瓜蔞薤白白酒湯對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子影響的實(shí)驗(yàn)研究

卞 海， 宋 燕， 王雅娟， 李亞軍， 孫洪勝， 陳賽賽， 龍子江*

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中醫(yī)院，安徽 合肥 230038）

［科研報(bào)道］

瓜蔞薤白白酒湯對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子影響的實(shí)驗(yàn)研究

卞 海1， 宋 燕2， 王雅娟1， 李亞軍2， 孫洪勝1， 陳賽賽2， 龍子江1*

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中醫(yī)院，安徽 合肥 230038）

目的 探討瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清中炎癥因子的影響。方法 建立硬膜下血腫大鼠模型， 隨機(jī)分為假手術(shù)組、 模型組、 陽(yáng)性組 （華佗再造丸）、 瓜蔞薤白白酒湯大、 中、 小劑量組， 每組10 只， 各組連續(xù)灌胃 14 d 后， 腹主動(dòng)脈取血， 以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 （ELISA） 檢測(cè)各組血清中 IL-2、 IL-6、 IL-8、TNF-α的水平。 觀察各項(xiàng)指標(biāo)的差異性及瓜蔞薤白白酒湯大、 中、 小劑量組對(duì)硬膜下血腫的治療作用， 并對(duì)瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量組的治療效果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果 瓜蔞薤白白酒湯高、中劑量組能夠升高硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子 IL-2 水平， 升高 IL-6、 IL-8 水平， 與模型組比較， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （ P＜0.01、 P＜0.05 ） 。 結(jié)論 瓜蔞薤白白酒湯能減小血腫面積起到有效的腦保護(hù)作用。

瓜蔞薤白白酒湯；硬膜下血腫；炎癥因子

硬膜下血腫是指顱內(nèi)出血的血液積聚于硬腦膜下腔形成積液或血腫， 是臨床上的常見病之一［1］。 顱內(nèi) CSDH的病因機(jī)制尚未明確，由于其特殊的易患人群，死亡率達(dá)1.5% ～8%， 術(shù)后復(fù)發(fā)率達(dá) 9.2% ～26.5%［2］。 由于多種原因?qū)е嘛B內(nèi)出血聚集于硬膜下腔稱為硬膜下血腫 （Subdural Hematoma， SDH）， 為神經(jīng)外科最常見的顱內(nèi)血腫之一，可呈多發(fā)性、并常伴腦實(shí)質(zhì)損傷或與別種血腫合并發(fā)生， 其發(fā)病率約占創(chuàng)傷性顱內(nèi)血腫的 50%［3］。 硬膜下血腫一旦發(fā)生，不易自愈，通常需采用手術(shù)治療，但病殘率與死亡率較高［4］。 臨床癥狀不明顯、 不能手術(shù)或不愿手術(shù)的硬膜下血腫患者，則可采用包括中醫(yī)中藥在內(nèi)的保守治療方法。中醫(yī)可采用活血化瘀法促進(jìn)腦部積液的吸收治療硬膜下血腫［5］。 諸多研究證實(shí)， 白介素不僅參與缺血性腦損傷局部炎癥反應(yīng)，而且在復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中處于中心地位［4］。 本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大鼠 血清中炎癥 因子 IL-2、 IL-6、IL-8、 TNF-α水平的檢測(cè)以及抗凝血的研究， 探討瓜蔞薤白白酒湯對(duì)硬膜下血腫模型大鼠的作用及作用機(jī)制，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

瓜蔞薤白白酒湯出自東漢張仲景 《金匱要略》， 由瓜蔞、薤白、白酒組成。去白酒即為瓜蔞薤白湯，功用通陽(yáng)散結(jié)、行氣祛痰，主治胸痹，癥見胸部隱痛，甚至胸痛徹背，喘息咳唾，短氣，舌苔白膩，脈沉弦或緊。方中以瓜蔞理氣寬胸，滌痰散結(jié)，為君藥。薤白溫通滑利，通陽(yáng)散結(jié)，行氣止痛，為臣藥。兩藥相配，一祛痰結(jié)、二通陽(yáng)氣，相輔相成，為治胸痹之要藥。佐以辛散溫通之白酒，行氣活血，增強(qiáng)薤白通陽(yáng)之功。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物與藥 物 健 康 SD大鼠 60 只， 體質(zhì)量（200 ±20） g， 雄性， 由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供， 許可證號(hào) SCXK （蘇） 2010-0004； 瓜蔞薤白白酒湯購(gòu)自安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 ［制備方法： 瓜蔞實(shí)一枚 （24 g）、薤白半升 （12 g）、 白酒七升 （適量）。 三味同煮， 取二升，分溫再用］； 陽(yáng)性藥為華佗再造丸 （廣州奇星藥業(yè)有限公司） 批號(hào) 9350。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與器材 水合氯醛， 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所， 批號(hào) 20110304； IL-2 試劑盒， 上海源葉生物技術(shù)有限公司， 批號(hào) CK-E95459C； IL-6 試劑盒， 上海源葉生物技術(shù)有限公司， 批號(hào) CK-E67489C； IL-8 試劑盒， 上海源葉生物技術(shù)有限公司， 批號(hào) CK-E87059C； 牙骨粉， 上海二醫(yī)張江生物材 料 有限公司， 批號(hào) 120605； EDTA-Na2抗 凝 管，江西精致醫(yī)療器械有限公司， 批號(hào) 2012025； STRONG-204牙科鉆 （ Saeshin 公司）； ACS-6 電 子 計(jì) 價(jià) 秤 （ 華 鷹 衡 器 有限公司）； JW-3021HR低溫離心機(jī) （安徽嘉文有限公司）；DK-420 電熱恒溫水槽 （上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司）； RT-6000 酶標(biāo)分析儀 （深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。

