GlnR介導(dǎo)的代謝調(diào)控研究進展

江 湖， 田 健， 應(yīng) 碧， 伍寧豐?， 徐 波?

1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，南昌330045；

2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，北京100081

細菌代謝的有效性和適應(yīng)性是眾所周知的。它們進化出復(fù)雜且連鎖的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以應(yīng)對幾乎任何環(huán)境條件。為了能快速恰當?shù)刈鞒鲰憫?yīng)，細菌必須緊密監(jiān)測必要營養(yǎng)的可利用性，如碳源、氮源、磷、硫、微量元素、陽離子和陰離子。細菌通過監(jiān)測這些營養(yǎng)物質(zhì)的胞外濃度、胞內(nèi)累積，以及胞內(nèi)的流動，把這些信號傳遞到調(diào)控蛋白從而作出響應(yīng)［1］。

在很多革蘭氏陽性細菌的基因組中，都存在glnR基因，其編碼的蛋白GlnR是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。GlnR最初是在天藍鏈霉菌中被鑒定，它能使谷氨酰胺營養(yǎng)缺陷型回復(fù)成野生型［2］。研究證實，GlnR不僅在氮代謝的調(diào)控中扮演重要角色，也與磷酸代謝、抗生素合成等次級代謝途徑以及細菌毒性存在交叉調(diào)控［3～6］。 目前，已有大量針對GlnR轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的研究。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在很多菌屬中（如枯草芽胞桿菌、擬無枝酸桿菌、谷氨酸棒狀桿菌、天藍色鏈霉菌和恥垢分枝桿菌等），GlnR是氮代謝調(diào)控的一個全局性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，它對很多參與氮代謝的基因都有調(diào)控作用。氮代謝途徑的相關(guān)基因中，glnA、gdhA、glnPQ、amtB、nirBD、ureA、glnK 和 glnD 等均受GlnR 的調(diào)控［7～9］。

1 GlnR在不同細菌氮代謝調(diào)控中的作用

氮源是細菌生存最重要的元素之一，其中對氮源的有效吸收和同化是所有細菌生存最重要的能力。細菌進化出許多機制吸收各種各樣的氮源［9］。氮源的同化與吸收和無機氮源摻入細胞代謝物，是幾乎所有細菌的重要生理過程。不同氮源經(jīng)過同化，形成了細胞內(nèi)重要氮素來源的兩種氨基酸，即谷氨酰胺和谷氨酸。銨幾乎總是首選氮源，因為它能直接被同化成生物合成反應(yīng)的關(guān)鍵氮素，即谷氨酰胺和谷氨酸。細菌存在兩條銨同化途徑：谷氨酸脫氫酶（GDH）途徑和谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合成酶（GS/GOGAT）途徑［10，11］。 谷氨酰胺合成酶（GS）是氮代謝調(diào)控中的關(guān)鍵酶，其活力受到嚴格的調(diào)控，以保證谷氨酰胺的供應(yīng)不會受到細胞可利用氮源的影響。

有關(guān)細菌氮代謝調(diào)控研究最初是在腸桿菌（Enterobacteriaceae）中進行的，并以此作為原核生物氮源調(diào)控的模式菌株，目前對枯草芽胞桿菌和鏈霉菌屬的氮代謝調(diào)控研究也較為清晰。大部分微生物的氮代謝具有一個共同之處，即都是由一個全局性轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白介導(dǎo)，GlnR就是這樣一個全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白。GlnR屬于螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋OmpR家族蛋白。但在革蘭氏陰性腸桿菌中并不存在GlnR同源物，它們可以通過雙元件系統(tǒng)調(diào)控谷氨酰胺合成酶的翻譯，并通過可逆共價修飾調(diào)節(jié)谷氨酰胺合成酶的酶活［12］。同樣在革蘭氏陽性梭菌屬中也未發(fā)現(xiàn)GlnR，它們通過反義RNA調(diào)節(jié)谷氨酰胺合成酶的水平［12，13］。因此也顯示出微生物的氮代謝調(diào)節(jié)機制存在很大差異。

