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一種結核分枝桿菌RNA/DNA同步定量分析方法

申請?zhí)?201310557556.6公布號:CN103602737A

申請日:2013.11.11公布日:2014.02.26

申請人:復旦大學;深圳市浩鼎生物科技有限公司

發(fā)明人:李瑤;彭勁甫;駱子義;吳海;姜麗娟

本發(fā)明屬于生物工程檢測技術領域，具體為一種結核分枝桿菌RNA/DNA同步定量分析方法。本發(fā)明包括如下步驟:結核分枝桿菌特異性定量PCR和RT-qPCR引物和探針設計;標準DNA的克隆和質(zhì)粒改造;細菌RNA與DNA的同時抽提;在同一反應管中同時進行RT-qPCR和PCR;熒光定量PCR檢測方法的建立和優(yōu)化。利用本發(fā)明的方法可以實現(xiàn)對結核分支桿菌的快速定量檢測，并確定細菌的生長活性狀態(tài)。本發(fā)明方法簡單、靈敏度高、特異性強，解決了現(xiàn)有檢測方法中檢測周期長、陽性率低、不能區(qū)分細菌的生長狀態(tài)的問題，對基礎研究、臨床快速診斷，及藥物開發(fā)和藥物使用效果的臨床評價具有重要的實際意義。

一種化妝品微生物的檢測方法

申請?zhí)?201310618267.2公布號:CN103614451A

申請日:2013.11.29公布日:2014.03.05

申請人:中山鼎晟生物科技有限公司

發(fā)明人:郭狄

摘 要:本發(fā)明涉及一種化妝品微生物的檢測方法，該檢測方法，包括以下步驟:先分別配制高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、不含樣品的空白對照液和含微生物的陽性對照液;然后將制得的高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、空白對照液和陽性對照液分別注入四個含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)并進行菌落計數(shù)，仔細觀察細菌培養(yǎng)結果，通過對比對細菌進行鑒定。該方法采用SCDLP增菌液對樣品進行稀釋，可明顯提高檢測靈敏度，將卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂作為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的培養(yǎng)基，使操作更為簡單，檢測結果更準確。

河口弧菌的環(huán)介導恒溫擴增快速檢測試劑盒及檢測方法

申請?zhí)?201310276906.1公布號:CN103614455A

申請日:2013.07.03公布日:2014.03.05

申請人:淮海工學院

發(fā)明人:張曉君;徐加濤;閻斌倫;秦國民

摘 要:本發(fā)明是一種用于河口弧菌的環(huán)介導恒溫擴增快速檢測試劑盒，其組成為:反應液A，1支，其組成為:10×Lampbuffer，dNTP，硫酸鎂水溶液，甜菜堿水溶液，引物Vaes-F3、Vaes-B3、Vaes-FIP、Vaes-BIP，BstDNA 酶，10×熒光染料SYBR GreenⅠ，陽性對照試樣，陰性對照試樣和超純水。本發(fā)明還涉及應用該試劑盒進行檢測的方法。本發(fā)明試劑盒具有特異性強、靈敏度高、快速且成本低、操作方法更簡單，適于水產(chǎn)養(yǎng)殖場現(xiàn)場快速檢測。本發(fā)明方法解決了現(xiàn)有技術時間長、工作量大、交叉污染、操作復雜、需要復雜儀器等缺陷，為水產(chǎn)動物疾病檢測提供了新的技術平臺，能較好滿足目前對河口弧菌引起的疾病的現(xiàn)場檢測的迫切需要。

用于創(chuàng)傷弧菌的LAMP-LFD檢測的引物和探針序列

申請?zhí)?201310556940.4公布號:CN103614466A

申請日:2013.11.11公布日:2014.03.05

申請人:寧波大學

發(fā)明人:陳炯;周前進

摘 要:本發(fā)明公開了用于創(chuàng)傷弧菌的LAMP-LFD檢測的引物和探針序列，特點是包括三對LAMP的引物TolC-F3、TolC-B3、TolC-FIP、TolC-BIP、TolC-LF、TolC-LB 和一條探針TolC-HP步驟，其中Van-FIP為5'端生物素標記引物，探針TolC-HP為5'端異硫氰酸熒光素FITC標記探針，具體序列如序列表中SEQNO1-NO7所示，優(yōu)點是具有更高的快捷性、特異性和靈敏度，儀器需求簡單，有利于創(chuàng)傷弧菌的早期診斷和檢測，可滿足基層檢測機構和現(xiàn)場疫源地檢測的需要。

