基于金/石墨烯/C60納米復(fù)合材料為基質(zhì)構(gòu)建ECL傳感器用于“signaloff”模式中Pb2+的檢測

鄧 煒，余燕清，徐 暢，祁 樂，茍?zhí)壹?，?明*

（1.重慶市三峽庫區(qū)農(nóng)業(yè)面源污染控制工程技術(shù)研究中心，西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，重慶400715)

(2.重慶市建設(shè)用地事務(wù)中心，重慶400015)

(3.重慶市納米材料及傳感技術(shù)工程實驗室，西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶400715)

(4.重慶市煙草專賣局，重慶400023）

基于金/石墨烯/C60納米復(fù)合材料為基質(zhì)構(gòu)建ECL傳感器用于“signaloff”模式中Pb2+的檢測

鄧 煒1,2，余燕清3，徐 暢4，祁 樂1，茍?zhí)壹?，高 明1*

（1.重慶市三峽庫區(qū)農(nóng)業(yè)面源污染控制工程技術(shù)研究中心，西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，重慶400715)

(2.重慶市建設(shè)用地事務(wù)中心，重慶400015)

(3.重慶市納米材料及傳感技術(shù)工程實驗室，西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶400715)

(4.重慶市煙草專賣局，重慶400023）

該實驗通過將分子內(nèi)自增強的電致化學(xué)發(fā)光（ECL）釕復(fù)合物分子(PAMAM-Ru)直接標(biāo)記到8-17 DNAzyme底物鏈上，利用PAMAM-Ru分子內(nèi)的相互作用及電子的快速傳遞，極大地提高了ECL試劑的發(fā)光效率及穩(wěn)定性。另一方面，制備了納米金功能化的石墨烯和C60的復(fù)合物（Au@rGO-C60），由于該納米復(fù)合材料自身的比表面積較大，能夠固載大量的8-17 DNAzyme酶鏈，使其與底物鏈結(jié)合形成Pb2+特異剪切位點；同時由于Au@rGO-C60納米復(fù)合材料自身具有促進電子傳遞的作用，以其作為固載基質(zhì)將實現(xiàn)信號的進一步放大。另外，S2O82-作為分子間共反應(yīng)試劑與PAMAM-Ru分子內(nèi)自增強作用相結(jié)合實現(xiàn)ECL信號的雙重放大，獲得較強的初始信號。當(dāng)Pb2+存在時，能夠識別特異性的剪切位點，從而使結(jié)合到電極表面的PAMAM-Ru離開電極，導(dǎo)致ECL信號顯著降低，因此構(gòu)建了“signaloff”型ECL鉛離子傳感器。其檢測范圍為1.0×10-15mol/L到1.0×10-8mol/L，檢測限為3.34×10-16mol/L。

8-17DNAzyme；“signaloff”；PAMAM-Ru；分子間共反應(yīng)試劑；Au@rGO-C60納米復(fù)合材料

0 引言

隨著指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術(shù)（SELEX）不斷發(fā)展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種脫氧核酶（DNAzyme），這些DNAzyme表現(xiàn)出了多種催化反應(yīng)功能，且具有片段短，反應(yīng)迅速，穩(wěn)定性好，成本低且易于合成等特點而被廣泛應(yīng)用于金屬離子分析檢測中[1-2]。在所發(fā)現(xiàn)的這些脫氧核酶中，其中一類脫氧核酶能夠切割RNA，或者說能夠催化一些RNA固定位置的切割。8-17DNAzyme（8-17DNAzyme）便是其中一種，其是根據(jù)在1014個隨機序列體外篩選時第8輪循環(huán)的第17個克隆而得名而來[3]。在Pb2+出現(xiàn)時，8-17DNAzyme發(fā)生自催化切割反應(yīng)，底物斷裂為兩段并與酶鏈分離，從而可以設(shè)計基于8-17 DNAzyme的Pb2+分析新方法。