1.1 枯草芽胞桿菌中GlnR參與的氮代謝調(diào)控

枯草芽胞桿菌B.subtilis是低G+C含量革蘭氏陽性菌最突出的模式菌株，其中至少存在3個調(diào)控蛋白CodY、GlnR和TnrA調(diào)控氮代謝相關(guān)基因的表達［15］。GlnR和TnrA是MerR家族轉(zhuǎn)錄因子的主要成員，能識別相同的操作子序列5′?TGT?NAN7TNACA?3′［16～19］。

枯草芽胞桿菌沒有谷氨酸脫氫酶活性，只能通過谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合成酶途徑吸收銨?？莶菅堪麠U菌的谷氨酰胺合成酶活力受反饋調(diào)節(jié)（feed back inhibited GS， FBI?GS），glnR 直接位于glnA上游，是雙順反子glnRA操縱子的一部分，GlnR具有一個α-螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)域，形成二聚體并結(jié)合到glnRA操縱子的操作子glnRA01和glnRA02上，在氮源豐富時抑制 glnRA的轉(zhuǎn)錄［18，19］。 氮源貧乏時（如谷氨酸作為唯一氮源），glnRA操縱子的表達被TnrA抑制。氮源豐富時，GlnR也能抑制脲酶操縱子ureABC、tnrA基因以及幾個受TnrA調(diào)控的基因的表達。TnrA和GlnR不僅調(diào)控了自身的表達，還彼此相互調(diào)節(jié)［20］。GlnR通過與谷氨酰胺合成酶相互作用，間接感應(yīng)谷氨酰胺濃度，調(diào)節(jié)自身活性。盡管 GlnR和TnrA識別相同的序列，但GlnR不能調(diào)控某些TnrA的靶基因，這可能是由于GlnR對包含兩個GlnR/TnrA識別位點的 DNA有較高的親和性［11，19］。

1.2 放線菌中GlnR參與的氮代謝調(diào)控

放線菌能產(chǎn)生大量具有重要生物活性的次級代謝產(chǎn)物，是商業(yè)酶和藥物的生產(chǎn)菌。GlnR在放線菌氮代謝相關(guān)基因的表達調(diào)控中起著重要作用，包括天藍鏈霉菌（Streptomyces coelicolor）［21］、委內(nèi)瑞拉鏈霉菌（S.venezuelae）［22］、地中海擬無枝酸桿菌（Amycolatopsis mediterranei）［23］、恥垢分枝桿菌（ Mycobacterium smegmatis）［7，24］、 戈 登 氏 菌（Gordonia）［25］和人源肺結(jié)核桿菌（Mycobacterium tuberculosis）［26］。

天藍鏈霉菌是產(chǎn)抗生素鏈霉菌屬的模式菌，與枯草芽胞桿菌不同的是，它的 GlnR是屬于OmpR家族的轉(zhuǎn)錄因子，是細菌雙組分系統(tǒng)典型的應(yīng)答調(diào)控蛋白，不能調(diào)控自身的表達，據(jù)推測GlnR活性受一個未知的組氨酸激酶的磷酸化作用調(diào)節(jié)。氮源受限時，GlnR能激活天藍鏈霉菌銨同化相關(guān)基因的表達，包括分別編碼谷氨酰胺合成酶同工酶 GSⅠ?β和 GSⅡ的 glnA和 glnⅡ基因，以及編碼氨轉(zhuǎn)運蛋白的amtB基因。天藍鏈霉菌還存在一個與GlnR很相似的OmpR家族調(diào)控蛋白GlnRⅡ，與glnⅡ相鄰，GlnRⅡ能與glnⅡ上游序列相互作用。GlnRⅡ能識別大部分GlnR的靶標基因，glnR的缺失導(dǎo)致天藍鏈霉菌的谷氨酰胺營養(yǎng)缺陷型，而glnRⅡ缺失突變株仍能在不含谷氨酰胺的最低限度培養(yǎng)基生長，GlnRⅡ在氮代謝中的作用目前還不清楚［27，28］。 Tiffer等［29］通過生物信息學(xué)手段搜尋包含相同GlnR結(jié)合序列的啟動子，結(jié)合體外實驗，在天藍鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)10個新的GlnR靶標，包括硝酸、尿素等多種氮源同化的基因和一些功能未知的基因。有趣的是，GlnR對其中一些靶標基因也有負調(diào)控作用，包括gdhA、ureA和其他一些功能未知的基因。最近，研究發(fā)現(xiàn)天藍鏈霉菌中的硝酸鹽還原酶編碼基因nasA及硝酸鹽同化相關(guān)基因nnar也受到GlnR的調(diào)控，但 GlnR識別序列與之前發(fā)現(xiàn)的稍有不同［27，30～32］。

