鐵莧菜適宜產地加工方法研究

魏學軍， 林先燕， 李雪營， 趙鴻賓， 劉文蘭

（1.黔南民族醫(yī)學高等專科學校， 貴州 都勻 558001； 2.北京中醫(yī)藥大學， 北京 100029）

鐵莧菜適宜產地加工方法研究

魏學軍1， 林先燕1， 李雪營1， 趙鴻賓1， 劉文蘭2

（1.黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校， 貴州 都勻 558001； 2.北京中醫(yī)藥大學， 北京 100029）

目的 比較不同加工方法和貯藏時間對鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮的影響，為鐵莧菜的產地加工提供科學依據(jù)。 方法 采用 HPLC法和 UV法分別測定沒食子酸和總黃酮的量。 結果 不同加工方法對鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮的影響顯著， 趁鮮切段后 80 ℃烘干效果最佳， 全草陰干效果最差， 趁鮮切段后曬干與趁鮮切段后80 ℃烘干差異不明顯。相同貯藏時間內，全草曬干和趁鮮切段曬干沒食子酸和總黃酮量差異顯著。結論 從節(jié)約資源和利于貯藏的角度考慮，建議鐵莧菜采用趁鮮切段曬干的產地加工方法。

鐵莧菜； 沒食子酸； 總黃酮； 高效液相色譜法； 紫外-分光光度法； 產地加工方法

鐵莧菜為大戟科植物鐵莧菜 Acalypha australis L.的干燥全草，廣泛分布在長江以南各省區(qū)，主要含黃酮、生物堿、鞣質等化學成分，具有清熱利濕、收斂止血的功能［1］。 由于資源豐富， 療效顯著，在貴州苗族聚集區(qū)被廣泛應用，是一種重要的藥食同源品種， 苗藥亦稱 “海蚌含珠”［2］， 具有良好的開發(fā)利用前景。目前鐵莧菜的研究多以化學成分和藥理作用為主，作為影響藥材品質關鍵因素的產地加工方法， 雖有全草曬干［2-3］和趁鮮切段曬干［1，3］的記載，但標準并不統(tǒng)一，質量難以得到保證，亟待予以規(guī)范，相關的研究至今未見文獻報道。

鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮具有抗菌消炎、止瀉、止血、平喘、抗衰老和增強機體免疫等廣泛的藥理作用［3-8］， 是鐵莧菜的重要 活性成 分。 本實驗以上述兩種成分作為考察指標，選擇全草和趁鮮切段兩種外觀性狀鐵莧菜采用不同方法進行干燥并測定兩種成分的量，結合藥材在相同貯藏時間內兩種成分的量的變化，探討鐵莧菜合理的產地加工方法，為其質量控制標準的建立提供科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-10ATvp 高效液相色譜儀 （日本島津公司）； SPD-10Avp 檢測器 （ 日本島津公司）；WMLSP色譜工作站 （南寧威瑪龍公司）； Cary 100型雙光束紫外可見分光光度計 （北京安捷倫公司）； SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋 （上海碩光公司）； 2.0R型 低 速 離心機 （ 德 國 HERAEUS）；DHG-9240A真空干燥箱 （上海金山公司）； AE240型電子天平 （瑞士 METTLER）。

1.2 材料 加工所用鐵莧菜新鮮藥材均于 2011 年7 月采自本校植物園試驗田地 （樣品編號 110715），除雜后按全草和趁鮮切段兩種性狀分別干燥，得樣品 A1～A10。 另將兩種性狀藥材曬干后裝入密封紙袋， 室溫下自然貯藏， 得樣品 B1～B6。 以上各樣品均制備3批次備用。藥材經貴陽中醫(yī)學院李江教授鑒定為大戟科植物 Acalypha australis L.鐵莧菜的干燥全草，樣本憑證留存于本校中藥標本室。沒食子酸 （批號 110831-200803）、蘆丁 （批號：100080-200707） 對照品購自中國食品藥品檢定所，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 沒食子酸和總黃酮的測定

2.1.1 沒食子酸測定的色譜條件 Diamonsil C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 流動相為乙腈-0.05%磷酸 （4 ∶96）， 檢測波長 270 nm， 柱溫為室溫， 體積流量 1mL/min，進樣量 10 μL， 理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算應不低于 6 000。 色譜圖見圖1。

圖1 沒食子酸對照品 （A） 和供試品 （B） HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s of gallic acid reference substance（ A） and sam p le（ B）

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取過 3 號篩干燥至恒重的不同樣品鐵莧菜粉末 2.0 g， 以水為溶媒， 用量 20 倍， 水浴溫度 80 ℃， 回流提取 2 次，每次3 h， 提取液過濾、 離心后定容至100 mL量瓶中，搖勻，冷藏備用。