碳納米材料近些年來開始被廣泛地應(yīng)用到電致化學(xué)發(fā)光傳感器領(lǐng)域，例如一維碳納米材料碳納米管，二維碳納米材料石墨烯等[4-5]。還原氧化石墨烯 （rGO）是新型二維蜂窩狀的碳納米材料，它具有較高比表面積和很多含氧基團，可以為納米顆粒的負(fù)載提供活性位點[6]。金納米顆粒/還原氧化石墨烯納米片（Au/rGO）復(fù)合材料通常情況下都是通過原位還原HAuCl4到rGO納米片表面得到的，由于其大的比表面積展現(xiàn)出了高效的催化活性和大的固載容量[7]。C60作為一種新型碳納米材料由于其特殊的零維結(jié)構(gòu)和非定域化的π電子自從被發(fā)現(xiàn)開始就得到了廣泛關(guān)注[8-9]，它可以作為一種新型、高效的傳感界面用于生物分子電致化學(xué)發(fā)光傳感器的構(gòu)建。C60納米顆粒有大的比表面積，可以有效增加其他納米材料的固載量，從而有效提高傳感器靈敏度。

實驗中，基于分子內(nèi)/分子間雙重共反應(yīng)試劑信號放大策略，構(gòu)建了ECL傳感器用于Pb2+檢測。首先，利用共價交聯(lián)作用將樹枝狀共反應(yīng)試劑分子（PAMAM）與羧基化聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)32+結(jié)合，得到分子內(nèi)自增強ECL分子PAMAM-Ru。PAMAM-Ru作為發(fā)光物質(zhì)，通過分子內(nèi)的相互作用及快速電子傳遞，極大地提高了Ru(bpy)32+的發(fā)光效率及穩(wěn)定性。另一方面，以還原的氧化石墨烯和C60納米顆粒作為固載基質(zhì)，并進一步吸附金納米顆粒，可以得到納米金顆粒修飾的復(fù)合納米材料（Au@rGO-C60）?；贏u@rGO-C60較大的比表面積可以固載更多8-17 DNAzyme，并且其自身具有促進電子傳遞作用，利用Au@rGOC60作為固載基質(zhì)實現(xiàn)了信號的進一步放大。另外，S2O82-可以增強PAMAM-Ru的信號，利用S2O82-作為分子間共反應(yīng)試劑，與PAMAM分子內(nèi)自增強作用相結(jié)合實現(xiàn)信號的雙重放大。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

富勒?。–60）和氧化石墨烯（GO）購于北京百靈威生物科技有限公司；羧基改性的聚酰胺-胺型樹枝狀分子（PAMAM-COOH）、牛血清白蛋白（BSA,96-99%）、肼、氨水、過硫酸鉀、鐵氰化鉀（K3[Fe(CN)6]）、氯金酸（HAuCl4）和聚乙烯吡咯烷酮 （PVP，MW=40000）均采購自美國Sigma-Aldrich公司；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）從上海國藥集團有限公司購買；氨基聯(lián)吡啶釕（Ru-NH2）購于蘇州鈉凱科技有限公司。所用其它化學(xué)試劑均為分析純并且應(yīng)用時未經(jīng)過進一步純化，實驗用水為去離子水。磷酸鹽緩沖溶液（PBS，pH7.4，0.1 mol/L）用0.10 mol/L Na2HPO4, 0.10mol/LKH2PO4和0.1mol/LKCl制備。50mol/L Tris-HCl緩沖溶液 （pH7.4）用于適體溶液的配制；實驗所需的土壤樣品的預(yù)處理方法為Tessier連續(xù)提取法。

DNA單鏈訂購與大連寶生物有限公司，對應(yīng)

序列為：

Pb2+-DNAzyme的底物鏈(17-DS)：

使用MPI-A型電致化學(xué)發(fā)光分析儀 （西安瑞邁電子科學(xué)技術(shù)有限公司，中國）進行ECL檢測；循環(huán)伏安表征用的是CHI610A型電化學(xué)工作站（上海辰華儀器公司，中國）。檢測過程中使用三電極體系，即用被修飾的玻碳電極（GCE,Φ=4 mm）為工作電極，鉑電極作為對電極，Ag/AgCl（飽和KCl）電極為參比電極。利用掃描電子顯微鏡（SEM，S-4800，日本Hitachi Instrument公司）對不同納米復(fù)合材料的形貌進行表征。MP230酸度計（瑞士Metter Toledo公司）用于實驗中的pH調(diào)節(jié)，稱量用AB204-S電子天平 （瑞士Metter Toledo公司）。BRANSONIC200超聲清洗儀（德國BRANSON ULTRASCHALL公司）和TGL-20M高速臺式冷凍離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）用于實驗材料的溶解、離心和洗滌等。

