CK7、CK18、CK5/6及P63在不同類型肺癌組織中的表達(dá)分析

朱棟麟　沈榮明　劉曉強(qiáng)　崔建勇　楊勇　朱一蒙

【摘要】 目的 探討CK7、CK18、CK5/6及P63在各類型肺癌組織中的表達(dá)情況。 方法 對104例肺癌手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行免疫組化分析， 聯(lián)合檢測CK7、CK18、CK5/6及P63的表達(dá)， 同時(shí)分析它們在不同類型肺癌中的表達(dá)情況。 結(jié)果 CK7在腺癌、腺鱗癌及大細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率分別為91.07%、85.71%及50.00%， 在鱗癌和小細(xì)胞癌中無陽性表達(dá)。CK18在腺癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率分別為96.43%、85.71%、100%及100%， 在鱗癌中無陽性表達(dá)。CK5/6在鱗癌中的陽性表達(dá)率為100%， 在腺癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中無陽性表達(dá)。P63在鱗癌和腺鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為100%及14.29%， 在腺癌、小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中無陽性表達(dá)。 結(jié)論 CK7及CK18可用于肺腺癌診斷， CK5/6及P63可用于肺鱗癌診斷。同時(shí)， CK18還可用于肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌的診斷。

【關(guān)鍵詞】 肺癌；免疫組化；CK7；CK18；CK5/6；P63

近年來肺癌的發(fā)病率逐年增長， 已成為我國首位惡性腫瘤死亡原因[1]。其組織學(xué)分類類型眾多， 常見的有腺癌、鱗癌、腺鱗癌、小細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌等。目前越來越多的研究顯示某些新興的靶向治療方案及聯(lián)合治療方案與肺癌組織學(xué)類型密切相關(guān)， 因而準(zhǔn)確的分型對肺癌患者的治療及預(yù)后有重要價(jià)值。高分化及中分化的鱗癌及腺癌不難診斷， 然而對于分化較差的標(biāo)本， 以及纖維支氣管鏡活檢組織等擠壓明顯的標(biāo)本， 僅依靠HE染色判別類型已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。本文收集肺癌手術(shù)標(biāo)本104例， 對其進(jìn)行CK7、CK18、CK5/6及P63的聯(lián)合檢測， 旨在探討它們在不同類型肺癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)， 旨在為診斷與治療提供幫助。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 標(biāo)本來源于2008年1月～2012年12月在蘇州市立醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的肺癌患者， 共104例， 其中男性70例， 女性34例， 年齡從44～84歲， 平均年齡為63.2歲。其中腺癌56例， 鱗癌22例， 腺鱗癌14例， 小細(xì)胞癌8例， 大細(xì)胞癌4例。所有手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定， 常規(guī)取材、包埋、切片和HE染色。所選患者術(shù)前均未行放療、化療等治療。

1. 2 免疫組織化學(xué)染色 CK7、CK18、CK5/6及P63抗體及二抗均來源于廣州深達(dá)公司， 組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化、高壓抗原修復(fù)3 min， 3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶， 使用iVision 免疫組化染色試劑盒， 用PBS代替一抗作為陰性對照。

1. 3 結(jié)果判定 CK7、CK18、CK5/6陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜， P63定位于細(xì)胞核。判讀結(jié)果綜合染色強(qiáng)度及染色范圍， 染色強(qiáng)度判讀標(biāo)準(zhǔn)為：不著色為陰性， 黃色至褐色為陽性。陽性細(xì)胞范圍判讀標(biāo)準(zhǔn)為：無陽性細(xì)胞為陰性， 陽性細(xì)胞≤30%為灶性陽性， >30%為陽性。

2 結(jié)果

2. 1 CK7在肺癌組織中的表達(dá)情況 在104例肺癌組織中檢測CK7的表達(dá)， 結(jié)果如表1所示， CK7在肺腺癌組織中的表達(dá)陽性率為91.07% （51/56）， 局灶陽性率為5.36% （3/56）；在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為0， 局灶陽性率為27.27% （6/22）；在肺腺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為85.71% （12/14）， 局灶陽性率為14.29% （2/14） ；在肺大細(xì)胞癌組織中的表達(dá)陽性率為50% （2/4）， 局灶陽性率為50% （2/4）；而在肺小細(xì)胞癌中未檢測到陽性表達(dá)。

2. 2 CK18在肺癌組織中的表達(dá)情況 CK18在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表2所示， 其在肺腺癌組織中的表達(dá)陽性率為96.43% （54/56）， 局灶陽性率為3.57% （2/56）；在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為0， 局灶陽性率為81.82% （18/22）；在肺腺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為85.71% （12/14）， 局灶陽性率為14.29% （2/14） ；在肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中表達(dá)陽性率均為100% （8/8， 4/4）。

2. 3 CK5/6在肺癌組織中的表達(dá)情況 CK5/6在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表3所示， 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽性表達(dá)8.93% （5/56）；而在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為100%；在肺腺鱗癌組織中為局灶陽性表達(dá)85.71% （12/14） ；在肺小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中均無陽性表達(dá)。