1.3 動(dòng)物模型制備 取 SD大鼠 60 只， 適應(yīng)性飼養(yǎng) 7 d 后稱重， 腹腔注射 3.5%水合氯醛 （1 m L/100 g） 麻醉大鼠，將大鼠頭部剃去 3 cm×3 cm鼠毛， 消毒后用手術(shù)刀沿頭頂正中線切長(zhǎng)3 cm的切口， 剝離右側(cè)的頭皮、 肌層及骨膜；眼眥取血約 600 μL， 吸入注射器， 用牙科鉆在大鼠頭頂前囟右 下 側(cè) 3.0 mm處 鉆 出直徑為 1.0mm的骨 孔， 向 硬 膜 下腔隙緩 慢 注射 300 μL自 體血 液， 留針 5 min 后 拔 出 并 用 牙科粉封閉骨孔，縫合頭皮，在縫合處滴加青霉素以防止感染。假手術(shù)組大鼠造模方法相同，但不注射自體血液。

1.4 動(dòng)物分組及給藥 將造模完成后的大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、陽(yáng)性藥組、瓜蔞薤白白酒湯大劑量組、瓜蔞薤白白酒湯中劑量組、瓜蔞薤白白酒湯小劑量組，每組10只； 各組大鼠按設(shè)定劑量灌胃給藥， 其中陽(yáng)性藥組為0.54 g/kg， 瓜蔞薤白白酒湯大劑量組 （ 所用藥物均為已制備好的 成 藥） 為 5.65 g/kg， 瓜 蔞 薤 白 白 酒 湯 中 劑 量 組 為2.83 g/kg， 瓜 蔞 薤白白酒 湯 小劑量組 為 1.41 g/kg， 模 型 組和假手 術(shù) 組灌胃給 同 等容量蒸 餾 水， 連 續(xù) 給藥 14 d。

1.5 動(dòng)物處理 于第14 天各組大鼠末次灌胃給藥1 h 后， 用3.5%水合氯醛 （1.0mL/100 g體質(zhì)量） 腹腔注射麻醉， 進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血， 并將血液放入 EDTA-Na2抗凝管和軟管， EDTA-Na2抗凝管以 3 000 r/min 低溫離心 15min， 取血漿放入 EP管中， 軟管中的血 3 000 r/min 離心 15min 得血清。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 瓜蔞薤白白酒湯對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清 IL-6、 IL-8水平影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表 1 各 用藥組對(duì) 硬 膜 下 血 腫 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影響 （， n=10）

表 1 各 用藥組對(duì) 硬 膜 下 血 腫 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影響 （， n=10）

注： 與空白組比較，**P＜0.01； 與模型 組比 較，△△P＜0.01，△P＜0.05

組 別 劑量/（g·kg-1）IL-6/（ng·L-1）IL-8/（ng·L-1）假手術(shù)組- 169.46 ±15.03 497.22 ±76.29模型組 - 211.57 ±10.26** 710.51 ±22.49**瓜蔞薤白白酒湯高劑量組5.65 100.01 ±9.94△△ 362.25 ±35.48△△瓜蔞薤白白酒湯中劑量組2.83 173.74 ±14.19△ 380.01 ±32.87△△瓜蔞薤白白酒湯低劑量組1.41 188.76 ±13.17 476.69 ±45.93華佗再造丸組 0.54 152.56 ±14.56△△543.96 ±42.17△△

與空白組比較， 模型組血清 IL-6 水平上升， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）， IL-8 水平上升 （P＜0.01）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，華佗再造丸陽(yáng)性對(duì)照組，IL-6， IL-8 水 平 下 降， 差 異 具 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （ P＜0.01、P＜0.01）； 瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-6 水平均下降， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01、 P＜0.05）； 瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-8 水平均下降， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。

2.2 瓜蔞薤白白酒湯對(duì)硬膜下血腫模 型大鼠血清 IL-2、TNF-α水平影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖 1 ～2。

