昆蟲分類學(xué)主要技術(shù)手段的研究進展

南宮自艷，李 靜，白向賓

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，河北保定 071000)

昆蟲經(jīng)過約3 億8 千萬年的演化，已經(jīng)發(fā)展成地球上種類繁多、數(shù)量巨大、分布廣泛的動物類群之一(王心麗，2001)。全世界約有昆蟲1000多萬種，目前已發(fā)現(xiàn)、定名的昆蟲約100 多萬種。面對如此種類繁多的昆蟲家族，如何鑒定、辨別及進行明確的分類歸納顯得尤為重要，所以昆蟲分類學(xué)應(yīng)運而生。昆蟲分類學(xué)是研究昆蟲類別及其異同和歷史淵源關(guān)系，并據(jù)此建立分類系統(tǒng)，以總結(jié)昆蟲進化歷史，反映昆蟲家族自然系譜的一門基礎(chǔ)學(xué)科。傳統(tǒng)的分類學(xué)主要從綜合形態(tài)特征、生物學(xué)性狀及地理學(xué)信息等多種角度入手加以區(qū)分。然而面對昆蟲家族豐富的物種多樣性，這些傳統(tǒng)的分類方法遇到了諸多挑戰(zhàn)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，特別是20 世紀(jì)70年代以來，分子生物學(xué)迅猛發(fā)展，極大地促進了分子生物技術(shù)在昆蟲分類學(xué)上的應(yīng)用發(fā)展。本文將從傳統(tǒng)分類學(xué)方法和現(xiàn)代生物技術(shù)2個方面介紹我國昆蟲分類學(xué)的研究進展。

1 傳統(tǒng)的分類學(xué)方法

20 世紀(jì)中葉以來，我國生物分類學(xué)領(lǐng)域出現(xiàn)了一些新的理論學(xué)派。以陳世驤為代表的進化分類學(xué)派主要開展了物種概念論、特征分析標(biāo)準(zhǔn)以及進化論與分類學(xué)關(guān)系的研究(陳世驤，1987)。其物種隔離概念、生態(tài)特征、行為特征、分布特征、形態(tài)特征的分析與判別方法，目前仍然是國內(nèi)分類鑒別和區(qū)系研究的基本指導(dǎo)思想。

支序分類理論及方法誕生于20 世紀(jì)60年代，80年代初才在我國昆蟲分類研究中得到應(yīng)用。尹文英(1983)、朱弘復(fù)(1984)以及黃大衛(wèi)(1996)等關(guān)于支序分析方法及昆蟲的分支系統(tǒng)學(xué)研究都曾經(jīng)取得令人矚目的成就。董建臻等(1997)利用支序分類的原理和方法，系統(tǒng)研究了長蝽類Lygaeoid 亞科以上階元間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。江世宏等(2001)運用支序分類的原理和方法，利用計算機支序分類軟件進行數(shù)據(jù)處理，得出中國叩甲科Elateridae 昆蟲12 亞科的譜系圖。

數(shù)值分類學(xué)是借助數(shù)值根據(jù)其性狀狀態(tài)將分類單位歸類成類元，其核心就是將所有的分類性狀加以等權(quán)處理，再以性狀間的相似性來進行歸類。目前，昆蟲分類系統(tǒng)主要采用的形態(tài)學(xué)依據(jù)有:昆蟲的顏色和斑紋;翅的有無、性質(zhì)以及翅脈脈相;口器的類型及其變化;觸角類型及節(jié)數(shù);身體附屬物類型及其大小;馬氏管的數(shù)目;生殖器官及其他結(jié)構(gòu)部位的形態(tài)特征(查玉平等，2005)。利用數(shù)量性狀變異在區(qū)分某些形態(tài)差別不顯著的昆蟲時是非常有效的手段，方法如系統(tǒng)聚類、動態(tài)聚類、圖論法、主成分分析、因子分析、對應(yīng)分析和模糊聚類等(喻泓等，2004)。朱弘復(fù)等(1975)利用數(shù)值分類的方法進行蚜蟲的系統(tǒng)發(fā)育分類，開創(chuàng)了數(shù)值分類應(yīng)用于我國昆蟲分類的先河。劉友樵等(1982)和陳斌(1989)也都應(yīng)用數(shù)值分類分別對草蛾屬Ethmiids 與星天牛屬Anoplophora 進行分類研究。許升全等(1999)通過對蝗總科Acridoidea 昆蟲雌性下生殖板性狀的數(shù)值分類進行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究，這是高級分類階元數(shù)值分類的一個示例。南宮自艷等(2013)的研究發(fā)現(xiàn)馬尾松毛蟲、落葉松毛蟲、云南松毛蟲、思茅松毛蟲4種松毛蟲的8個表型性狀(蛹重、蛹長、雌雄蟲體重、雌雄蟲翅展和雌雄蟲體長)在4種松毛蟲之間差異極顯著;主成分分析表明蛹長、雌蟲體重和雌蟲翅展3個主分量構(gòu)成的信息量基本能代表這8個性狀的變異;系統(tǒng)聚類的結(jié)果為馬尾松毛蟲與落葉松毛蟲聚為第一分支，思茅松毛蟲和云南松毛蟲聚為第二分支。