分枝桿菌中，GlnR類似蛋白可以激活amt1基因、amtB?glnK?glnD 操縱子和 glnA 基因的表達，氮源受限時抑制亞硝酸鹽還原酶基因nirB的表達。

1.3 乳酸乳球菌中GlnR參與的氮代謝調(diào)控

乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）是低G+C含量革蘭氏陽性菌的模式菌株之一，由于具有多種氨基酸營養(yǎng)缺陷型［33］，關(guān)于其谷氨酰胺和谷氨酸代謝調(diào)控研究相對較少，因此對其氮代謝了解并不多。

Larsen等［34］通過構(gòu)建乳酸乳球菌glnR缺失突變株結(jié)合DNA微陣列的方法，在乳酸乳球菌中發(fā)現(xiàn)了10個GlnR靶標，其中包括3個直接靶標glnRA操縱子、推定的銨轉(zhuǎn)運及感應(yīng)操縱子amtB?glnK和谷氨酰胺/谷氨酸ABC轉(zhuǎn)運蛋白編碼基因glnPQ。乳酸乳球菌 glnR缺失突變株中 glnA、amtB?glnK操縱子的表達被高度抑制，amtB?glnK啟動子-35區(qū)上游的GlnR盒對GlnR介導(dǎo)的抑制作用極為重要。

在乳酸乳球菌中，GlnR和另外一個全局調(diào)控蛋白CodY在氮代謝調(diào)控中均起重要作用，在氮源豐富時CodY可能接管GlnR對amtB?glnK的調(diào)控。乳酸乳球菌的GlnR識別與枯草芽胞桿菌的GlnR/TnrA相同的轉(zhuǎn)錄操縱子序列，但二者只有一個共同的GlnR靶標，即glnRA操縱子，而乳酸乳球菌中受GlnR調(diào)控的glnPQ基因在枯草芽胞桿菌中受 TnrA 調(diào)控［7，18，19］。 因此，盡管乳酸乳球菌和枯草芽胞桿菌中的GlnR功能相似，但乳酸乳球菌的GlnR具有不同于枯草芽胞桿菌的氮代謝調(diào)控方式。

1.4 致病菌中GlnR參與的氮代謝調(diào)控

低G+C含量革蘭氏陽性致病菌肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）中，GlnR 識別并結(jié)合與枯草芽胞桿菌相同的保守的操縱子序列，調(diào)控glnRA和glnPQ?zwf操縱子及谷氨酸合成酶編碼基因gdhA的表達，GlnR的調(diào)控依賴于谷氨酰合成酶［33～36］。 Schreier等［5］通過回補金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的glnR到枯草芽胞桿菌glnR缺失突變株，發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌的GlnR與枯草芽胞桿菌GlnR有相似的功能，推測金黃色葡萄球菌中氮代謝基因同樣受到類似的GlnR介導(dǎo)的調(diào)控作用。

2 GlnR與細菌其他代謝途徑的交叉調(diào)控

GlnR不僅參與細菌的氮代謝調(diào)控，同時也與細菌的多種代謝途徑存在交叉調(diào)控。

2.1 與次級代謝的交叉調(diào)控

天藍鏈霉菌的雙組份系統(tǒng)AfsQ1/Q2是抗生素合成和形態(tài)分化的一個多效性調(diào)節(jié)子［4］。AfsQ1/Q2通過直接激活途徑特異性基因actⅡ?ORF4、redZ和 cdaR的表達，刺激放線菌紫素（actinorhodin，ACT）、十一烷基靈菌紅素（undecyl?prodigiosin，RED）和鈣依賴抗生素（calcium?de?pendent antibiotic，CDA）的合成。 AfsQ1/Q2 同時也是氮源同化的阻遏物，抑制GlnR靶標glnA、amtB和ureA的表達，并且可以與GlnR競爭結(jié)合glnA和nirB的啟動子，而GlnR也可以與actⅡ?ORF4、redZ和cdaR基因各自的啟動子結(jié)合，說明AfsQ1/Q2和 GlnR在氮代謝中存在交互調(diào)控作用。