圖 1 各用藥組對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清 IL-2 水平的影響 （， n=10）

圖 2 各用藥組對(duì)硬膜下血腫模型大鼠血清 TNF-α水平的影響 （， n=10）

與空白組比較， 模型組血清 IL-2 水平下降， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。 與模型組比較， 瓜蔞薤白白酒湯高、 中劑量組 IL-2 水平上升， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （ P＜0.01）； 華佗再造丸陽(yáng)性對(duì)照組 IL-2 水平上升， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。 與空白組比較， 模型組大鼠血清TNF-α水平升高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。 與模型組比較， 瓜蔞薤白白酒湯高、 中劑量組 TNF-α水平下降， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。 華佗再造丸陽(yáng)性對(duì)照組 TNF-α水平下降， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。

3 討論

以往 的 研 究 者 從 瓜 蔞 （ Trichosanthes kirilowii Maxim.）里分離出具有血球凝集活性的外源性凝集素。并且從種子油的不皂化部分里分離鑒定出了5 個(gè)羥基化甾醇， 10 個(gè) D：C-異齊墩果烷型三萜， 2 個(gè)側(cè)鏈具有羥基四氫呋喃的環(huán)阿爾廷醇型三萜，2個(gè)葫蘆烷型三萜，它們都是新化合物，其中 7-氧代-10α-葫蘆二烯醇、 7-Oxoisomultiflorenol、 3-表栝樓仁二醇 （ 3-epikarounidiol） 、 3-Epibry-onolol等 對(duì) TPA誘 導(dǎo)的小鼠耳部炎癥具有顯著抑制作用。 IL-8 生物學(xué)作用主要有激活中性粒細(xì)胞并釋放超氧化物和溶酶體酶、使其產(chǎn)生呼吸爆發(fā)、刺激中性粒細(xì)胞產(chǎn)生白三烯而增加血漿滲出，因此炎癥反應(yīng)與其生物學(xué)活性密切相關(guān)［6］。 研究表明薤白（ Allium macrostemon Bunge） 含有以 下幾種 有效成分： 甲基大蒜氨酸、大蒜糖和大蒜氨酸。揮發(fā)油主要是甲基丙烯基三硫醚、甲基烯丙基三硫醚、二甲基三硫醚和甲基丙基三硫醚等硫醚類化合物。 N-反式阿魏酰酪胺和 N-香豆酰酪胺可以有效地抗人體血小板聚集［7］。 藥理數(shù)據(jù)顯示薤白苷有較強(qiáng)的抑制 ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集作用。

TNF-α可促使星形 膠質(zhì)細(xì) 胞中的 IL-6、 IL-8 等炎癥因子的 mRNA轉(zhuǎn)錄及表達(dá)， 起到協(xié)同致炎作用。 TNF-α還可誘導(dǎo)強(qiáng)效血管活性物質(zhì)的釋放，從而引發(fā)血管收縮，減少局部腦血流量，增加毛細(xì)管通透性，進(jìn)一步加重血腦屏障，促進(jìn)腦缺血及水腫的發(fā)生［8］。 IL-6 與其受體特異性結(jié)合， 通過細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)炎癥反應(yīng)和凝血。在機(jī)體感染、創(chuàng)傷等原因時(shí) IL-6 參與了受傷部位的單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的集聚和激活、血栓形成、血管擴(kuò)張、血小板集聚，加重水腫和腦缺血等。 IL-2 主要由活化的 T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生， 其生物學(xué)活性是自然殺傷細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)淋巴因子激活殺傷細(xì)胞，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖和分化［9］。 本實(shí)驗(yàn)中瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-2高于模型組，由此可看出瓜蔞薤白白酒湯可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞對(duì) IL-2 的產(chǎn)生和釋放， 在硬膜下血腫疾病中具有一定的療效［10］。

硬膜下血腫中 IL-6、 IL-8 和 TNF-α的水平 與其術(shù)后復(fù)發(fā)有明顯的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)使用的復(fù)方瓜蔞薤白白酒湯能夠升高 大 鼠 血 清 中 IL-2 的水 平， 降 低 IL-6、 IL-8、 TNF-α水平，對(duì)大鼠血清中炎癥因子具有一定的調(diào)節(jié)作用。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1051-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.037

2013-08-15

安徽中醫(yī)藥大學(xué) 2013 年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)基金項(xiàng)目 （201320）； 2013 年度安徽省高等學(xué)校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2013A173）； 2014 年度安徽省自然科學(xué)研究項(xiàng)目 （1408085QH181）

卞 海 （1981—） ， 男， 碩士， 講師， 研究方向： 藥理學(xué)。 Tel： 13956062588， E-mail： bianhai410@126.com

*通信作者： 龍子江， 教授， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 中藥藥理學(xué)。 Tel： （0551） 65169216， E-mail： lzjyls@163.com