1.2 ECL信號分子標(biāo)記的Pb2+-DNAzyme底物鏈(PAM AM-Ru-17-DS)的制備

首先，在2mLRu-NH2（1.25mg/mL）溶液中依次加入100μL PAMAM-COOH、5mg EDC和1.2mg NHS，并于4℃下攪拌約8 h。在EDC/NHS的輔助作用下，PAMAM上的-COOH被活化，再通過酰胺化反應(yīng)與Ru-NH2交聯(lián)形成酰胺鍵，制得終端帶氨基的產(chǎn)物PAMAM-Ru。然后，將250 μL羧基修飾的Pb2+-DNAzyme的底物鏈（10 μmol/L，17-DS）加入500μL上述PAMAM-Ru溶液中，在4℃下攪拌過夜；因而，進一步通過酰胺鍵將該PAMAM-Ru與Pb2+-DNAzyme的酶鏈交聯(lián)來獲得ECL信號分子標(biāo)記的Pb2+-DNAzyme底物鏈 （PAMAM-Ru-17-DS）。將得到的PAMAM-Ru-17-DS復(fù)合物離心洗滌去除多余的試劑，再分散到1mL磷酸鹽緩沖溶液（pH7.4）中并置于4℃冰箱備用。

1.3 Au@rGO-C60復(fù)合納米材料的制備

取1mg氧化石墨烯（GO）加入到2mLC60納米溶膠中（2mg/mL），超聲30min使二者充分混勻，接下來，將40mg PVP溶解到上述溶液并在室溫下攪拌12 h，通過π-π堆積作用可以得到rGO-C60納米復(fù)合物，離心洗滌，分散于2mL磷酸鹽緩沖溶液（pH7.4）中。緊接著，在攪拌的情況下，3.5μL肼和200μL氨水被依次加入上述溶液中并在95℃下加熱1 h，然后，離心洗滌，將所得的產(chǎn)物溶于1.5mL磷酸鹽緩沖溶液（pH7.4）中。再次，向上述制得的溶液中加入10mg PVP和1.5mL的抗壞血酸溶液（AA，0.2mol/L），攪拌并加熱，當(dāng)溫度達到90℃后，逐滴滴入300μL HAuCl4（0.1mol/L）溶液，將溫度保持在90℃下攪拌3 h。最后，將制備好的Au@rGO-C60復(fù)合納米材料離心洗滌后溶于1 mL磷酸鹽緩沖溶液（pH7.4）并儲于冰箱備用。

1.4 鉛離子傳感器的制備

在修飾前，將玻碳電極（GCE，Ф=4mm）分別用0.3，0.05μm的三氧化二鋁（Al2O3）粉在麂皮上打磨、拋光，再用去離子水洗凈并依次用乙醇和去離子水超聲洗凈，清洗后的電極置于室溫下自然晾干備用。

該鉛離子傳感器的制備過程如圖1所示：首先，在預(yù)處理的GCE表面滴涂10μL分散好的Au@rGO-C60納米復(fù)合物，待其自然晾干成膜。接下來，將15μL巰基標(biāo)記的Pb2+-DNAzyme的酶鏈（5μmol/L，17-E）滴于上述修飾電極表面于4℃下孵育過夜，利用Au-S鍵使Pb2+-DNAzyme的酶鏈連接在電極表面。為了封閉電極上的非特異性吸附位點，15μLBSA（1%）被滴在電極表面并于室溫下反應(yīng)40min。然后，取15μL制備好的PAMAM-Ru標(biāo)記的Pb2+-DNAzyme的底物鏈（PAMAM-Ru-7-DS）溶液滴加到修飾好的電極表面，在室溫下反應(yīng)2 h以形成Pb2+特異性識別性的剪切位點。最后，將所得到的修飾電極置于含有不同濃度Pb2+的溶液中，在37℃下孵育70 min，至此，鉛離子傳感器制備成功。傳感器構(gòu)建過程中的每一步修飾后都用磷酸鹽緩沖溶液（pH7.4）洗滌。