Yu 等［23，37］發(fā)現(xiàn)地中海擬無枝酸桿菌在沒有硝酸鹽存在時，GlnR抑制利福霉素（rifamycin）的合成。將地中海擬無枝酸桿菌的glnR轉(zhuǎn)入親緣關(guān)系較近的天藍鏈霉菌，研究表明GlnR廣泛參與到宿主菌的次級代謝調(diào)控。因此，地中海擬無枝酸桿菌中，GlnR是氮代謝和相關(guān)抗生素合成的雙功能調(diào)控蛋白。

2.2 與磷代謝的交叉調(diào)控

PhoR/P是磷酸代謝的全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，磷酸受限時，PhoP可以直接抑制glnR及GlnR靶標基因 glnA、glnⅡ和 amtB的轉(zhuǎn)錄。PhoR/P介導(dǎo)的磷酸代謝調(diào)控和GlnR介導(dǎo)的氮代謝調(diào)控也存在交叉調(diào)控［3，38～40］，GlnR 的調(diào)控作用已經(jīng)超出初級氮代謝。

2.3 與其他代謝途徑的交叉調(diào)控

2.3.1 嘌呤降解途徑 氮源受限時，枯草芽胞桿菌可以啟動嘌呤降解途徑以獲得充足氮源，脲酶操縱子ureABC的激活保證嘌呤被徹底降解成銨［41］。 Jaclyn 等［42］首次發(fā)現(xiàn)在枯草芽胞桿菌中，脲酶操縱子的表達同時受到GlnR介導(dǎo)的調(diào)控和嘌呤轉(zhuǎn)運降解途徑酶的調(diào)控。在枯草芽胞桿菌中，GlnR的抑制作用還依賴于谷氨酰胺合成酶的反饋抑制作用，F(xiàn)BI?GS可以激活GlnR與DNA的結(jié)合并穩(wěn)定 GlnR?DNA 復(fù)合物［43］。

2.3.2 戊糖磷酸途徑 Kloosterman 等［35］發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性致病菌肺炎鏈球菌中，GlnR抑制戊糖磷酸途徑代謝酶Zwf編碼基因的表達。GlnR的調(diào)控作用依賴于GlnA，并且glnA和glnP缺失突變株對Detroit 562人類咽喉上皮細胞粘著性顯著降低，表明這些基因影響了肺炎鏈球菌在宿主中的定殖。這也間接證明GlnR在肺炎鏈球菌毒性發(fā)揮中扮演著重要角色。

2.3.3 耐酸性應(yīng)激效應(yīng) 鏈球菌突變株的一個主要毒性特征就是其具有耐酸性應(yīng)激效應(yīng)（acid tolerance response，ATR）。citB基因編碼的蛋白酶參與檸檬酸代謝途徑中催化丙酮酸轉(zhuǎn)化成α?酮戊二酸的反應(yīng)，α?酮戊二酸為谷氨酸和谷氨酰胺提供碳骨架。Chen等［44］發(fā)現(xiàn)中性pH條件下，citB的表達被GlnR抑制，酸性處理30min后，這種抑制作用更為明顯。酸性處理45min后，GlnR缺失突變株的存活率比野生型低10倍以上，回補后突變株的存活率恢復(fù)到和野生型一樣，表明鏈球菌突變株的最佳耐酸性應(yīng)激效應(yīng)需要GlnR。

