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    鴨瘟病毒的免疫學(xué)研究進(jìn)展

    2014-04-08 21:22:03趙軍楊孝樸宋曉育
    生物技術(shù)通報(bào) 2014年7期
    關(guān)鍵詞:免疫系統(tǒng)抗原特異性

    趙軍 楊孝樸 宋曉育

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,蘭州 730070)

    鴨瘟(Duck plague,DP)又稱鴨病毒性腸炎,是由鴨瘟病毒(Duck plague virus,DPV)引起的鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血型疾?。?]。DP主要臨床特征為體溫顯著升高,兩腿酸軟無力,下痢,兩眼流淚和部分病鴨頭、頸部腫大。DP最早于1923年出現(xiàn)在荷蘭,隨后在印度、比利時(shí)、意大利、英國(guó)、法國(guó)等相繼出現(xiàn),1967年在美國(guó)東海岸流行,中國(guó)于1957年首次報(bào)道。多年來鴨瘟以高達(dá)20%-90%的死亡率引起社會(huì)廣泛關(guān)注。DP的傳播速度很快,加上集約化養(yǎng)鴨業(yè)鴨群密度高、流動(dòng)頻繁、極易引起流行。該病在一個(gè)大流行期后常呈地方性流行,長(zhǎng)期危害養(yǎng)鴨業(yè),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于其病原學(xué)特性,使目前的多種疫苗的保護(hù)作用不太理想,筆者概述了近年來有關(guān)DPV的免疫學(xué)研究進(jìn)展,為尋找更有效的新型疫苗提供新的思路。

    1 DPV的主要抗原蛋白

    DPV屬于皰疹病毒科,皰疹病毒亞科,鴨皰疹病毒1型,為長(zhǎng)約150-170 kb的線狀雙股DNA病毒[2]。DPV的編碼蛋白有囊膜蛋白,統(tǒng)一命名為gL(UL1)、gM(ULl0)、gN(UL49. 5)、gH(UL22)、gB(UL27)、gC(UL44)、gL((UL53)、gG(gX/US4)、gJ(USl)、gD(US6)、gI(US7)和gE(US8)。這12種糖蛋白,除gG外,其他糖蛋白為病毒囊膜的組成成分。gB蛋白是DPV的優(yōu)勢(shì)結(jié)構(gòu)蛋白并為其主要免疫原性蛋白。衣殼蛋白由UL6、UL18、UL19、UL26、UL26.5、UL35和UL38基因產(chǎn)物組成,其中UL19為主要的衣殼蛋白,UL6為次要衣殼蛋白。皮層蛋白由UL7、UL11、UL14、UL16、UL36、UL37、UL46、UL47、UL48、UL49和UL51基因編碼產(chǎn)物組成,其中UL36為主要的抗原蛋白[3]。DPV全毒免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物得到的單克隆抗體是針對(duì)NP蛋白的,但NP蛋白不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體[4]。由于DPV各個(gè)毒株之間差異不大,所以DPV各亞群之間gB具有較多的同源性。gB蛋白有DPV主要的抗原位點(diǎn),是淋巴細(xì)胞增生性應(yīng)答的靶點(diǎn),同時(shí)參與細(xì)胞免疫和體液免疫,特別是誘導(dǎo)綜合抗體的產(chǎn)生,由此可以認(rèn)為gB蛋白是發(fā)展新型疫苗的良好靶抗原[5]。最新的研究發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)蛋白如gC蛋白,一些非結(jié)構(gòu)性蛋白在DPV感染過程中也能產(chǎn)生一定的免疫活性[6]。

    2 DPV持續(xù)性感染

    持續(xù)性感染是DPV嚴(yán)重危害的一個(gè)明顯特征。持續(xù)性感染即DPV在鴨或水禽體內(nèi)持續(xù)存在,沒有任何的臨床癥狀表現(xiàn),帶毒時(shí)間從幾個(gè)月到幾年不等,導(dǎo)致長(zhǎng)期的病毒血癥。該病毒侵入鴨體,可潛伏于三叉神經(jīng)節(jié)造成感染,使病鴨終身帶毒并周期性向體外排毒在鴨群中廣泛傳播[7]。DPV持續(xù)性感染有以下原因造成的:第一,就宿主而言,DPV在相關(guān)免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞中增殖,最終使宿主大量的免疫細(xì)胞受到損傷,進(jìn)而導(dǎo)致鴨的免疫抑制;另一方面,鑒于DPV囊膜蛋白和衣殼蛋白是主要的保護(hù)性抗原,且UL6基因在病毒增殖方面的巨大作用及在不同毒株中的高度保守性[8]。由此推斷,病毒粒子表面具有誘導(dǎo)中和抗體功能的囊膜糖蛋白抗原當(dāng)其表位發(fā)生突變時(shí),就能逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別和清除,造成長(zhǎng)期的病毒血癥和持續(xù)性感染。