2 現(xiàn)代生物技術(shù)在昆蟲分類學(xué)中的應(yīng)用

昆蟲生存環(huán)境的改變引起新陳代謝和機能的改變，從而導(dǎo)致形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，僅從表型上不能解決諸如形態(tài)極其相似的近緣種分類問題，對物種的進化關(guān)系也不能很好反映。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的興起及日臻成熟，各種分子標(biāo)記技術(shù)大量出現(xiàn)，不但能協(xié)助傳統(tǒng)分類學(xué)方法揭示相似姊妹種之間的差異，更有助于發(fā)現(xiàn)物種的起源和進化規(guī)律以及田間昆蟲抗性種群的遺傳變異(Parker et al.，1998;龔鵬等，2001;Yuan et al.，2012)。

2.1 同工酶和等位酶電泳技術(shù)

同功酶(isozyme)是具有相同或相似的催化功能而分子結(jié)構(gòu)不同的一類酶。自從Hunter 和Markert(1957)創(chuàng)立了同功酶酶譜(zymogram)技術(shù)以來，同功酶的研究得到了很大的發(fā)展。通過同功酶研究，可以由生化特征的差異來推測物種乃至屬、族、亞科等高級分類階元在蛋白水平上的異同，進而可推測其親緣關(guān)系和進化地位。韓雅莉等(1998，1999)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳對斑翅蝗科Oedipodidae 和網(wǎng)翅蝗科Arcypteridae部分種類進行酯酶同工酶研究，發(fā)現(xiàn)各自特有的酶帶在不同種類蝗蟲中差異顯著。鱗翅目害蟲多以幼蟲危害作物，但幼蟲形態(tài)分化不明顯，其近緣種、近似種更難區(qū)別，應(yīng)用同功酶測定技術(shù)則可以快速鑒定種類。例如閻一林等人(1987)的研究證實可以通過同功酶電泳分析快速區(qū)分棉鈴蟲 Helicoverpa armigera(Hübner)和 煙 青 蟲Helicoverpa assulta(Guenee)。羅梅浩等(1999)對云南、河南、北京地區(qū)來自不同體色、不同寄主的煙青蟲H.assulta(Guenee)種群進行酯酶同功酶酶譜分析，表明河南種群與北京種群之間異較小，與云南種群之間差異較大。不僅如此，同功酶研究還為昆蟲種類更高階元的合理劃分提供科學(xué)依據(jù)，甚至對一些階元的能否成立提出肯定或否定的結(jié)論。聶傳朋等(2005)分析研究了葉甲亞科Chtysomelinae 5種昆蟲的酯酶同工酶的酶譜，表明該法所得到的分類結(jié)果與形態(tài)學(xué)分類一致。李紹文等(1987)研究了膜翅目昆蟲7個總科、蜜蜂總科9個屬、蜜蜂屬6個種和西方蜜蜂4個種樣品的酯酶同工酶，發(fā)現(xiàn)總科間酶譜的差異大于總科內(nèi)各屬間的差異，屬內(nèi)各種間的酶帶差異不顯著，但每個種都有其特有的酶帶。

等位酶是由單個位點上等位基因編碼的同工酶，選取一批受單位點不同等位基因編碼的等位酶作為整個基因組的隨機樣本，可以比較客觀地度量生物遺傳變異的大小，并作為遺傳標(biāo)記研究其它相關(guān)問題(Gottlieb，1981;Soltis，1989;葛頌，1994)。由于等位酶譜帶同等位基因之間的明確關(guān)系，使其成為一種十分有效的遺傳標(biāo)記，是近年來檢測遺傳多樣性應(yīng)用最普遍的方法，在昆蟲系統(tǒng)發(fā)育學(xué)的研究中應(yīng)用廣泛(王仲仁，1996)。徐廣等人(2000)利用聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳檢測了棉鈴蟲H.armigera(Hübner)的13種等位酶，結(jié)果表明棉鈴蟲種群內(nèi)存在很高的遺傳多態(tài)性，種群間遺傳分化程度較小，種群間沒有基因交流的障礙，由此推測是遷飛阻礙了不同地理種群間的遺傳分化。南宮自艷等(2008)采用等位酶電泳技術(shù)研究了松毛蟲屬Dendrolimus 4種共9個地理種群的遺傳多樣性和遺傳分化，研究結(jié)果證實松毛蟲居群間存在較少的基因交流和較大的遺傳分化，并同時采用傳統(tǒng)的數(shù)值分類法對結(jié)果加以佐證(南宮自艷等，2013)。由此可見，傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)分類及數(shù)值分類與分子生物學(xué)結(jié)合進行昆蟲分類的研究，可以使各分類階元內(nèi)及不同階元間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系及遺傳分化得到更精確的區(qū)分，并為糾正傳統(tǒng)分類中的偏差提供了一個有效的方法。