一種花生青枯病菌巢式PCR檢測方法

申請?zhí)?201310609847.5公布號:CN103614475A

申請日:2013.11.27公布日:2014.03.05

申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所

發(fā)明人:游泳;謝世勇;李本金;陳慶河;丁雪玲;劉裴清

摘 要:本發(fā)明涉及一種花生青枯病菌的巢式PCR檢測方法，以樣品DNA為模板，利用細菌16S-23S rDNA ITS序列通用引物L1/L2進行第一輪PCR擴增，再以第一輪PCR產(chǎn)物為模板，通過設計的一對鑒別花生青枯病菌的特異性引物W1/W2，進行第二輪PCR擴增，擴增產(chǎn)物進行電泳檢測，如果出現(xiàn)374 bp的特異條帶，則確定所檢測的病原菌為花生青枯病菌。本發(fā)明的花生青枯病菌巢式PCR檢測方法，對病菌基因組 DNA的檢測靈敏度為10 fg，且能克服生物學鑒定、酶聯(lián)免疫技術和常規(guī)PCR等方法的缺點，提供了一種快速、靈敏、特異的花生青枯病菌檢測方法，可用于田間花生青枯病菌的早期診斷，對該病害的早期檢測和及時防治具有十分重要的意義。

由免疫復合物直接對微生物進行測序的測定法與方法

申請?zhí)?201280015562.2公布號:CN103635591A

申請日:2012.01.26公布日:2014.03.12

申請人:布里格姆及婦女醫(yī)院股份有限公司;因斯布魯克醫(yī)科大學

發(fā)明人:阿瑟·卡澤爾;理查德·布隆伯格

摘 要:本文提供了用于在患者樣品中對免疫刺激性微生物進行檢測和/或識別的MiIP-Seq測定法和方法。本文還提供了用于對感染性疾病進行診斷或在患者樣品中對先前未特征化的微生物進行識別的方法。本文所述的方法和測定法相對于現(xiàn)有方法的優(yōu)勢在于:(i)不需要用于微生物擴增的培養(yǎng)步驟;(ii)并非特異性針對特定微生物，可用于對先前未特征化的微生物進行識別;以及(iii)由于不進行微生物培養(yǎng)步驟，因此允許快速處理。

用于測定人免疫缺陷病毒(HIV)的方法、組合物和試劑盒

申請?zhí)?201280028651.0公布號:CN103635575A

申請日:2012.06.14公布日:2014.03.12

申請人:蓋立復治療公司

發(fā)明人:達努塔·夫龍斯卡;凱瑟琳·舒斯特;萊斯利·特雷姆利特

摘 要:本發(fā)明涉及組合物、方法和試劑盒，它們用于測定樣品中存在或不存在HIV，特別是用于測定HIV-1M組、HIV-1O組和/或HIV-2，特別是用于同時測定HIV-1M組、HIV-1O組和HIV-2。

一種檢測Notch信號通路的試劑、PCR檢測方法及其應用

申請?zhí)?201310686645.0公布號:CN103627814A

申請日:2013.12.13公布日:2014.03.12

申請人:青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院

發(fā)明人:王海波;梁曄;劉相萍;王麗萍;劉世海;姚如永;隋愛華;楊堃;遲靜薇;周泉;劉加秀

摘 要:本發(fā)明提供了一種檢測細胞內(nèi)Notch信號通路的試劑、PCR檢測方法及其應用，本發(fā)明所述檢測試劑包括檢測ADAM10基因、ADAM17基因、AES基因、CBL基因、CCND1基因、CD44基因等PCR反應引物以及相應的內(nèi)參調(diào)控基因GAPDH、ACTB、B2M的引物。本發(fā)明提供了檢測NOTCH信號通路核心分子變化的試劑，借助于所述檢測試劑可以通過實時熒光定量PCR在轉錄水平快速檢測出與NOTCH通路相關的基因，在此基礎上分析研究腫瘤NOTCH信號通路的核心分子及作用機理，從而快速準確的找到腫瘤相關藥物的NOTCH調(diào)節(jié)信號通路，為抗癌藥物篩選、新靶向藥物的機制探討等提供了有力的工具。

奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測試劑盒

申請?zhí)?201310673972.2公布號:CN103627812A

申請日:2013.12.11公布日:2014.03.12

申請人:廣西大學

發(fā)明人:何寶祥;陳亞明;杜向宏

摘 要:本發(fā)明公開了一種奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測試劑盒，包括由四對特異性引物構成的引物對組。應用本發(fā)明結合多重PCR技術可一次性同時擴增致病性無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌的特異性基因sip、nuc、rrnB和HblA，再通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物，能對奶樣中存在的主要病原菌進行全面、高效、準確的檢測與鑒定。本發(fā)明克服了常規(guī)病原菌檢測技術操作繁瑣、費時耗力等缺點，增加病原菌檢查的種類，提高了檢測的特異性和靈敏度，具有比常規(guī)檢測方法更特異、更敏感的特點，適合在基層獸醫(yī)站和奶牛養(yǎng)殖場中進行快速檢測，具有較好的應用前景。

環(huán)境微生物快速檢測方法

申請?zhí)?201310564815.8公布號:CN103627800A

申請日:2013.11.14公布日:2014.03.12

申請人:浙江天科高新技術發(fā)展有限公司

發(fā)明人:陳歡;劉靂;郭紅櫻;張遐耘;張啟坤;方序;錢兵

摘 要:本發(fā)明公開了一種環(huán)境微生物的檢測方法。①微生物收集，微生物收集自空氣濾網(wǎng)，②微生物基因組提取，③細菌16S rDNA擴增，真菌18S rDNA擴增，④rDNA測序，⑤數(shù)據(jù)分析，包括去污染序列、低質(zhì)量序列，歸并高相似度序列，序列注釋;⑥建立該環(huán)境細菌數(shù)據(jù)庫，包含種類信息、序列信息和豐度信息;和該環(huán)境真菌數(shù)據(jù)庫，包含種類信息、序列信息和豐度信息。本發(fā)明尤其適于對潔凈區(qū)環(huán)境微生物進行普查，較常規(guī)基于培養(yǎng)的檢測技術更加快捷、準確、靈敏，檢測成本和時間大幅度降低，顯著提高微生物污染監(jiān)測和控制能力。另一方面，基因測序數(shù)據(jù)還提供了微生物分子水平的標記，對于追溯和判斷微生物來源，準確識別污染源具有重要價值。

一種提高水中人源隱孢子蟲特異性的方法以及評價水中人源隱孢子蟲活性的方法

申請?zhí)?201310542387.9公布號:CN103627797A

申請日:2013.11.05公布日:2014.03.12

申請人:深圳職業(yè)技術學院

發(fā)明人:李紹峰;冉治霖;胡健龍;曾輝

摘 要:本發(fā)明涉及一種提高水中人源隱孢子蟲特異性的方法以及評價水中人源隱孢子蟲(Cryptosporidium hominis)活性的方法，該方法利用熒光定量 PCR(quantitative PCR，qPCR)技術并結合疊氮類染色劑疊氮溴化丙錠(propidium monoazide，PMA)評價水中人源隱孢子蟲的活性，對添加PMA染料的樣品進行強光照射，構建目的基因以及引物，并進行qPCR反應，檢測具有活性的人源隱孢子蟲。該方法提高了檢測的靈敏度和特異性，簡化了操作步驟，縮短了檢測時間，降低了檢測成本。

用于檢測生物材料的系統(tǒng)和方法

申請?zhí)?201310469534.4公布號:CN103627793A

申請日:2013.08.21公布日:2014.03.12

申請人:財團法人工業(yè)技術研究院

發(fā)明人:陳奕璋;蔡秀娟

摘 要:本發(fā)明涉及用于檢測生物材料的系統(tǒng)和方法。涉及一種通過采用捕獲試劑和探針來鑒別目標生物材料的方法。每種捕獲試劑對于一種目標是特異性的。每種探針被設計成辨別目標的類型。捕獲試劑和探針均被一種或多種可檢測的標記物標記。