2.1.3 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品 22.5 mg， 用流動相定容至 100 mL量瓶中，搖勻后作為沒食子酸對照品貯備液。

精密稱取蘆丁對照品 20 mg， 加入 60%乙醇溶解并定容至 100 mL量瓶中， 搖勻后即得蘆丁對照品溶液。

2.1.4 標準曲線的制備 精密移取1mL沒食子酸對照品貯備液置10 mL量瓶中， 用流動相定容至刻度。 精密移取不同體積對照品溶液按 “2.1.1” 項色譜條件進行測定，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線， 得線性方程為 Y=1.530 2 × 106X+219.198 9， r=0.999 9。 試驗結果表明對照品在 0.022 5 ～0.225 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密 移 取 蘆 丁 對 照品 溶 液 0.0、 0.5、 1.0、1.5、 2.0、 2.5、 3.0 m L分別置于 10 mL量瓶中，加 60%乙醇至5 mL， 加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，搖勻放置 6 min， 再加 10%硝酸鋁溶液 0.5 m L， 搖勻放置 5 min， 加 4%氫氧化鈉溶液 4 mL， 搖勻放置 12 min。 對蘆丁標準溶液顯色后在波長 400 ～700 nm 區(qū)間進行掃描， 確定 最 大吸收波長 為515 nm。以第一管溶液作為空白對照， 在 515 nm處分別測定吸光度，以蘆丁進樣量為橫坐標，吸光度為縱坐標作標準曲線， 線性方程為 Y=7.571 0X+ 0.001 2， r=0.999 3。 試驗結果表明對照品在10 ～ 60 μg范圍內線性關系良好。

2.1.5 精密度試驗 取沒食子酸對照品溶液， 連續(xù)進樣6 次， 按 “2.1.1” 項色譜條件測定， 沒食子酸的 RSD值為 0.87%。

取蘆丁對照品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 項標準曲線制備條件連續(xù)測定 6 次， 蘆丁的 RSD值為 0.71%。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取沒食子酸對照品溶液， 按“2.1.1” 項色譜條件， 分別在 0、 2、 4、6、 8 h 測定， 沒食子酸的 RSD值為 1.92%， 說明沒食子酸在8 h內穩(wěn)定。

取蘆丁對照品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 項標準曲 線 制 備 條 件 在 0、 30、 60、 90、 120、 150、180 min 各測定 1 次， 蘆丁的 RSD值為 1.80%， 說明蘆丁在 180 min 內穩(wěn)定。

2.1.7 重復性試驗 取 A1第 1 批次樣品5 份， 按“2.1.2” 項 制 備供試品溶 液， 微孔濾膜 （0.45 μm） 過濾， 按 “2.1.1” 項色譜條件測定， 沒食子酸的 RSD值為 1.76%。

取 A1第 1 批次樣品 5 份， 按 “2.1.2”項制備供 試 品 溶 液，取 供 試 品 溶 液 2.0 mL， 按“2.1.4” 項標準曲線制備條件測定， 蘆丁的 RSD值為2.31%。

2.1.8 加樣回收率試驗 取已知含沒食子酸量的A1第1 批次樣品鐵莧菜粉末各5 份，加入適量沒食子酸對照品，按 “2.1.2” 項制備供試品溶液，在 “2.1.1”項色譜條件下測定， 沒食子酸平均回收率為 98.54%，RSD值為 1.72%。

取已知含黃酮量的 A1第 1批次樣品鐵莧菜粉末各5 份， 加入適量蘆丁對照品， 按 “2.1.2” 項制備供 試 品 溶液， 取供試品溶液 2.0 mL， 按“2.1.4” 項標準曲線制備條件測定， 蘆丁平均回收率為 99.08%， RSD值為 2.18%。

2.1.9 樣品測定 精密移取不同批次樣品經提取所得供試品溶液， 微孔濾膜 （0.45 μm） 過濾， 按“2.1.1” 項色譜條件測定沒食子酸，測定值為 3批次的均值。 結果見表 1、 表 2。

表1 不同加工方法鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮的比較 （n=3）Tab.1 Com parison of gallic acid and total flavonoids contents in Acalypha Australis by different processing methods（n=3）

表2 不同貯藏期鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮的比較（mg/g， n=3）Tab.2 Com parison of gallic acid and total flavonoids contents in Acalypha Australis from different storage times（mg/g， n=3）