2.2 比較線粒體基因組學(xué)

線粒體是一種幾乎存在于所有真核生物的細胞器，與能量代謝、凋亡、衰老以及疾病相關(guān)，是氧化磷酸化的場所(魏書軍等，2011)。動物線粒體基因組(mtDNA)具有基因組成穩(wěn)定、基因排列相對保守、普遍為母系遺傳、極少發(fā)生重組等許多共有特征(Wolstenholme，1992)，是目前研究種群遺傳變異分化、以及區(qū)別近緣種、種下分類單元鑒定中最常用的遺傳物質(zhì)之一(Wilson et al.，1985)。昆蟲作為地球上種類最為繁多、生物學(xué)習(xí)性最為復(fù)雜的生物，一直以來都是線粒體基因組研究的熱點類群(Boore，1999;Chen et al.，2011)。

常用的mtDNA 基因有細胞色素B(Cyt b)、細胞色素氧化酶I(COI)、細胞色素氧化酶II(COⅡ)、12SRNA、16SRNA、細胞核核糖體DNA轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)、NADH 脫氧酶亞基1(ND1)、NADH 脫氧酶亞基2(ND2)、NADH 脫氧酶亞基5(ND5)。相比其他基因片段來講，COI 相對保守并且容易被通用引物擴增出來，同時也有足夠的變異將不同物種區(qū)分開(Wang et al.，2012);線粒體12S 和16S 基因也被廣泛用于系統(tǒng)發(fā)育分析中，但這類基因本身存在大量的插入和缺失現(xiàn)象，使序列比對受限;COILND1 及ND5 均屬進化比較快的基因，適用于區(qū)分親緣關(guān)系較密切的種類。而Cyt b 基因是mtDNA 蛋白質(zhì)編碼基因中結(jié)構(gòu)和功能研究得最為清楚的基因之一，在昆蟲分類學(xué)及遺傳進化研究中的應(yīng)用也更為廣泛(張學(xué)衛(wèi)，2010)。Huang 等人(2000)應(yīng)用Cyt b 基因和16S rRNA 基因序列的聯(lián)合數(shù)據(jù)對北美蟋蟀屬Gryllus 11種13個種群的系統(tǒng)演化關(guān)系進行了分析，發(fā)現(xiàn)歐洲的Gryllus 屬與北美洲的Gryllus 屬間具有明顯的分枝，種間差異大于種內(nèi)差異。國內(nèi)學(xué)者應(yīng)用Cyt b 基因進行的研究工作也日益增多。任竹梅等(2002，2003)對蝗總科8 科10種昆蟲的Cyt b 基因部分序列進行測定分析，提出了8 科的親緣關(guān)系與傳統(tǒng)分類學(xué)不完全一致;同時對山稻蝗Oxya agavisa 及其相關(guān)物種Cyt b 基因序列進行遺傳關(guān)系研究。李愛玲等(2004)分析了我國野桑蠶Bombyx mandarina 的Cyt b 序列并與日本野桑蠶進行了比較分析，結(jié)果顯示中國野桑蠶B.mandarina與家蠶B.mori 品種序列的遺傳分化時間遠遠早于日本野桑蠶和家蠶品種相應(yīng)序列的分化時間，在分子水平上證實了家蠶起源于中國野桑蠶。王帥宇等(2005)發(fā)現(xiàn)Cyt b 基因可以作為露螽屬Phanerotera種間的分子遺傳標(biāo)記，研究結(jié)果表明鐮尾露螽Phanerotera falcate 與齒尾露螽Phanerotera myollecrca 是分化較晚的類群，其次是瘦露螽Phanerotera gracilis，黑角露螽 Phanerotera ngiroantennata 是分化較早的類群。

2.3 隨機擴增片段長度多態(tài)性(RAPD)

RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA，簡稱RAPD)原理是用長度為9-10 bp 的隨機核苷酸引物，對基因組的DNA 進行非定點PCR 擴增，不同物種的基因組中與引物相匹配的堿基序列的空間位置和數(shù)目都有可能不同，擴增產(chǎn)物的大小和數(shù)量也有可能不同，這些差異可以通過凝膠電泳顯示出來，從而進行遺傳多態(tài)性的分析(Williams，1990;Karama et al.，2008)。RAPD 具有技術(shù)簡單、檢測迅速、只需少量的DNA 樣品、成本較低等優(yōu)點。Pradeep 等(2005)利用RAPD方法研究了家蠶B.mori 長幼蟲期群體和短幼蟲期群體4 代幼蟲之間基因多態(tài)性差異，在這兩個不同的群體中表現(xiàn)出豐富的基因差異。張愛兵等人(2004)利用RAPD-DNA 指紋譜方法對中國松毛蟲屬Dendrolimus 8個種和亞種的親緣關(guān)系進行比較，結(jié)果表明馬尾松毛蟲Dendrolimus punetatus punetatus Walker 和德昌松毛蟲 D.punctatus tehchangensis Tsai et Liu 遺傳距離最近，與文山松毛蟲D.punctatus wenshanensis Tsai et Liu.、赤松毛蟲D.spectabilis Butler、落葉松毛蟲D.superans Butler、云南松毛蟲D.houi Lajonquiere 遺傳距離次之，與思茅松毛蟲D.kikuchii Matsumura 遺傳距離最遠。楊效文等(1999)用RAPD 技術(shù)研究了我國煙草上煙蚜Myzusper sicae Sulzer 的種群分化，數(shù)據(jù)顯示煙蚜的不同地理種群和不同體色之間DNA 均呈現(xiàn)出多態(tài)性，證實我國煙草上煙蚜的分化僅在種群水平上，并未達到亞種水平。唐樺(2002)結(jié)合RAPD 分子標(biāo)記和同工酶電泳兩種方法證明光肩星天牛Anoplophora glabripennis 和黃斑星天牛Anoplophora nobilis 應(yīng)統(tǒng)屬一個種，而在光肩星天牛這一種下可分為三個型:白斑型、黃斑型、黃白雜合型。

2.4 微衛(wèi)星DNA

微衛(wèi)星DNA，也稱為簡單序列重復(fù)(Simple Sequence Repeat，SSR)DNA，其核心結(jié)構(gòu)是由1-6個核苷酸為重復(fù)單位串聯(lián)組成的長達幾十個核苷酸的序列，微衛(wèi)星DNA 的兩側(cè)是相對保守和專一的單拷貝序列，利用側(cè)翼序列設(shè)計引物可以特異性擴增微衛(wèi)星位點，使微衛(wèi)星DNA 從基因組中被選擇性地擴增出來，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳對擴增帶進行多態(tài)性分析(Zhang，2004)。SSR標(biāo)記在真核生物基因組中數(shù)量多且分布均勻，具有高度的多態(tài)性和保守性，遵循孟德爾式遺傳規(guī)律和共顯性遺傳模式，是一種非常高效、準(zhǔn)確的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究技術(shù)(Huntley and Clark，2007;Behura et al.，2012)。張德興(2004)研究發(fā)現(xiàn)在鱗翅目粉蝶和蛾類昆蟲中基因組所存在的微衛(wèi)星序列具有近似或者完全相同的側(cè)翼序列，這一研究結(jié)論為鱗翅目昆蟲微衛(wèi)星豐富度較低提供了可能的解釋。吉亞杰等(2005)通過構(gòu)建基因組文庫的方法篩選了10個馬尾松毛蟲微衛(wèi)星多態(tài)性位點，但這10個位點不能完全應(yīng)用于松毛蟲屬其他種松毛蟲，再次說明了微衛(wèi)星標(biāo)記保守性和專一性強這一特點。Koshio 等(2002)通過對鱗翅目舞毒蛾Lymantria dispar L.3個微衛(wèi)星位點進行遺傳多態(tài)性分析，結(jié)果表明微衛(wèi)星標(biāo)記可以應(yīng)用于該物種種群親緣關(guān)系鑒定。沈利(2004)篩選得到家蠶22 對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星引物，研究發(fā)現(xiàn)家蠶品種可分為歐、日、中三大類，證明家蠶微衛(wèi)星標(biāo)記具有品種特異性，可以用作家蠶指紋圖譜分析的工具。

2.5 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析

單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(Single-strand conformational poly-morphism，SSCP)原理是變性后的單鏈DNA 在不含變性劑的中性聚丙烯酸凝膠電泳時，遷移率除與DNA 的長短有關(guān)外，更主要的是取決于DNA 單鏈所形成的構(gòu)象。這種構(gòu)象由DNA 單鏈堿基順序決定，其穩(wěn)定性靠內(nèi)部局部順序的相互作用來維持，相同長度的單鏈因其順序不同，甚至單個堿基的不同，所形成的構(gòu)象不同，導(dǎo)致遷移率的變化而出現(xiàn)泳動變位(劉美佳等，2011)。SSCP 方法靈敏性高，所以這一分析技術(shù)廣受關(guān)注(Malekmohammadia et al.，2012)。Hiss等(1994)應(yīng)用SSCP 分子標(biāo)記法對胡蜂Vespidae及其科內(nèi)的幾個近緣種昆蟲DNA 進行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)近緣種間的差異表現(xiàn)為單個核苷酸的替代，這種差異可以作為區(qū)別近緣種的依據(jù)。Coustaut 等(1995)利用SSCP 技術(shù)成功地區(qū)分黑腹果蠅Drosophila melanogaster 和地中海果蠅D.simulans，而這兩個近似種以前只能依靠雄外生殖器來鑒別。Sedlimair 等(2000)應(yīng)用SSCP 技術(shù)研究了步甲亞屬Orinocarabus 的進化關(guān)系。李石柱(2003)應(yīng)用SSCP 分析多斑按蚊復(fù)合組(Anopheles macu-lates complex)5個成員種的28S 編碼區(qū)第3 結(jié)構(gòu)域的單鏈構(gòu)象多態(tài)，結(jié)果表明該技術(shù)可以用于各蚊種的鑒別研究。