1.5 電極的測試過程和信號響應(yīng)原理

圖1 ECL傳感器制備過程的原理圖Fig．1 Schematic diagram ofpreparation of the ECLbiosensor

實驗測量電致化學(xué)發(fā)光信號采用三電極體系：修飾的玻碳電極、Ag/AgCl（飽和KCl）電極以及Pt電極分別作為工作電極、參比電極和對電極。將修飾好的電極置于3mL 0.1mol/L K2S2O8的PBS（pH=7．4）測試底液中，光電倍增管高壓設(shè)置為800 V，電壓掃描范圍為-1．6 V～0 V。在沒有目標(biāo)物Pb2+存在的情況下，ECL信號分子（PAMAM-Ru）通過標(biāo)記到Pb2+-DNAzyme底物鏈上接近于電極表面，因而產(chǎn)生較高的ECL初始信號；然而，當(dāng)目標(biāo)Pb2+存在的情況下，底物鏈將被剪斷，連接在底物鏈上的ECL信號分子也隨之脫離電極表面，分散到底液中，ECL檢測信號急劇下降，并且目標(biāo)物Pb2+的濃度越大，越多的底物鏈將被剪斷，那么結(jié)合到電極表面的PAMAM-Ru便會越少，ECL信號越低。因此，實現(xiàn)了“signal off”型Pb2+生物傳感器的檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 納米材料的表征

利用掃描電子顯微鏡 （SEM）對所制備的Au@rGO-C60進行表征。如圖2（A）和放大的圖像2（B）所示，可以觀察到金納米顆粒均勻的分散在rGO-C60的表面上，金納米顆粒粒徑在50±30 nm左右，從上述形貌表征證明了Au@C60-rGO納米顆粒的成功制備。

圖2 納米材料的SEM表征Fig．2 SEM characterization of(A)Au@rGO-C60and(B)theenlarge imageofAu@rGO-C60

2.2 電極構(gòu)建過程的CV表征

利用循環(huán)伏安（CV）法來表征傳感器的制備過程，及將每一步修飾后的電極置于含有0.1 mol/LKCl的[Fe(CN)6]3-/4-（5mmol/L）溶液中進行循環(huán)伏安測試。正如圖3所示，曲線a為裸玻碳電極，可以觀察到準(zhǔn)可逆氧化還原峰的存在。當(dāng)Au@rGO-C60固載到電極表面后，由于金納米顆粒加快了電子的傳遞，曲線電流值增強（曲線b）。接下來，在電極表面依次修飾17-E、BSA和PAMAM-Ru-17-DS后，電流值依次降低 （曲線c、d、e），原因在于17-E、BSA和PAMAM-Ru-17-DS均為生物大分子，本身不導(dǎo)電，因此在電極表面形成了一層阻礙層，不利于電子的傳遞。最后，1.0×10-10mol/L的Pb2+溶液被滴于修飾電極表面，電流值明顯增加 （曲線f）,那是由于Pb2+剪切Pb2+-DNAzyme的底物鏈后，剪切的底物鏈離開電極表面，使得電極表面的空間位阻降低，從而電活性探針[Fe(CN)6]3-/4-的氧化還原信號增強。基于以上電極修飾過程的氧化還原峰電流強度的變化可以很好地證明傳感器的成功制備。

圖3 傳感器修飾過程得的CV表征Fig.3 CV characterization ofsensorpreparation process（a.GCE，b.Au@rGO-C60/GCE，c.17-E/Au@rGO-C60/ GCE，d.BSA/17-E/Au@rGO-C60/GCE，e.PAMAM-Ru-17-DS/BSA/17-E/Au@rGO-C60/GCE，f.Pb2+/PAMAMRu-17-DS/BSA/17-E/Au@rGO-C60/GCE）

2.3 PAMAM-Ru-17-DS的ECL性能研究

通過ECL光譜對PAMAM-Ru-17-DS的電致化學(xué)發(fā)光性能進行了測試。在3mL 0.1mol/L K2S2O8的PBS（pH=7.4）溶液中，加入10μL PAMAM-Ru-17-DS的溶液，對其進行分光，如圖4所示：該溶液的ECL光譜在625 nm處出現(xiàn)最大峰。根據(jù)之前的文獻報道，O2/S2O82-體系中單線態(tài)氧（1(O2)2*）的發(fā)光在575 nm處[10]，因此可以確定放光體是激發(fā)態(tài)的Ru配合物[11]，而不是激發(fā)態(tài)的單線態(tài)氧（1(O2)2*）的發(fā)光。其本質(zhì)就是S2O82-作為共反應(yīng)試劑，促進PAMAM-Ru-17-DS的發(fā)光。