2. 4 P63在肺癌組織中的表達(dá)情況 P63在各類型肺癌中的表達(dá)結(jié)果如表4所示， 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽性表達(dá)21.43% （12/56）；而在肺鱗癌組織中的表達(dá)陽性率為100%；在肺腺鱗癌組織中陽性表達(dá)率為14.29% （2/14）， 局灶陽性率為57.14% （8/14） ；在肺小細(xì)胞癌中有灶性表達(dá)25% （2/8）， 在大細(xì)胞癌中無陽性表達(dá)。

3 討論

肺癌的個體化治療將成為臨床肺癌治療的主流趨勢， 毫無疑問， 對肺癌的準(zhǔn)確分型是這一方案得以施行的前提。以往人們重點(diǎn)關(guān)注肺小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌的區(qū)分， 然而大量研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞中的組織學(xué)分類也至關(guān)重要。如臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)針對EGFR的靶向藥物吉非替尼及埃羅替尼等僅對肺腺癌患者療效明顯。故而探討分子標(biāo)志物在不同類型肺癌中的表達(dá)， 充分發(fā)揮其指導(dǎo)診斷及治療的作用， 值得深入研究。

細(xì)胞角蛋白（cytokeratin， CK）主要分布于上皮細(xì)胞， 是細(xì)胞的主要骨架蛋白。它們具有極高的保守性和組織分化特異性， 與上皮細(xì)胞的類型、增殖、分化密切相關(guān)， 因而被用作腫瘤標(biāo)志物[2， 3]。P63在正常肺組織中表達(dá)于支氣管儲備細(xì)胞， 而不表達(dá)于上皮細(xì)胞， Wang BY等[4] 研究了30例肺鱗癌組織， 發(fā)現(xiàn)其均表達(dá)P63， 少數(shù)肺腺癌和細(xì)支氣管肺泡癌也有表達(dá)。也有研究認(rèn)為P63僅表達(dá)于鱗癌， 在其他類型肺癌中基本不表達(dá)。

越來越多的研究表明多個抗體的聯(lián)合檢測在肺癌組織學(xué)分類中的實(shí)用價(jià)值大于單個指標(biāo)的運(yùn)用[5]。有研究在12株肺癌細(xì)胞株中檢測了CK5/6、CK14、CK17及CK18等分子標(biāo)志物的mRNA水平， 并在95例非小細(xì)胞肺癌患者組織標(biāo)本中檢測了其蛋白表達(dá)， 發(fā)現(xiàn)CK5/6、CK14、CK17在鱗癌中表達(dá)較高， 且其高表達(dá)與低分化相關(guān)， CK7、CK18則高表達(dá)于腺癌細(xì)胞[6]。張同海等人聯(lián)合檢測了TTF1、CK5/6、P63和napsinA在肺鱗癌及腺癌中的表達(dá)， 認(rèn)為P63和CK5/6共同陽性表達(dá)與TTF1和napsinA共同陰性表達(dá)更支持肺鱗癌， 而非肺腺癌， 反之亦然[7]。楊艷等研究表明， 在肺腺癌中， CK7的靈敏度和特異度分別為98.6%和61.5%， CK18則分別為 98.6%和37.5%[8]。

本研究結(jié)果表明， 在所觀察的56例肺腺癌中， CK7與CK18表達(dá)陽性的病例分別為51例及54例， 靈敏度為91.07%及96.43%， 而CK7或CK18表達(dá)陽性者共56例， 靈敏度為100%。而兩者在22例肺鱗癌中均為陰性表達(dá)， 表明CK7與CK18聯(lián)合運(yùn)用對肺腺癌診斷意義明確， 與文獻(xiàn)報(bào)道相符。同時(shí)14例腺鱗癌中的腺癌成份均可檢測到CK7及CK18的表達(dá)。而CK7在大細(xì)胞癌中部分表達(dá)， 在小細(xì)胞癌中不表達(dá)。但CK18在小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中均為陽性表達(dá)， 提示小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌與低分化腺癌的鑒別仍需要其它分子標(biāo)志物的加入。

在對CK5/6及P63的檢測中發(fā)現(xiàn)， 二者在22例肺鱗癌組織中均為陽性表達(dá)， 陽性率100%， 在56例肺腺癌中均為陰性表達(dá)， 提示CK5/6與P63聯(lián)用可準(zhǔn)確鑒別肺鱗癌與腺癌， 與文獻(xiàn)報(bào)道相符[9-11]。P63在腺鱗癌中部分表達(dá)陽性， CK5/6在85.71%的腺鱗癌中局灶表達(dá)陽性。在8例小細(xì)胞癌和4例大細(xì)胞癌中CK5/6表達(dá)均為陰性；P63在大細(xì)胞癌中無陽性表達(dá)， 在小細(xì)胞癌中有25%呈局灶陽性表達(dá)。結(jié)合CK7的檢測結(jié)果， 可發(fā)現(xiàn)在小細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中， 上皮標(biāo)志物表達(dá)水平較低， 與其分化較差相符合。

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