3 問題與展望

現(xiàn)在對于昆蟲的分類鑒定，形態(tài)學(xué)觀察仍是最主要的研究手段。隨著分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，新的研究技術(shù)對昆蟲形態(tài)學(xué)之外的其他特征進行分析，使研究方式由表及里，由宏觀轉(zhuǎn)向微觀，是對傳統(tǒng)昆蟲分類方法的一個補充與完善。同工酶電泳技術(shù)、核酸序列分析、RAPD 技術(shù)、SSR 技術(shù)、SSCP 等分子生物學(xué)技術(shù)在昆蟲分類研究中的應(yīng)用和有益探索，其準(zhǔn)確、客觀、靈敏的優(yōu)點尤為突出，驗證了以往的研究結(jié)論，彌補了傳統(tǒng)分類方法的不足，解決了傳統(tǒng)分類中所存在的學(xué)術(shù)疑難問題。但目前我國現(xiàn)代生物技術(shù)在昆蟲分類方面的應(yīng)用還處于起步階段，由于應(yīng)用時間不長，無論是試驗技術(shù)還是數(shù)據(jù)處理分析都還有待完善，適用范圍也有一定的限制?？傊ハx分類學(xué)是一門綜合性學(xué)科，在利用外部形態(tài)進行鑒定的基礎(chǔ)上，可以利用解剖學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)等多學(xué)科聯(lián)合，各取所長，提高效率，昆蟲分類學(xué)研究技術(shù)將會有長足的進步和發(fā)展。

References)

Boore JL.Animal mitochondrial genomes［J］.Nucleic Acids Research，1999，27(8):1767-1780.

Behura SK，Severson DW.Genome-wide comparative analysis of simple sequence coding repeats among 25 insect species［J］.Gene，2012，504(2):226-232.

Chen SX.The Evolution and Taxonomy(Second Edition)［M］.Beijing:Science Press，1987.［陳世驤.進化論與分類學(xué)(第二版)［M］.北京:科學(xué)出版社，1987］

Chen B.A preliminiary study on the numerical taxonomy of the genus Anoplophora(Cpleoptera:Cerambycidae)［J］.Acta Zootaxonomica Sinica，1989，14(1):96-103.［陳斌.星天牛屬的數(shù)值分類研究初探:鞘翅目:天牛科［J］.動物分類學(xué)報，1989，14(1):96-103］

Chen WJ，Bu Y，Carapelli A，et al.The mitochondrial genome of Sinentomon erythranum(Arthropoda:Hexapoda:Protura):an example of highly divergent evolution［J］.BMC Evolutionary Biology，2011，11(1):246.

Coustaut C，F(xiàn)french constant RH.Detection cyclodiene insecticide resistance-associated mutations by single-strand conformation polymorphism analysis［J］.Journal of Pesticide Science，1995，43(4):267-71.

Dong JZ，Zheng LY.A preliminary study on the phylogenetic relationships between the higher groups of Lygaeoid complex(Hemiptera:Hteroiptera)［J］.Acta Scicntiarum Naturalium Universitatis Nankaiensis，1997，30(2):48-55.［董建臻，鄭樂怡.長蝽類高級階元系統(tǒng)發(fā)育初探(半翅目)［J］.南開大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué))，1997，30(2):48-55］

Gottlieb LD.Electrophorelic evidence and plant populations［J］.Progress Phytochemist，1981，7:1-46.

Gong P，Yang XW，Tan SJ，et al.Molecular genetic markers and their application in entomology［J］.Entomological Knowledge，2001，38(2):86-91.［龔鵬，楊效文，譚聲江，等.分子遺傳標(biāo)記技術(shù)及其在昆蟲學(xué)科中的應(yīng)用［J］.昆蟲知識，2001，38(2):86-91］

Han YL，Tan ZJ，Zheng ZM.Studies on the EST isoenzyme from some species of the family Oedipodidae(Orthoptera:Acridoidea)［J］.Entomotaxonomia，1998，20(8):157-163.［韓雅莉，譚竹鈞，鄭哲民.斑翅蝗科部分種類的酯酶同工酶研究:(直翅目:蝗總科)［J］.昆蟲分類學(xué)報，1998，20(8):157-163］

Han YL，Tan ZJ，Zheng ZM.Studies on the EST isozyme in nine species of the family Arcypteridae(Orthoptera)［J］.Entomotaxonomia，1999，21(2):87-92.［韓雅莉，譚竹鈞，鄭哲民.網(wǎng)翅蝗科九種蝗蟲的酯酶同工酶研究［J］.昆蟲分類學(xué)報，1999，21(2):87-92］

Hiss RH，Norris DE，Dietrieh CH，et al.Molecular taxonomy using single strand conformation polymorphism(SSCP)analysis of mitoehondrial ribosomal DNA genes［J］.Insect Molecular Biology，1994，3:171-182.