    3 黏膜免疫

    正常情況下,黏膜是保護(hù)機(jī)體免受病原侵害的主要屏障,而黏膜在病理情況下,不具備免疫反應(yīng)能力,病原體就會(huì)侵入機(jī)體。黏膜免疫系統(tǒng)(MIS)被發(fā)現(xiàn)以來,已成為科學(xué)家的研究熱點(diǎn),并取得很大成就。MIS是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要的組成成分,也是免疫系統(tǒng)阻止病原入侵的第一道防線。有研究證實(shí),機(jī)體95%以上的感染發(fā)生在黏膜表面[9-12],而已知黏膜部位的免疫細(xì)胞和免疫分子數(shù)量均超過了具體的系統(tǒng)免疫,讓MIS成為機(jī)體最大的免疫器官[13-15]。有研究表明,DPV感染20日齡鴨后3 d,即可在消化道和呼吸道分泌液中檢出DPV特異性SI-gA,60 d后仍能檢出此抗體。以此表明SIgA是在消化道和呼吸道黏膜中抗DPV的主要特異性體液免疫因子,是MIS參與機(jī)體免疫應(yīng)答的主要特征[16-18]。另有研究證明在黏膜某個(gè)位置的刺激,能使局部和黏膜表面遠(yuǎn)端都產(chǎn)生特異性SIgA,這種SIgA產(chǎn)生的內(nèi)在聯(lián)系,即為共同黏膜免疫系統(tǒng)(CMIS)[19,20]。同時(shí)有試驗(yàn)結(jié)果證實(shí):口服DPV后,鴨直腸分泌液中DPV特異性SIgA產(chǎn)生時(shí)間早于空腸、回腸,說明CMIS也存在劃分,產(chǎn)生IgA的B細(xì)胞可由黏膜誘導(dǎo)位點(diǎn)有選擇性向某些效應(yīng)位點(diǎn)移動(dòng),而并非向所有黏膜表面移動(dòng)[21];呼吸道SIgA抗體滴度與十二指腸和食道同期相比,結(jié)果偏低,主要原因是MIS呈現(xiàn)局部免疫特點(diǎn),即一個(gè)黏膜部位致敏的免疫細(xì)胞,由胸導(dǎo)管進(jìn)入血液循環(huán)并且分化成熟,在特異歸性巢受體的介導(dǎo)下,大多數(shù)(80%)免疫細(xì)胞歸巢致敏部位黏膜固有層上皮內(nèi),發(fā)揮免疫效應(yīng),而剩下的(20%)歸巢其他地方,發(fā)生免疫效應(yīng)[19,20]。以上研究提示,DPV誘導(dǎo)鴨局部MIS時(shí),GALT比BALT和NALT更好的產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答[21]。

    3.1 細(xì)胞免疫

    研究表明,T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答在DPV感染過程中有重要作用。細(xì)胞免疫應(yīng)答由胸腺依賴性抗原(TD)引起,有抗原遞呈細(xì)胞,包括巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞,受感染的組織靶細(xì)胞,有免疫作用的輔助性T細(xì)胞(Th、CD4+,有炎癥反應(yīng)的效應(yīng)T細(xì)胞(TD、TDHT、CD4+)和對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷作用的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(TC、CD8+)。研究發(fā)現(xiàn),在DPV感染早期,感染鴨的中樞免疫器官發(fā)生明顯變化,在DPV感染后2 h,即可在脾臟等重要的中樞免疫器官中檢出DPV的DNA,表明鴨感染DPV后,主要對(duì)中樞免疫器官造成攻擊和損傷,使DPV對(duì)鴨的感染力增強(qiáng),為實(shí)現(xiàn)DPV的全身組織感染和廣泛的嗜性提供條件。在分子水平上,一定程度解釋了鴨感染DPV后出現(xiàn)的全身敗血癥和大面積的組織器官損傷[22]。在有絲分裂原ConA的刺激下,T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞的效率是考察機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一,而CD3+是鑒定T細(xì)胞的主要標(biāo)記,反映了T淋巴細(xì)胞的總量,若T淋巴細(xì)胞總量降低,使細(xì)胞免疫反應(yīng)的啟動(dòng)、誘導(dǎo)和效應(yīng)都有所降低。程志萍等[23]在淋巴細(xì)胞游走抑制試驗(yàn)中證明細(xì)胞免疫對(duì)DPV的免疫保護(hù)作用。表位是抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán),是T細(xì)胞抗原受體和B細(xì)胞抗原受體及抗體特異性結(jié)合的基本單位[24]。研究表明,gB蛋白和gC蛋白都能刺激T淋巴細(xì)胞的增生,但是gB蛋白作用弱,而gC蛋白作用強(qiáng)。各種蛋白的誘導(dǎo)作用與跨膜糖蛋白有密切的關(guān)系,表明gC蛋白在細(xì)胞免疫中居主要地位[6,25]。

