人參皂苷對胃癌術(shù)后化療患者血清VEGF的影響

謝曉東，朱永康

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，約占消化道腫瘤的62%，是世界范圍內(nèi)致死率居第二位的惡性腫瘤。在我國，胃癌發(fā)病率和死亡率均很高，2012年新發(fā)胃癌患者占全球胃癌二分之一多。由于胃癌早期癥狀不明顯，且對胃癌開展早期篩查的國家很少，大部分患者明確診斷時已為晚期或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，手術(shù)多無法實現(xiàn)根治性切除，手術(shù)后易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，患者的遠(yuǎn)期生存率低。眾多研究表明，血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用。人參皂苷具有多靶點抗腫瘤血管生成作用，具有選擇性地抑制腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移的作用。本研究納入胃癌術(shù)后化療加人參皂苷、單純化療患者以及門診淺表性胃炎患者，通過比較不同組別術(shù)前、術(shù)后血清VEGF的檢測值，評價人參皂苷對胃癌患者血清VEGF的影響，為進(jìn)一步提高胃癌綜合療效提供新的治療思路。

1 資料與方法

1.1 方法設(shè)計 選取2009年2月至2013年12月江蘇省中醫(yī)院收治的胃癌患者94例，其中男63例，女31例，平均年齡48.00歲。采取前瞻性研究方法，42例術(shù)后采用FOLFOX4方案化療，為對照組，以14天為1個周期；52例患者術(shù)后采用FOLFOX4化療+口服參一膠囊(主要成分為人參皂苷Rg3，吉林亞太制藥有限公司生產(chǎn)，批號20010103，具體用法：20 mg，每天2次，連續(xù)服用30d為1個療程)方案進(jìn)行治療，為實驗組?；颊咝g(shù)前均未接受化放療；術(shù)后病理組織學(xué)分型:高、中分化組(乳頭狀腺癌和管狀腺癌) 共38例, 低分化組(黏液腺癌、印戒細(xì)胞癌、低分化腺癌和未分化癌) 共56例。手術(shù)結(jié)束后對胃癌標(biāo)本進(jìn)行淋巴結(jié)解剖、取材、分站, 按照美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC) 公布的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(2002年, 第6版) 進(jìn)行術(shù)后病理分期。T分期: Tis 4例, T1 21例, T2 17例, T3 48例, T4 4例, N分期: N0 34例, N1 40例, N2 14例, N3 6例。另納入門診淺表性胃炎患者30例為正常組，平均年齡37.43歲。分別在術(shù)前、術(shù)后第1、3、6個月這4個時間點對正常組、對照組、實驗組的血清VEGF進(jìn)行檢測，比較不同組別在相同時間點血清VEGF濃度、同一組別在不同時間點的血清VEGF濃度，以及對照組和實驗組術(shù)后6個月腫瘤復(fù)發(fā)情況、復(fù)發(fā)患者與未復(fù)發(fā)患者血清VEGF濃度。通過病歷記錄、門診隨診以及電話等方式進(jìn)行隨訪，以進(jìn)行病情記錄和血液標(biāo)本采集。

1.2 主要實驗試劑和器材

采血管(BD Vacutainer，英國)、人VEGF ELISA 檢測試劑盒(R&D，美國)、離心機(BECKMAN，美國)、恒溫?fù)u床(江蘇太倉科教儀器廠)、移液器(Eppendorf，德國)酶標(biāo)儀(BIORAD，德國)。

1.3 標(biāo)本的采集、處理與檢測

實驗組、對照組患者于入院次日清晨空腹、正常組患者隨機清晨空腹抽取外周靜脈血10 ml，室溫放置30～60 min后3 000 r/min離心10 min，抽取上層血清放至2 ml Eppendort管中，于-80 ℃冰箱保存待測。采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行檢測。

1.4 隨訪方法

所有病例均進(jìn)行了隨訪，在術(shù)前、術(shù)后1、3、6個月分別進(jìn)行標(biāo)本采集和病情記錄，以病例記錄、門診、電話等方式進(jìn)行。通過腫瘤標(biāo)記物、CT、胃鏡檢查確診復(fù)發(fā)病例。

1.5 病例的脫落與處理

當(dāng)受試者脫落后，可以采取預(yù)約家訪、電話、郵件等各種方式與受試者取得聯(lián)系，詢問理由，記錄末次服藥的時間，完成現(xiàn)有的評估項目。因藥物不良反應(yīng)或治療無效而退出試驗的病例，根據(jù)受試者具體病情，按照診療規(guī)范選擇治療方案。凡是入選的患者，無論是否脫落，均需記錄和保留病例實驗資料。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

使用t檢驗或非參數(shù)檢驗對不同組別和各組不同時間點的血清VEGF濃度進(jìn)行比較，采用χ2檢驗或確切概率法比較對照組及實驗組術(shù)后6個月腫瘤復(fù)發(fā)情況。使用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行分析。采取α=0.05的雙側(cè)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 縱向比較——各組不同時間點VEGF濃度比較(表1) 對照組VEGF濃度均高于正常組(P<0.05)。術(shù)前、術(shù)后1個月、術(shù)后3個月：實驗組血清VEGF濃度均高于正常組(P<0.05)；術(shù)后6個月：實驗組血清VEGF濃度與正常組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)前、術(shù)后1個月、術(shù)后3個月：實驗組與對照組的血清VEGF濃度未見顯著差異，但實驗組血清VEGF濃度較對照組下降的更為明顯；術(shù)后6個月：實驗組血清VEGF濃度顯著低于對照組(P<0.05)。