Huang DW.Introduction of Cladistics［M］.Beijing:China Agricultural Press，1996.［黃大衛(wèi).支序系統(tǒng)學(xué)概論［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1996］

Huang Y，Orti G，Sutherlin M，et al.Phylogenetic relationships of north American field criekets inferred from mitoehondrial DNA data［J］.Moleular Phylogentics and Evolution，2000，l7(1):48-57.

Hunter RL，Markert CL.Histochemical demonstration of enzymes separated by zone electrophoresis in starch gels［J］.Science，1957，125:1294-1295.

Huntley MA，Clark AG.Evolutionary analysis of amino acid repeats across the genomes of 12 Drosophila species［J］.Molecular Biology and Evolution，2007，24:2598-2609

Jiang SH，Zhuo CL.Cladistic analysis of 12 subfamilies in Chinese Elateridae［J］.Journal of Huazhong Agricultural，2001，20(4):329-332.［江世宏，卓晨雷.中國叩甲科昆蟲12 亞科的支序分類研究［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2001，20(4):329-332］

Ji YJ，Hua YP，Liu YD.Ten polymorphic microsatellite markers developed in the mason pine moth Dedrolimus punctatus Walker(Lepidoptera:Lasiocampidae)［J］.Molecular Ecology Notes，2005，5:5911-5913.

Karama N，Guglielminob CR，Bertinc S，et al.RAPD analysis in the parasitoid wasp Psyttalia concolor reveals Mediterranean population structure and provides SCAR markers［J］.Biological Control，2008，47(1):22-27.

Koshio C，Tomishima M，Shimizu K，et al.Microsatellites in the gypsy moth，Lymantria dispar L.(Lepidoptera:Lymantriidae)［J］.Applied Entomology and Zoology，2002，37(2):309-312.

Li AL，Xu AY，Shen XJ，et al.Analysis of segment sequences and molecular evolution between Bombyx mori and Bombyx mandarina using mitochondrial Cyt b gene［J］.Acta Sericologica Sininca，2004，31(l):80-84.［李愛玲，徐安英，沈興家，等.家蠶、野桑蠶線粒體Cyt b 基因片段序列分析及分子進化研究［J］.蠶業(yè)科學(xué)，2004，31(l):80-84］

Li SZ.Molecular Identification and Phylogeny of Anopheles Maculatus Complex(Diptera:Culicidae)from China［D］.Shanxi Normal University，2003.［李石柱.我國多斑按蚊復(fù)合體的分子鑒別及系統(tǒng)學(xué)研究［D］.陜西師范大學(xué)，2003］

Li SW，Meng YP，Zhang ZB，et al.A comparative study of esterase isozymes in Hymenoptera［J］.Acta Entomologica Sinica，1987，30(3):266-269.［李紹文，孟玉萍，張宗炳，等.膜翅目昆蟲酯酶同工酶的比較研究［J］.昆蟲學(xué)報，1987，30(3):266-269］

Liu YQ，Xu KX.Numberical taxonomic method applied to palaearctic Ethmiids(Lepidoptera:Ethmiidae)［J］.Entomotaxonomia.1982，4(4):239-251.［劉友樵，徐克學(xué).古北區(qū)草蛾屬的數(shù)值分類研究(鱗翅目:草蛾科)［J］.昆蟲分類學(xué)報，1982，4(4):239-251］

Liu MJ，Cai P.The research progress of insect classification in molecular level［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2011，9(23):14146-14148.［劉美佳，蔡平.昆蟲分類在分子水平上的研究進展.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，9(23):14146-14148］

Luo MH，Guo XR，Yin XM.Studies on the esterase isozymes of Helicoverpa assulta(Guenee)with differences in geographic population，body colour，host［J］.Acta Agriculturae Universitatis Henanensis，1999，33:100-102.［羅梅浩，郭線茹，尹新明.不同地理種群、寄主、體色的煙青蟲酯酶同功酶研究［J］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1999，33:100-102］

Malekmohammadia M，Hejazib MJ，Mossadeghc MS，et al.Molecular diagnostic for detecting the acetylcholinesterase mutations in insecticide-resistant populations of Colorado potato beetle，Leptinotarsa decemlineata(Say)［J］.Pesticide Biochemistry and Physiology，2012，104(2):150-156.