3 展望

革蘭氏陰性腸桿菌中不存在GlnR，由雙組分系統(tǒng)調(diào)控谷氨胺合成酶的轉(zhuǎn)錄，并通過可逆共價修飾調(diào)節(jié)谷氨酰胺合成酶的活性。腸桿菌中氮代謝調(diào)控研究，為革蘭氏陽性細菌中GlnR介導(dǎo)的氮代謝調(diào)控研究作出重要的貢獻。高通量技術(shù)的應(yīng)用，如蛋白質(zhì)組技術(shù)、DNA芯片技術(shù)等，為理清全局調(diào)控網(wǎng)絡(luò)之間的復(fù)雜關(guān)系提供了有效手段。隨著更多細菌基因組測序的完成，結(jié)合強有力的生物信息學(xué)預(yù)測手段，越來越多的GlnR靶標被發(fā)現(xiàn)，其中不乏間接靶標，但是GlnR對這些靶標基因的間接調(diào)控作用有待于進一步的研究。天藍鏈霉菌中，新GlnR結(jié)合順式作用元件的發(fā)現(xiàn)［29］，也為搜尋GlnR靶標基因提供了新的思路。深入研究GlnR在其他代謝途徑中的作用，對進一步闡述GlnR參與次級代謝活性產(chǎn)物、細菌形態(tài)分化和細菌毒性等的調(diào)控具有重要的意義。此外，過去幾年，雖然幾個菌屬中GlnR的調(diào)控模式已經(jīng)研究得更加詳細，但調(diào)控GlnR活性的信號和機制目前還不是很清楚，亟須更深入的研究。

［1］Fisher S H， Sonenshein A L.Control of carbon and nitrogen metabolism in Bacillus subtilis［ J］.Ann.Rev.Microbiol.，1991， 45：107-135.

［2］Wray L J， Atkinson M， Fisher S.Identification and cloning of the glnR locus，which is required for transcription of the glnA gene in Streptomyces coelicolor A3（2） ［ J］.J.Bacteriol.，1991， 173（22）：7351-7360.

［3］Wang Y， Cen X F， Zhao G P， et al.Characterization of a new GlnR binding box in the promoter of amtB in Streptomyces coelicolor inferred a PhoP/GlnR competitive binding mechanism for transcriptional regulation of amtB［J］.J.Bacteriol.， 2012，194（19）：5237-5244.

［4］Wang R， Mast Y， Wang J， et al.Identification of two?component system AfsQ1/Q2 regulon and its cross?regulation with GlnR in Streptomyces coelicolor［ J］.Mol.Microbiol.，2013， 87（1）：30-48.

［5］Schreier H J， Caruso S M， Maier K C.Control of Bacillus subtilis glutamine synthetase expression by glnR from Staphylococcus aureus［J］.Curr.Microbiol.， 2000， 41（6）：425-429.

［6］Sola?Landa A， Rodríguez?García A， Amin R， et al..Competition between the GlnR and PhoP regulators for the glnA and amtB promoters in Streptomyces coelicolor［J］.Nucleic acids res.， 2013， 41（3）：1767-1782.

［7］Amon J， Br?u T， Grimrath A. Nitrogen control in Mycobacterium smegmatisnitrogen?dependentexpression of ammonium transport and assimilation proteins depends on the OmpR type regulator GlnR［J］.J.Bacteriol.， 2008， 190（21）：7108-7116.

［8］Arcondéguy T， Jack R， Merrick M.PⅡsignal transduction proteins， pivotal players in microbial nitrogen control［J］.Microbiol.Mol.Biol.Rev.， 2001， 65（1）：80-105.

［9］Merrick M J， Edwards R A.Nitrogen control in bacteria［J］.Microbiol.Rev.， 1995， 59： 604-622.

［10］Reitzer L， Schneider B L.Metabolic context and possible physiological themes of sigma（54）?dependent genes in Escherichia coli ［ J］.Microbiol.Mol.Biol.Rev.， 2001， 65（3）： 422-444.

［11］Magasanik B.Genetic controlofnitrogen assimilation in bacteria［J］.Ann.Rev.Genet.， 1982， 16： 135-168.

［12］Reitzer L J.Ammonia assimilation and the biosynthesis of glutamine， glutamate， aspartate， asparagine， L?alanine and D?alanine［A］.In： Neidhart F C， Curtiss R Ⅲ， Ingraham J L，et al..（Eds.） Escherichia coli and Salmonella： Cellular and Molecular Biology［M］.Washington DC： ASM Press， 1996，391-407.