圖4 PAMAM-Ru-17-DS的ECL光譜圖Fig.4 ECL spectra of PAMAM-Ru-17-DS

2.4 Pb2+孵育時間的優(yōu)化

考慮到Pb2+的孵育時間會直接影響傳感器的性能，為此實驗用一定濃度的Pb2+（1.0×10-10mol/L）溶液對孵育的時間進行了優(yōu)化，如圖5所示。傳感器ECL強度先隨孵育時間的增加而增大，而當(dāng)孵育時間超過40min時，ECL強度又隨著隨孵育時間的增加反而減小，孵育時間達到70 min后ECL信號趨于平穩(wěn)。從傳感器性能和節(jié)約時間角度綜合考慮，實驗選擇70min作為該研究的最佳孵育時間。

圖5 Pb2+孵育時間的優(yōu)化Fig.5 The relationship between ECL intensity and the incubation time ofPb2+

2.5 傳感器對Pb2+的響應(yīng)性能

在最優(yōu)的實驗條件下，于0．1mol/LK2S2O8的檢測底液中，在-1．6～0 V電位下，對不同濃度的Pb2+所孵育的一系列傳感器進行了檢測。如圖6所示，傳感器的ECL信號隨著反應(yīng)的Pb2+濃度的增加而減小，其檢測范圍為1．0×10-15mol/L到 1．0×10-8mol/L（曲線a～h）， 校正曲線方程為I= -444．8 lg c-1833．6（其中I代表ECL強度，c代表Pb2+的濃度），相關(guān)系數(shù)為0．9922（如圖6插圖所示），檢測限（根據(jù)公式LOD=3SB/m計算，其中SB代表空白標(biāo)準(zhǔn)偏差，m代表校正曲線的斜率）為3．34×10-16mol/L。

圖6 該傳感器對不同濃度Pb2+的ECL響應(yīng)曲線和傳感器的校準(zhǔn)曲線Fig．6 ECLprofilesof thesensor in the presenceofdifferentconcentrationsofPb2+and the corresponding calibration curve for Pb2+detection．(a～h):1．0×10-8，1．0×10-9，1．0×10-10，1．0×10-11，1．0×10-12，1．0×10-13，1．0×10-14and 1．0×10-15mol/L

2.6 傳感器相關(guān)性能的研究

圖7 該傳感器的（A）選擇性和（B）穩(wěn)定性Fig．7 (A)The selectivity of the proposed ECL sensor．ion concentrations:Pb2+(1．0×10-8mol/L),other interfering ions(1．0×10-5mol/L)．(B)The stability of the proposed ECL sensor incubatedwith 1．0×10-7mol/LPb2+under consecutive cyclic potentialscans for7 cycles

為了探究傳感器的選擇性，選擇Na+、Mg2+、Cu2+、Ca2+、Cd2+、Ag+、Co2+作為干擾離子。對孵育有1．0×10-5mol/L各種干擾離子的傳感器和1．0×10-8mol/LPb2+的傳感器在最優(yōu)的實驗條件下分別進行了ECL對比。如圖7（A），相對于干擾離子而言，傳感器孵育有Pb2+的溶液時，其ECL響應(yīng)降低非常明顯，而干擾離子所孵育的傳感器的ECL降低不明顯。同時，考慮到干擾離子是目標(biāo)物Pb2+濃度的1000倍，所以該結(jié)果能夠證明制備的傳感器對Pb2+有良好的選擇性。另外，也對傳感器的穩(wěn)定性進行了探究，這是評價傳感器性能的另一項重要指標(biāo)。將孵育有1．0×10-8mol/LPb2+的傳感器進行連續(xù)掃描（7圈），如圖7（B）所示，出現(xiàn)了穩(wěn)定的ECL信號，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 （RSD）為1．8%，證明該傳感器有非常好的穩(wěn)定性。

2.7 實際土壤樣品中的Pb2+檢測

將制備的傳感器用于實際土壤樣品中Pb2+的檢測，并采用標(biāo)準(zhǔn)加入法對傳感器的回收率進行了測定。首先將用Tessier連續(xù)提取法所獲得的提取液稀釋10～100倍，然后加入不同濃度的Pb2+標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品，并用所制得的傳感器分別測定土壤樣品加標(biāo)前后的Pb2+含量。如表1所示，所得回收率介于91．0%～107%之間，說明傳感器具有較好的實際應(yīng)用價值。