NanGong ZY，Gao BJ，Liu JX，et al.Genetic diversity of geographical populations of four Dendrolimus species(Lepidoptera:Lasiocampidae)in China based on allozyme analysis［J］.Acta Entomologica Sinica，2008，51(4):417-423.［南宮自艷，高寶嘉，劉軍俠，等.四種松毛蟲不同地理種群遺傳多樣性的等位酶分析［J］.昆蟲學(xué)報，2008，51(4):417-423］

NanGong ZY，Yang J，Xu XP，et al.Morphological diversity of four Dendrolimus species in relation to environmental factors［J］.Chinese Journal of Ecology，2013，32(3):627-633.［南宮自艷，楊君，徐秀平，等.四種松毛蟲表型性狀多樣性與環(huán)境因子的關(guān)系［J］.生態(tài)學(xué)雜志，2013，32(3):627-633］

Nie CP，Li YY，Cui YD.Study on esterase isozyme of Chtysomelinae［J］.Journal of Biology，2005，22(4):28-29.［聶傳朋，李焰焰，崔亞東.葉甲亞科五種昆蟲的酯酶同工酶研究［J］.生物學(xué)雜志，2005，22(4):28-29］

Parker PG，Snow AA，Gregory MD，et al.What molecules can tell us about populations:choosing and using a molecular marker［J］.Ecology，1998，79(2):361-382.

Pradeep AR，Chatterjiee SN，Nair CV.Genetic differentiation induced by selection in an inbred population of the silkworm Bombyx mori，revealed by RAPD and ISSR marker systems［J］.Journal of Applied Genetics，2005，46(3):291-298.

Ren ZM，Ma EB，Guo YP.Genetic relationship among Oxya agavisa and other relative species revealed by Cyt b sequences［J］.Acta Genetica Sinica，2002，29(6):507-513.［任竹梅，馬恩波，郭亞平.山稻蝗及相關(guān)物種Cyt b 基因序列及其遺傳關(guān)系［J］.遺傳學(xué)報，2002，29(6):507-513］

Ren ZM，Ma EB，Guo YP.Mitochondrial DNA sequences and relationships of Oxya intricata individuals from different parts of China［J］.Acta Entomologica Sinica.2003，46(1):51-57.［任竹梅，馬恩波，郭亞平.不同地域小稻蝗mtDNA 部分序列及其相互關(guān)系［J］.昆蟲學(xué)報，2003，46(1):51-57］

Sedlmair D，Gerstmeir R，Einspainier R.Application of ubiquityin SSCP analysis in taxonomic studies within the subgenus or inocarabus［J］.European Journal of Entonology，2000，97(3):387-394.

Shen L.Development and Application of Microsatellite Markers and Caps Markers to Analyze Genetic Diversity in Silkworm，Bombyx mori［D］.Graduate University of Chinese Academy of Sciences，2004.［沈利.家蠶SSR 標(biāo)記和CAPS 標(biāo)記的篩選及其應(yīng)用［D］.中國科學(xué)院研究生院，2004］

Soltis DE，Soltis PS.Isozymes in Plant Biology［M］.Portl and Dioscorides Press.1989.

Tang H.Molecular Systematics of Some Species of Cerambycidae and the Insect Enemy and Sterile Technique of Anoplophora glabripennis［D］.Shanxi Normal University，2002.［唐樺.天?？撇糠址N類分子系統(tǒng)學(xué)以及光肩星天牛等害蟲天敵與不育技術(shù)的研究［D］.陜西師范大學(xué)，2002］

Wang XL.Research directions in the field of insect taxonomy［J］.Entomological Knowledge，2001，38(6):421-425.［王心麗.淺談昆蟲分類學(xué)的研究方向［J］.昆蟲知識，2001，38(6):421-425］

Wang ZR.Allozyme Analysis of Plant［M］.Beijing:Science Press，1996，140-158.［王仲仁.植物等位酶分析［M］.北京:科學(xué)出版社，1996，140-158］

Wang XY，Yin YP，Shi FP，et al.A molecular phylogeny of four species of genus Phanerotera based on mitochondrial cytocheome b sequences(Oethoptera:Phaneropteridae)［J］.Acta Zootaxonomica Sinica，2005，30(2):239-243.［王帥宇，殷幼平，石福明，等.露蠢屬四種昆蟲cyt b 基因序列及系統(tǒng)進化研究(直翅目，露蠢科)［J］.動物分類學(xué)報，2005，30(2):239-243］

Wei SJ，Chen XX.Progress in research on the comparative mitogenomics of insects［J］.Chinese Journal of Applied Entomology，2011，48(6):1573-1585.［魏書軍，陳學(xué)新.昆蟲比較線粒體基因組學(xué)研究進展［J］.應(yīng)用昆蟲學(xué)報，2011，48(6):1573-1585］

Williams JGK，Kubelik AR，Livak KJ，et al.DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers［J］.Nucleic Acid research，1990，18(22):6531-5.

