A F， MarquesM C， Mercadante A Z.Identification ofbioactive compounds from jambol?o（ Syzygium cumini） and antioxidant capacity evaluation in different pH conditions［ J］ .Food Chem， 2011， 126（4） ： 1571-1578.

［13］ Chanda SV， Kaneria M.Optimization of conditions for the extraction of antioxidants from leaves of Syzygium cumini L.using different solvents［ J］ .Food Anal Methods， 2012， 5 （ 3 ）：332-338.

［14］ Sari P， W ijaya CH， SajuthiD， et al.Colour properties， stability， and free radical scavenging activity of jambolan （ Syzygium cumini） fruit anthocyanins in a beveragemodel system： Natural and copigmented anthocyanins［ J］ .Food Chem， 2012， 132（4）： 1908-1914.

［15］ Alikatte K L， AkondiB R， Yerragunta V G， etal.Antiamnesic activity of Syzygium cumini against scopolamine induced spatial memory impairments in rats［ J］ .Brain Dev， 2012， 34 （10 ）：844-851.

［16］ Arun R， Prakash MVD， Abraham SK， et al.Role of Syzygium cumini seed extract in the chemoprevention of in vivo genomic damage and oxidative stress［ J］ .JEthnopharmacol， 2011， 134（2）： 329-333.

［17］ Shafi P M， Rosamma M K， Jamil Kaiser， et al.Antibacterial activity of Syzygium cumini and Syzygium traancoricum leaf essential oils［ J］ .Fitoterapia， 2002， 73（5） ： 414-416.

［18］ Vijayanand P， Rao LJM， Narasimham P.Volatile flavour components from of Jamun fruit（ Syzygium cumini） ［ J］ .Flavour Fragrance J， 2001， 16（1） ： 47-49.

［19］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典： 2010 年版一部［S］.北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010： 附錄 63.

［20］ Liu Y， Wang H， Zhang J.Comparison of MAHD with UAE and hydrodistillation for the analysis of volatile oil from four parts of Perilla frutescens cultivated in Southern China［ J］ .Anal Lett，2012， 45（13）： 1894-1909.

R284.1

： B

： 1001-1528（2014）05-1091-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.050

2013-08-05

廣東省科技計劃項目 （2011B020314011）； 廣東 省自然科學 基金項目 （S2011010004004）； 肇慶市科 技計劃項目（2011C005）； 肇慶市科技創(chuàng)新計劃項目 （2012G25）

劉艷清 （1973—） ， 女， 博士， 副教授， 研究方向： 天然產(chǎn)物化學。 E-mail： yqliu@zqu.edu.cn