表1 不同時間點在各組間的VEGF比較

2.2 橫向比較——不同組別VEGF濃度比較(表2) 正常組：在各時間點均無顯著差異；對照組：術(shù)后1個月較術(shù)前顯著下降(P<0.01)，術(shù)后3個月較術(shù)后1個月有進(jìn)一步下降趨勢，但差異不顯著(P>0.05)，而術(shù)后6個月較術(shù)后3個月則有輕度升高趨勢，但未見顯著差異(P>0.05)；實驗組：術(shù)后1個月較術(shù)前顯著下降(P<0.01)，術(shù)后3個月較術(shù)后1個月進(jìn)一步下降(P<0.05)，術(shù)后6個月較術(shù)后3個月又進(jìn)一步下降(P<0.05)，且基本降至正常人群水平，與同期正常組無顯著差異(P>0.05)。

表2 各組在不同時間點的VEGF比較

2.3 復(fù)發(fā)情況比較 對照組術(shù)后6個月復(fù)發(fā)6例，復(fù)發(fā)率14.29%，實驗組術(shù)后6個月復(fù)發(fā)3例，復(fù)發(fā)率5.77%，實驗組復(fù)發(fā)率顯著低于對照組(P<0.05)。對照組及實驗組所有復(fù)發(fā)患者術(shù)后6個月的血清VEGF濃度均值為(363.14±149.48 pg/ml)，而所有未復(fù)發(fā)患者的血清VEGF濃度均值為(138.47±84.92 pg/ml)，復(fù)發(fā)患者顯著高于未復(fù)發(fā)患者(P<0.01)。各組在不同時間點VEGF變化趨勢圖見圖1。

圖1 各組在不同時間點VEGF變化趨勢圖

3 討論

胃癌是人類常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)一直居高不下。盡管全球各國都對胃癌的研究投入巨大的人力和物力，胃癌仍然是第二大腫瘤相關(guān)死亡病因，其死亡率僅次于肺癌、肝癌。我國是胃癌高發(fā)病率、高致死率的國家，全球每年新發(fā)病例近百萬，其中50%以上在中國[1]，全球因胃癌死亡80萬人中僅中國就占35%[2-3]?，F(xiàn)有的研究表明VEGF是目前已知的作用最強、特異性最高的血管生成調(diào)控因子[4]，腫瘤組織及患者血清中VEGF的表達(dá)對判斷腫瘤生物學(xué)行為、病情進(jìn)展、治療效果及術(shù)后生存期等方面具有重要價值。在多種惡性腫瘤的相關(guān)研究中，如肝癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等均發(fā)現(xiàn)VEGF 的高表達(dá)與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及浸潤有關(guān)[5-6]。胃癌患者血清VEGF 水平也同樣升高，這在中晚期胃癌中表現(xiàn)尤為明顯。故由此認(rèn)為VEGF參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移，并與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7-8]。

在本研究中證實了胃癌患者血清內(nèi)VEGF濃度顯著高于非胃癌患者，提示檢測胃癌患者血清VEGF濃度可作為診斷指標(biāo)之一。而術(shù)后患者血清VEGF濃度較術(shù)前顯著下降，并且隨化療的進(jìn)行，血清VEGF濃度進(jìn)一步下降，而術(shù)后復(fù)發(fā)患者的血清VEGF濃度則顯著高于未復(fù)發(fā)患者。這些均提示血清VEGF濃度可以作為胃癌診斷、療效評估、預(yù)后及復(fù)發(fā)情況評價的最有力的指標(biāo)之一。

內(nèi)皮抑素是目前活性最強的血管生成抑制劑，人參皂苷Rg3是在內(nèi)皮抑素N 端添加了9個獨特氨基酸序列，其藥效及穩(wěn)定性均得到明顯提高，可抑制腦部腫瘤患者血清可溶性VEGF 的表達(dá)水平。其主要機制是通過抑制腫瘤的血管形成, 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，具有多靶點抗腫瘤血管生成作用，從而具有抗腫瘤作用[9]。有研究發(fā)現(xiàn)，采用聯(lián)合口服人參皂苷Rg3治療方案能明顯降低淺表性膀胱癌和晚期大腸癌患者的VEGF水平[10-11]。另有實驗發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3能明顯抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，如肝癌[12]、乳腺癌[13]、肺癌[14]、膀胱癌[15]、卵巢癌[16]等，人參皂苷Rg3通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡在抑制腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移起著重要作用[17]。但人參皂苷Rg3在胃癌治療方面的研究鮮見報道。本研究中實驗組患者術(shù)后血清VEGF濃度進(jìn)行性下降，程度較對照組更為明顯，術(shù)后6個月復(fù)發(fā)率顯著低于對照組，提示人參皂苷Rg3能夠通過抑制腫瘤的血管形成, 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制胃癌轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)。

綜上所述, 人參皂苷Rg3可明顯降低胃癌患者術(shù)后血清VEGF濃度，抑制胃癌細(xì)胞的生長, 并呈濃度、時間依賴關(guān)系,并降低胃癌術(shù)后患者的復(fù)發(fā)率，有助于提高胃癌化療的療效。人參皂苷Rg3 是防治胃癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的可行性途徑之一。通過分析人參皂苷Rg3的生物活性，研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它具有多靶點、高活性的特性[10-17], 因此進(jìn)一步研究拓寬其抗腫瘤譜, 采取單藥、聯(lián)合用藥的方法預(yù)防和治療腫瘤將會有廣闊的前景。

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