    3.2 體液免疫

    DPV感染機(jī)體后可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生全身性的體液免疫應(yīng)答。產(chǎn)生的特異性抗體主要針對(duì)DPV的結(jié)構(gòu)蛋白——gB蛋白。體液免疫由依賴性抗原遞呈細(xì)胞和Th細(xì)胞參與的非胸腺依賴性抗原(Tl)的誘發(fā)[26]。鴨感染DPV后5 h左右就可以檢測(cè)到特異性抗體IgM,抗體效價(jià)在28 d達(dá)到峰值,并維持182 d的高水平效價(jià)狀態(tài)。臨床和實(shí)驗(yàn)室證實(shí)DPV感染后可迅速在血液中檢測(cè)到高滴度的特異性抗體IgG[27,28]。因?yàn)镮gM和IgG抗體是體液免疫的主要抗體,IgM在DPV感染早期發(fā)揮重要的抗感染作用;IgG是滴度水平最高的抗體,在抗感染中發(fā)揮中堅(jiān)作用。所以,在疫苗接種后,能否在最短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生IgM,在對(duì)疾病緊急免疫中非常重要,而能否長(zhǎng)時(shí)間高滴度的產(chǎn)生IgG抗體,是評(píng)價(jià)疫苗好壞的標(biāo)準(zhǔn)。有試驗(yàn)證實(shí),DPV特異性抗體IgM和IgG發(fā)展規(guī)律呈現(xiàn)典型的雙峰現(xiàn)象,是弱毒疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抵抗DPV的主要抗體,是該病毒突破黏膜免疫后重要的防線[17]。

    4 免疫抑制

    免疫抑制是因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)受到損害導(dǎo)致機(jī)體暫時(shí)或永久的免疫應(yīng)答功能不全和對(duì)疾病的高度敏感。有資料證實(shí)DPV是鴨的一種免疫抑制性傳染?。?9]。DPV人工感染2月齡SPF鴨胚后,試驗(yàn)鴨中樞免疫器官胸腺、法氏囊表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞減少,組織間隙增大;感染后48-96 h,中樞免疫器官的淋巴細(xì)胞極度減少,網(wǎng)狀細(xì)胞增生,組織器官結(jié)構(gòu)模糊不清,嚴(yán)重出血、充血[30]。由此造成感染鴨的免疫力低下,從而引發(fā)免疫抑制,造成多系統(tǒng)、多器官疾病,如各種繼發(fā)性細(xì)菌感染性疾病、敗血癥、病毒血癥等。

    5 病毒與宿主的相互免疫

    機(jī)體的免疫編輯學(xué)說[31]認(rèn)為,在病原入侵和機(jī)體免疫的整個(gè)發(fā)展過程中,免疫系統(tǒng)和抗原之間發(fā)生相互免疫作用,免疫系統(tǒng)殺傷抗原的同時(shí),選擇出新的抗體,與原發(fā)抗體不同,這種新的抗體表現(xiàn)出較高的特異性,同樣免疫系統(tǒng)受抗原的編輯后影響其對(duì)抗原的殺傷能力。因此,研究免疫系統(tǒng)和抗原之間發(fā)生相互編輯的分子基礎(chǔ),對(duì)如何提高免疫系統(tǒng)的抗病毒效應(yīng)有重要的意義。

    6 展望

    DP是現(xiàn)在影響?zhàn)B鴨業(yè)的重大傳染病,就目前DP的防治情況看,國(guó)內(nèi)外仍沒有確實(shí)有效的藥物可以治療,所以,免疫預(yù)防仍然是防控DP的主要手段。目前,DPV的弱毒疫苗和滅活疫苗已經(jīng)上市,但是滅活疫苗的免疫效果不理想,而弱毒疫苗雖然取得較理想的免疫效果,但存在毒力返強(qiáng)和擴(kuò)毒、散毒問題,給DP防控留下了隱患。所以,開發(fā)新的疫苗成為有效防控DP的必經(jīng)之路,深入研究DPV的特性和免疫機(jī)制,對(duì)能否開發(fā)出高水平的新型疫苗起著至關(guān)重要的作用。綜上所述,開發(fā)一種新型的DP疫苗,應(yīng)該充分利用DPV的致病基因、免疫原性基因和特有的結(jié)構(gòu)蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白等,使用病毒載體(病毒進(jìn)入細(xì)胞后,首先要完成的是其自身基因的轉(zhuǎn)錄復(fù)制,再進(jìn)行其基因的表達(dá);然后是核酸分子與結(jié)構(gòu)蛋白的組裝,最終形成新的病毒子代。在病毒自身蛋白合成的過程中,插入病毒的某一特定的外源基因要同時(shí)被轉(zhuǎn)錄、表達(dá),形成相應(yīng)的蛋白分子)在最短的時(shí)間內(nèi),不僅激發(fā)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答,還要激發(fā)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答,才可能提供較為全面的免疫保護(hù)。相信在不久的未來,如果以如何激發(fā)鴨機(jī)體細(xì)胞免疫為主要研究方向,可能會(huì)研究出更有效的新型DP疫苗。

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