山羊胚胎移植技術(shù)及在農(nóng)村的推廣應(yīng)用

江秀芳

(江蘇省大豐市萬盈鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，224100)

徐淮白山羊是江蘇地區(qū)的主導(dǎo)品種，主要分布在江蘇北部的徐州地區(qū)。2013年4月開始償試在本地養(yǎng)殖戶中開展胚胎移植工作。供受體羊均為徐淮白山羊，共移植56只，獲得了43%的移植妊娠率。

由于農(nóng)村養(yǎng)殖戶每戶養(yǎng)殖數(shù)量較少且分散，這給開展胚胎移植工作帶來一定困難。為此，我們采取了一些措施，如分戶飼養(yǎng)與集體飼養(yǎng)相結(jié)合。先分散在各戶飼養(yǎng)，再在同期發(fā)情處理的第15天將所要接受移植的羊全部結(jié)合到一塊進(jìn)行集中飼養(yǎng)，集中飼養(yǎng)時(shí)間為8～10 d。

1 受體、供體的選擇及管理

1.1 受體羊的選擇及飼養(yǎng)管理

受體選擇：選擇繁殖機(jī)能正常，無傳染性疾病、健康狀況良好、膘情適中的2～6歲經(jīng)產(chǎn)羊，或羔羊斷奶1月以上的母羊作受體。移植前2個(gè)月進(jìn)行定期驅(qū)蟲，以利于抓膘，提高同期發(fā)情率及受胎率。

飼養(yǎng)管理(短期優(yōu)飼)：在移植前加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，達(dá)到中等膘情，不能過肥或過瘦。從同期發(fā)情放栓之日起要適當(dāng)增加豆類飼料和蘿卜等多汁飼料的供應(yīng)。

1.2 供體羊的選擇及飼養(yǎng)管理

供體選擇：供體一般為經(jīng)產(chǎn)2～5胎的母羊，要求身體健康狀況良好、生殖器官正常，有正常繁殖史、繁殖力較高、遺傳性能穩(wěn)定、生產(chǎn)性能優(yōu)良，羔羊斷奶1個(gè)月以上，未孕。

飼養(yǎng)管理：進(jìn)行常規(guī)傳染病和寄生蟲病的防治。飼養(yǎng)管理遵循一般繁殖羊群的原則，保持羊群體況適度，根據(jù)羊群營養(yǎng)狀況適時(shí)調(diào)整日糧標(biāo)準(zhǔn)，增加蛋白質(zhì)、能量飼料補(bǔ)充料，并注意礦物質(zhì)和維生素的供應(yīng)。

用促卵泡素(寧波三生藥業(yè))，以減量法進(jìn)行供體超排處理。用陰道栓配合促性腺激素，或用氯前列烯醇進(jìn)行受體同期發(fā)情處理。

2 胚胎回收及檢查

2.1 沖胚

在授精后68～72 h進(jìn)行手術(shù)沖胚。采用輸卵管沖胚法可獲2～8細(xì)胞期的胚胎及少量的16細(xì)胞期胚胎，用于鮮胚移植。

首先，對供體羊全身麻醉，術(shù)部消毒，采取前低后高半仰姿勢將其保定在手術(shù)臺上。在腹底部偏右側(cè)距乳房基部3～4 cm處做一長4～5 cm的縱向切口，逐層切開。切開腹膜后，將中指和食指伸入腹腔，在骨盆腔前沿膀胱之下觸摸子宮角，把子宮角牽引到切口之外，再把卵巢引出，檢查黃體發(fā)育情況，如果黃體發(fā)育正常，即沖胚。沖胚時(shí)，在輸卵管傘部前端插入一個(gè)帶有膠管的回收圓針，并用手卡住，準(zhǔn)備收集沖出的胚胎；再向輸卵管的壺腹部處，插入裝有沖胚液的進(jìn)液針頭，緩慢推入沖胚液，將胚胎沖入器皿中，沖胚液30～50 mL。一側(cè)沖洗結(jié)束時(shí)，除去器械，檢查針孔，確認(rèn)無出血現(xiàn)象，將輸卵管送回腹腔內(nèi)，然后按相同辦法進(jìn)行另一側(cè)沖胚。兩側(cè)沖洗完畢后，將子宮送回腹腔，并向腹腔內(nèi)注入25～30 ℃生理鹽水，最后逐層進(jìn)行縫合。