精密移取同一樣品不同批次提取所得供試品溶液 2.0 mL， 按 “2.1.4” 項標準曲線制備條件測定總黃酮， 測定值為 3批次的均值。 結果見表 1、表2。

由表1結果可知，兩種性狀鐵莧菜沒食子酸的量均以陰干最高， 100 ℃烘干最低。 原因可能是沒食子酸作為鞣質的水解單元，由于陰干持續(xù)時間長，水分蒸發(fā)緩慢，在干燥過程中，仍有部分鞣質水解所致；而烘干水分蒸發(fā)快，鞣質水解受阻，因而含有量較低。兩種性狀鐵莧菜總黃酮的量均以80℃烘干最高， 陰干品中含有量最低， 原因可能與藥材的生理活性是否失活有關。隨烘干溫度的升高，水分快速蒸發(fā)，致使藥材中部分物質和細胞失活，減少了維持新陳代謝所需的營養(yǎng)物質消耗，因而總黃酮量較高；陰干使藥材失活的過程緩慢，需消耗營養(yǎng)物質維持一定的新陳代謝，因而含有量較低。 100 ℃烘干總黃酮量有所下降， 可能與高溫下黃酮類成分被破壞有關。

為考察各種加工方法的效果，將沒食子酸和總黃酮兩種成分的量各按 0.5 的權重系數(shù)進行綜合評分，并對試驗結果予以比較分析。方差分析表明，不同干燥方法對兩種性狀藥材沒食子酸和總黃酮量的影響具有顯著差異； 趁鮮切段 80 ℃烘干效果最佳， 全草陰干效果最差， 趁鮮切段80℃烘干和趁鮮切段曬干的效果無顯著性差異。同一干燥方法對兩種性狀藥材沒食子酸和總黃酮量的影響具有顯著差異，趁鮮切段曬干的效果優(yōu)于全草切段曬干。提示產地加工時，從節(jié)約資源的角度，可采用趁鮮切段后曬干的加工方法。

由表2結果可知，兩種性狀鐵莧菜曬干后隨貯藏時間的延長，沒食子酸和總黃酮的量整體呈下降趨勢。方差分析表明，相同貯藏時間內，兩種性狀藥材中沒食子酸和總黃酮的量差異顯著，切段貯藏優(yōu)于全草貯藏。 貯藏 12月， 全草藥材和切段藥材中沒食子酸含量分別降低 47.71%、30.60%， 原因可能是切段后藥材表面積增大，吸濕性增強，導致部分鞣質水解，因而含有量降低較??；總黃酮量分別降低 69.21%、 66.59%。提示從利于貯藏的角度考慮，宜選擇趁鮮切段曬干后貯藏。

3 討論

3.1 中藥藥效的物質基礎是多種成分共同作用的結果已成為一種共識，鑒于目前鐵莧菜的質量控制標準不明確的情況，本實驗選擇鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮兩種活性成分作為考察指標，更能體現(xiàn)綜合評價鐵莧菜產地加工的質量標準，較選擇單一指標的評價更為科學、合理。此外，隨著對其化學成分和藥理作用研究的深入，其質量控制指標的選擇仍需不斷探討。

3.2 實驗結果表明， 不同加工方法對鐵莧菜產地加工和貯藏過程中活性成分的量影響顯著。由測定結果分析可知，如鐵莧菜以沒食子酸和總黃酮作為質量控制指標，采用趁鮮切段曬干加工方法得到的生藥品質好并利于貯藏。該結果同時驗證了文獻［1］ 記載的加工方法是科學、 合理的。

3.3 本實驗供試品溶液的制備方法， 是根據(jù)鐵莧菜中沒食子酸和總黃酮水溶性較強、穩(wěn)定性較好的特點，選用水為溶媒，比較回流、超聲、微波 3種方法的提取效率，結果以回流法最佳。繼而采用正交試驗設計對影響回流提取的四個因素：液固比、提取溫度、提取時間和提取次數(shù)進行優(yōu)化，最終確定了提取方法。

3.4 關于流動相的選擇， 本實驗參考相關文獻資料［9-12］， 對各種溶劑系統(tǒng)作了比較， 結果表明， 采用本實驗流動相，分離效果好，峰形漂亮，保留時間適宜，較好消除了各種干擾峰的影響。

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Different processing methods of Acalypha australis in the habitats

WEIXue-jun1， LIN Xian-yan1， LIXue-ying1， ZHAO Hong-bin1， LIUWen-lan2
（1.Qiannan Medical College for Nationalities， Duyun 558001， China； 2.Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Acalypha Australis； gallic acid； total flavonoids； HPLC； UV； different processingmethods in the habitats

R283

： A

： 1001-1528（2014）05-1030-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.031

2013-06-04

貴州省教育廳自然科學研究資金項目 （20090119）； 黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校資金項目 （QNYZ200902）

魏學軍 （1972—） ， 男， 副教授， 從事中藥與民族藥質量控制研究。 Tel： （0854） 8308038 ， E-mail： qndywxj@163.com