Wilson AC，Cann RL，Carr SM，et al.Mitochondrial DNA and two perspectives on evolutionary genetics［J］.Biological Jounal of Linnean Society，1985，26(4):375-400.

Wolstenholme DR.Animal mitochondrial DNA:structure and volution［J］.International Review Cytology，1992，141(1):173-216

Xu SQ，Zheng ZM.The study on the phylogenetic relationship of Acridoidea(Orthoptera)based on the famile sugenital plate［J］.Entomotaxonomia，1999，21(2):79-83.［許升全，鄭哲民.蝗總科昆蟲雌性下生殖板及系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究(直翅目)［J］.昆蟲分類學(xué)報，1999，21(2):79-83］

Xu G，Guo YY，Wu KM.Allozyme variations within and among five geographic populations of Helicoverpa armigera(Hübner)［J］.Acta Entomologica Sinica，2000，43(suppl.):64-69.［徐廣，郭予元，吳孔明.棉鈴蟲地理種群的等位酶變異［J］.昆蟲學(xué)報.2000，43(增刊):64-69］

Yan YL，Guo RJ，Qin JD.Esterase isozymes comparison of Helicoverpa armigera(Hübner)and Helicoverpa assulta(Guenee)［J］.Acta Entomologica Sinica，1987，30(3):341-344.［閻一林，郭堯君，欽俊德.棉鈴蟲和煙青蟲酯酶同功酶比較［J］.昆蟲學(xué)報，1987，30(3):341-344］

Yang XW，Zhang XX，Chen XF，et al.RAPD-PCR analysisi of populations differntiation of green peach aphid in China［J］.Acta Entomologica Sinica，1999，42(4):372-380.［楊效文，張孝羲，陳曉峰，等.我國煙蚜種群分化的RAPD 分析［J］.昆蟲學(xué)報，1999，42(4):372-380］

Yin WY.Exploration of the new concept and its origin and taxonomic status of Protura system［J］.Science in China(Series B)，1983，(8):697-706.［尹文英.原尾蟲系統(tǒng)發(fā)生新概念及其起源與分類地位的探討［J］.中國科學(xué)(B 輯)，1983，(8):697-706］

Yu H，Xiao SG，Li HT.Application of numerical classification in the insect classification in China［J］.Journal of Henan Forestry Science and Technology，2004，24(4):32-34.［喻泓，肖曙光，李海濤.數(shù)值分類在我國昆蟲分類工作中的應(yīng)用［J］.河南林業(yè)科技，2004，24(4):32-34］

Yuan LZ，Wang SL，Zhou JC，et.al.Status of insecticide resistance and associated mutations in Q-biotype of whitefly，Bemisia tabaci，from eastern China［J］.Crop Protection，2012，31:67-71.

Zha YP，Luo QG.Application of modern technique to insect taxonomy［J］.Jiangxi Forestry Science and Technology，2005，1:34-36.［查玉平，駱啟桂.現(xiàn)代技術(shù)在昆蟲分類中的應(yīng)用.江西林業(yè)科技，2005，1:34-36］

Zhang XW.Genetic structure of pine caterpillars(Dendrolimus)populations and its influence factors［D］.Agricultural University of Hebei，2010.［張學(xué)衛(wèi).松毛蟲種群遺傳結(jié)構(gòu)及其影響因素研究［D］.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010］

Zhang AB，Kong XB，Li DM，et al.DNA fingerprinting evidence for the phylogenetic relationship of eight species and subspecies of Dendrolimus(Lepidoptera:Lasiocampidae)in China［J］.Acta Entomologica Sinica，2004，47(2):236-242.［張愛兵，孔祥波，李典謨，等.中國松毛蟲屬八個種和亞種親緣關(guān)系的DNA 指紋證據(jù).昆蟲學(xué)報，2004，47(2):236-242］

Zhang DX.Lepidopteran microsatellite DNA:redundant but promising［J］.TRENDS in Ecology and Evolution，2004，(19):507-509.

Zhu HF，Zhang GX，Zhong TS.A numerical taxonomic study of some Chinese aphids［J］.Acta Entomological Sinica，1975，18(2):211-215.［朱弘復(fù)，張廣學(xué)，鐘鐵森.蚜蟲的數(shù)值分類［J］.昆蟲學(xué)報，1975，18(2):211-215］

Zhu HF.Cladistic classification of Endoclita in China(Lepidoptera:Hepialidae)［J］.Entomotaxonomia，1984，9(4):397-401.［朱弘復(fù).中國蝙蝠蛾屬支序分類(鱗翅目:蝙蝠蛾科)［J］.動物分類學(xué)報，1984，9(4):397-401］