表1 實際土壤樣品的加標(biāo)回收率實驗Tab.1 Determ ination of Pb2+added in soilextraction solution w ith the proposed biosensor

3 結(jié)論

在此工作中，通過設(shè)計特定的DNA序列，利用形成的Pb2+-DNAzyme的酶鏈構(gòu)建了Pb2+的特異性識別位點，實現(xiàn)了對Pb2+簡便、靈敏的ECL檢測。首先，通過合成新型分子內(nèi)自增強ECL分子PAMAM-Ru為信號探針，并結(jié)合溶液中的分子間共反應(yīng)試劑S2O82-，構(gòu)建了基于分子內(nèi)/分子間雙重共反應(yīng)試劑來實現(xiàn)信號放大的ECL傳感器，獲得了較強的初始信號，從而提高了“signal off”響應(yīng)模式的靈敏度。其次，以Au@C60-rGO復(fù)合納米材料作為固載基質(zhì)，其提供了大量活性位點可高效固載更多的Pb2+的酶鏈，實現(xiàn)了信號的進一步放大。根據(jù)“signaloff”響應(yīng)原則，強調(diào)傳感器的ECL信號隨著反應(yīng)的Pb2+濃度的增加而減小，其檢測范圍為1．0×10-15mol/L到1．0×10-8mol/L，檢測限為3．34×10-16mol/L。當(dāng)干擾離子Na+、Mg2+、Cu2+、Ca2+、Cd2+、Ag+、Co2+的濃度為Pb2+的1000倍時，該傳感器對Pb2+仍然展現(xiàn)出良好的響應(yīng)性能。

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A“signal-off”electrochem ilum inescence sensor for Pb2+based on the matrix of Au/Graphene/C60nanocom posite

DengWei1,2，Yu Yan-qing3，Xu Chang4，QiLe1，Gou Tao-ji1，GaoMing1*
（1.Center for AgriculturalNon-pointSource Pollution Control in the ThreeGorgesReservoir Area,Collegeof
Resourcesand Environment,SouthwestUniversity,Chongqing 400715,China)
(2.Chongqing Construction Land AffairsCenter,YuZhong District,Chongqing 400015,China)
(3.Chongqing Nanomaterialsand Sensing Technology Engineering Laboratory,College ofChemistry and Chemical Engineering,SouthwestUniversity,Chongqing400715,China)
(4.Chongqing TobaccoMonopoly Bureau,JiangBeiDistrict,Chongqing 400023,China)

In thiswork,the intramolecular self-enhanced ECLmolecule PAMAM-Ru was directly labeled with 8-17 DNAzyme substrate chain,which could greatly improve the luminous efficiency and stability of ECL reagents through intramolecular interactions and rapid electron transport.On the other hand,the Au nanoparticles functionalized graphene and C60complex(Au@rGO-C60)could actasmatrix to immobilize a large amountof 8-17 DNAzyme enzyme chain via its large specific surface area.The 8-17 DNAzyme enzyme chain could be further hybridized with the 8-17 DNAzyme substrate chain to form Pb2+-specific DNAzyme.Meanwhile,the Au@rGO-C60asmatrix could further amplify the ECL signal owing to its large specific surface area and desirable electrical conductivity.In addition,the double signalamplification was obtained by using S2O82-as intermolecular co-reactionreagentand PAMAM-Ru as intramolecular ECL luminophore,resulting in the generation of the strong initial signal. In presence of target Pb2+,the ECL signal significantly decreased comparingwith that in the absence of Pb2+,which indicated that the PAMAM-Ru labeled 8-17 DNAzyme substrate chain was irreversibly self-cleaved to release PAMAM-Ru from the electrode surface.The prepared“signal off”ECL biosenesorwas suuccesfully constructed, and the detection rangewas1.0×10-15mol/L to 1.0×10-8mol/L,the detection limitis3.34×10-16mol/L.

8-17 DNAzyme;“signaloff”;PAMAM-Ru;intermolecular co-reagents;Au@rGO-C60nanocomposite

“十二五”國家科技支撐計劃項目（2012BAD14B18）；中央高?；緲I(yè)務(wù)費專項（XDJK2015D020）

*通信聯(lián)系人，E-mail:gaoming@swu.edu.cn