一種對二基丙酮菌株的篩選方法

申請?zhí)?201310579438.5公布號:CN103627777A

申請日:2013.11.19公布日:2014.03.12

申請人:周懂懂

發(fā)明人:周懂懂

摘 要:本發(fā)明公開一種對二基丙酮菌株的篩選方法。具體步驟為:首先，從土壤深處選用合適的突然作為菌種的篩選樣品，要求所使用的土壤需要保持一定的潮濕度，連續(xù)三年土壤上栽種有植物;對土壤培養(yǎng)基進行富集，其中注入酵母浸膏以及秋水仙素，二者的質(zhì)量百分比為1∶2;高溫殺菌，然后調(diào)整其pH為弱酸性狀態(tài);倒入碳酸鈣溶液，然后加入瓊脂，使其pH穩(wěn)定在6.3;使用光電子天平稱取其重量，高速離心，然后靜置24 h即可。篩選過程中可以使用顯色劑，所述顯色劑為氫氧化鈉溶液;倒入所有溶液的過程中，都需要快速、不間斷攪拌。本發(fā)明的有益效果是，條件穩(wěn)定，操作建議，可以用于批量生產(chǎn)，適應工業(yè)化需求，純度較高。

居泉沙雷菌多克隆抗血清、制備方法及其在檢測沙門氏菌中的應用

申請?zhí)?201310630974.3公布號:CN103626868A

申請日:2013.12.02公布日:2014.03.12

申請人:山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心

發(fā)明人:肖西志;孫敏;吳振興;陳煜;鄧明俊;林超;吳信海;房保海;譚樂義;朱來華

摘 要:本發(fā)明公開了一種居泉沙雷菌多克隆抗血清及其制備方法以及在檢測沙門氏菌中的應用，包括下列步驟:①居泉沙雷菌免疫抗原的制備;②抗原接種;③多克隆抗血清的采集;居泉沙雷菌多克隆抗血清在檢測沙門氏菌中的應用包括含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)基及其沙門氏菌方法。本發(fā)明的多克隆抗血清可降低甚至完全抑制增菌液中居泉沙雷菌的數(shù)量，從而消除因居泉沙雷菌的存在而給沙門氏菌的檢測帶來的干擾，最終提高沙門氏菌分離鑒定的準確性，適用于現(xiàn)行的包括前增菌和選擇性增菌步驟的沙門氏菌檢測標準。該方法具有操作簡單、結果準確可靠等優(yōu)點。

一種AraC突變體蛋白及其應用

申請?zhí)?201210302998.1公布號:CN103626852A

申請日:2012.08.23公布日:2014.03.12

申請人:中國科學院微生物研究所

發(fā)明人:蔣培霞;唐雙焱

摘 要:本發(fā)明公開了一種AraC突變體蛋白及其應用，具體涉及AraC突變體蛋白在高通量篩選合成四氫嘧啶的菌株中的應用。本發(fā)明提供的AraC突變體蛋白為序列表的序列3所示的蛋白質(zhì)。編碼所述蛋白質(zhì)的基因也屬于本發(fā)明的保護范圍。本方法提供的AraC突變體蛋白能夠特異性結合四氫嘧啶并受其誘導開啟PBAD啟動子表達下游報告基因，建立報告基因表達強度和四氫嘧啶濃度之間的對應關系，從而可以通過熒光強度或者顏色反應來篩選高產(chǎn)四氫嘧啶的菌株。本方法為四氫嘧啶高產(chǎn)菌株的篩選提供一種快速高效的高通量篩選方法，將促進四氫嘧啶工業(yè)化應用的發(fā)展。

一種快速鑒別普通高溫放線菌的特異PCR方法

申請?zhí)?201310678186.1公布號:CN103614487A

申請日:2013.12.14公布日:2014.03.05

申請人:中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院;山東扳倒井股份有限公司

發(fā)明人:程池;趙紀文;姚粟;信春暉;李輝;劉勇;張明娟

摘 要:本發(fā)明公開了一種快速鑒別普通高溫放線菌的特異PCR方法，其技術方案是以樣品基因組DNA為模板，采用本發(fā)明設計的特異引物進行PCR反應，擴增普通高溫放線菌特征持家基因，實際擴增片段為733 bp，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物，鑒別樣品是否為普通高溫放線菌。本發(fā)明可快速識別普通高溫放線菌，只需DNA提取、PCR擴增和電泳檢測三步即可完成鑒別，具有高效、靈敏、便捷及成本低廉等顯著優(yōu)點。