［13］Fierro?Monti I P， Reid S J， Woods D R.Differential expression of a Clostridium acetobutylicum antisense RNA：implications for regulation of glutamine synthetase［J］.J.Bacteriol.， 1992，174（23）：7642-7647.

［14］Woods D R， Reid S J.Regulation of nitrogen metabolism，starch utilization and the beta?hbd?adh1 gene clusterin Clostridium acetobutylicum ［J］.FEMS Microbiol.Rev.， 1995，17（3）：299-306.

［15］Fisher S H.Regulation of nitrogen metabolism in Bacillus subtilis： vive la difference［ J］！ Mol.Microbiol.， 1999， 32（2）：223-232.

［16］Wray L J， Ferson A E， Rohrer K， et al..TnrA， a transcription factor acquired for global nitrogen regulation in Bacillus subtilis［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 1996， 93（17）： 8841-8845.

［17］Wray L J， Zalieckas J M， Ferson A E， et al..Mutational analysis of the TnrA?binding sites in the Bacillus subtilis nrgAB and gabP promoter regions［J］.J.Bacteriol.， 1998， 180（11）：2943-2949.

［18］Gutowski J C， Schreier H J.Interaction of the Bacillus subtilis glnRA repressor with operator and promoter sequences in vivo［J］.J.Bacteriol.， 1992， 174（3）： 671-681.

［19］Brown S W， Sonenshein A L.Autogenous regulation of the Bacillus subtilis glnRA operon ［J］.J Bacteriol.， 1996， 178（8）：2450-2454.

［20］Wray LJ， Ferson AE， Fisher SH.Expression of the Bacillus subtilis ureABC operon is controlled by multiple regulatory factors including CodY， GlnR， TnrA， and Spo0H［J］.J.Bacteriol.， 1997， 179（17）：5494-5501.

［21］Wray L J， Fisher S H.The Streptomyces coelicolor glnR gene encodes a protein similar to other bacterial response regulators［J］.Gene， 1993， 130（1）：145-150.

［22］Pullan S T， Chandra G， Merrick M， et al..Genome?wide analysis of the role of GlnR in Streptomyces venezuelae provides new insights into global nitrogen regulation in actinomycetes［J］.BMC Genomics.， 2011， 12，175.

［23］Yu H， Peng W T， Liu Y， et al.Identification and characterization ofglnA promoterand its corresponding transregulatory protein GlnR in the rifamycin SV producing actinomycete， AmycolatopsismediterraneiU32 ［J］.Acta Biochim.Biophys.Sin.， 2006， 38（12）：831-843.

［24］Jenkins V A，Barton G R，Robertson B D， et al..Genome wide analysis of the complete GlnR nitrogen?response regulon in Mycobacterium smegmatis［J］.BMC genomics.，2013，14：301.

［25］Indest K J，Hancock D E，Mohn W W， et al..Role of nitrogen limitation in transformation of RDX（hexahydro?1，3，5?trinitro?1，3， 5?triazine） by Gordonia sp.strain KTR9 ［J］.Appl.Environ.Microb.，2013，79（5）：1746-1750.

［26］Malm S， Tiffert Y， Micklinghoff J， et al..The roles of the nitrate reductase NarGHJI，the nitrite reductase NirBD and the response regulator GlnR in nitrate assimilation of Mycobacterium tuberculosis［J］.Microbiology， 2009， 155（Pt4）：1332-1339.

［27］Fink D， Weissschuh N， Reuther J， et al.Two transcriptional regulators GlnR and GlnRⅡare involved in regulation of nitrogen metabolism in Streptomyces coelicolor A3（2） ［J］.Mol.Microbiol.， 2002， 46（2）：331-347.

［28］Wang Y，Cen X F，Zhao G P， et al..Characterization of a new GlnR binding box in the promoter of amtB in Streptomyces coelicolor inferred a PhoP/GlnR competitive binding mechanism for transcriptional regulation of amtB［J］.J Bacteriol.， 2012，194（19）：5237-5244.