2.2 胚胎檢查

檢卵：將收集的沖卵液于37 ℃溫箱內(nèi)靜置10～15 min。胚胎沉底后，移去上層液。取底部少量液體移至平皿內(nèi)，靜置后，在體視顯微鏡下先在低倍(10～20倍)下檢查胚胎數(shù)量，然后在較大倍數(shù)(50～100倍)下觀察胚胎質(zhì)量。

胚胎質(zhì)量鑒定：正常發(fā)育的胚胎，其中卵裂球外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無卵裂現(xiàn)象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。

胚胎保存：用吸卵管吸取發(fā)育成熟的胚胎，放入PBS培養(yǎng)液中保存，在24～26 ℃下，保存時(shí)間不超過4～5 h。

3 受體羊胚胎移植

實(shí)行全身麻醉，術(shù)部消毒。采取前低后高半仰姿勢將受體羊保定在手術(shù)臺上，在腹底部偏右側(cè)距乳房基部3～4 cm處做一個(gè)長4～5 cm的縱向切口，逐層切開。切開腹膜后，引出子宮、輸卵管以及卵巢，檢查黃體(無黃體或黃體過小的受體羊不能移植)。若有妊娠黃體，且生殖系統(tǒng)無炎癥，即作為受體羊。將受體羊黃體一側(cè)的輸卵管傘部拔開，用裝入胚胎的注射器從此處插入3～4 cm，將胚胎注入輸卵管內(nèi)。移植結(jié)束后，把子宮角送入腹腔，在創(chuàng)口灑上抗生素，防止感染，按手術(shù)要求縫合好腹壁創(chuàng)口。

4 術(shù)后護(hù)理

4.1 供體術(shù)后護(hù)理及配種

胚胎回收手術(shù)后注意傷口護(hù)理，有問題及時(shí)處理。對季節(jié)性繁殖的品種，為了不影響其自然繁殖及次年羔羊管理，當(dāng)年只進(jìn)行一次超排，在下次發(fā)情時(shí)配種，自然繁殖。

4.2 受體術(shù)后護(hù)理與妊娠、分娩

應(yīng)加強(qiáng)術(shù)后護(hù)理、觀察，對妊娠受體適當(dāng)增加日糧營養(yǎng)，以滿足妊娠需要。妊娠后期更應(yīng)加強(qiáng)管理，防止流產(chǎn)，并做好接產(chǎn)和羔羊護(hù)理工作。

5 存在的問題

5.1 超排效果不理想

對于江蘇大豐地區(qū)來說，最佳的移植時(shí)間一般是在8月下旬至11月上旬，由于參加胚胎移植的人員中有幾個(gè)是教師，所以移植只好安排于暑假期間，但是略有些早，影響供體的超排效果。

超排效果不夠穩(wěn)定。利用外源性促性腺激素刺激多排卵并不能每次都得到預(yù)期效果，不同的個(gè)體對超排處理的反應(yīng)差異極大，排卵率很不穩(wěn)定，有的個(gè)體甚至對超排處理毫無反應(yīng)或排卵數(shù)很少，也有的個(gè)體經(jīng)超排處理后卵巢上雖有大量卵泡發(fā)育，但無排卵發(fā)生。

5.2 胚胎回收率低

位于輸卵管或子宮角內(nèi)的胚胎并不能夠全部回收，而且排卵數(shù)過多往往會降低胚胎的回收率，其原因可能是卵巢體積太大(超排處理的結(jié)果)，排出的卵子未能進(jìn)入輸卵管傘而丟失。

5.3 管理細(xì)節(jié)不到位影響效果

當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶意識比較差，不懂這方面的知識，有幾家養(yǎng)殖戶在輸精前一天的晚上偷著利用種公羊與自家不進(jìn)行胚胎移植的發(fā)情母羊配種，以至第二天所采精液品質(zhì)下降，造成供體羊受精率降低，出現(xiàn)了很多未受精卵。

考慮到養(yǎng)殖戶工作忙等問題，在剛移植完就讓其各自把羊拉回去或趕回去，我認(rèn)為路程稍微遠(yuǎn)的應(yīng)該過幾天運(yùn)輸或趕。否則造成術(shù)部損傷不利于愈合或造成早期流產(chǎn)等。