［29］Tiffer Y，Supra P，Wurm R， et al.The Streptomyces coelicolor GlnR regulon：identification of new GlnR targets and evidence for a centralrole ofGlnR in nitrogen metabolism in actinomycetes［J］.Mol.Microbiol.，2008， 67（4）：861-880.

［30］Wang J， Zhao G P.GlnR positively regulates nasA transcription in Streptomycescoelicolor ［ J］.Biochem.Biophys.Res.Commun.， 2009， 386（1）：77-81.

［31］Wang Y，Wang J Z，Shao Z H， et al..Three of four GlnR binding sites are essential for GlnR?mediated activation of transcription of the Amycolatopsis mediterranei nas operon［J］.J Bacteriol.，2013，195（11）：2595-2602.

［32］Amin R，Reuther J， Bera A， et al.A novel GlnR target gene，nnaR，is involved in nitrate/nitrite assimilation in Streptomyces coelicolor［J］.Microbiology，2012，158（Pt5）：1172-1182.

［33］Deguchi Y， Morishita T.Nutritional requirements in multiple auxotrophic lactic acid bacteria：genetic lesions affecting amino acid biosynthesis pathways in Lactococcus lactis，Enterococcus faecium and Pediococcus acidilactici［ J］.Biosci.Biotechnol.Biochem.， 1992， 56：913-918.

［34］Larsen R， Kloosterman T G， Kok J， et al..GlnR?mediated regulation of nitrogen metabolism in Lactococcus lactis［ J］.J.Bacteriol.， 2006， 188（13）：4978-4982.

［35］Kloosterman T G， Hendriksen W T， Bijlsma J J.Regulation of glutamine and glutamate metabolism by GlnR and GlnA in Streptococcus pneumonia［J］.J.Biol.Chem.， 2006， 281（35）：25091-25109.

［36］Hendriksen W T， Kloosterman T G， Bootsma H J， et al..Site?specific contributions of glutamine?dependent regulator GlnR and GlnR?regulated genes to virulence ofStreptococcus pneumonia［J］.Infect.Immun.， 2008， 76（3）：1230-1238.

［37］Yu H， Yao Y， Liu Y， et al.A complex role of Amycolatopsis mediterraneiGlnR in nitrogen metabolism and related antibiotics production［J］.Arch Microbiol.， 2007， 188（1）：89-96.

［38］Santos?Beneit F，Rodríguez?García A， Martín JF.Overlapping binding of PhoP and AfsR to the promoter region of glnR in Streptomyces coelicolor ［J］.Microbiol Res.，2012，167（9）：532-535.

［39］Martín J F，Liras P.Cascades and networks of regulatory genes that control antibiotic biosynthesis ［A］.In：Harris J R（Ed.）Subcell Biochem.［M］.New York： Springer?Verlag New York Inc，2012，64：115-138.

［40］Rodríguez?García A， Sola?Landa A， Apel K， et al..Phosphate control over nitrogen metabolism in Streptomyces coelicolor：direct and indirect negative control of glnR， glnA， glnⅡand amtB expression by the response regulator PhoP［J］.Nucleic Acids Res.， 2009， 37（10）： 3230-3242.

［41］Beier L， Nygaard P， Jarmer H， et al..Transcriptional analysis of the Bacillus subtilis PucR regulon and identification of a cis?acting sequence required for PucR?regulated expression of genes involved in purine catabolism［J］.J.Bacteriol.， 2002，184（12）：3232-3241.

［42］Brandenburg J L， Wray LV， Beier L， et al..Roles of PucR，GlnR，and TnrA in regulating expression of the Bacillus subtilis ure P3 Promoter［J］.J.Bacteriol.， 2002， 184（21）：6060-6064.

［43］Fisher S H， Wray L J.Bacillus subtilis glutamine synthetase regulates its own synthesis by acting as a chaperone to stabilize GlnR?DNA complexes［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 2007，105（3）：1014-1019.

［44］Chen P M， Chen Y Y， Chia J S， et al..Role of GlnR in acid?mediated repression of genes encoding proteins involved in glutamine and glutamate metabolism in Streptococcus mutans［J］.Appl.Environ.Microbiol.， 2010， 76（8）：2478-2486.