DC-CIK治療血液腫瘤的研究進(jìn)展

張慧敏 高習(xí)華 劉清池

由于環(huán)境污染、電離輻射及食品農(nóng)藥殘留等因素，血液腫瘤發(fā)病率逐年上升。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)如分子生物學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展以及人們對(duì)血液腫瘤發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的不斷深入，生物治療孕育而生，并有望成為繼化療、造血干細(xì)胞移植后治療血液腫瘤的又一有力武器。其中以DC-CIK為基礎(chǔ)的細(xì)胞免疫治療，成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，已廣泛用于多系統(tǒng)腫瘤的治療，本文就DC-CIK治療血液腫瘤的研究現(xiàn)狀做一綜述。

1 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer cells，CIK)

CIK細(xì)胞最早是Schmidt-wolf等［1］于1991年發(fā)現(xiàn)在外周血淋巴細(xì)胞中加入 IFN-γ、IL-2、CD3McAb，可培養(yǎng)出大量CD3和CD56雙陽(yáng)性的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞。CIK細(xì)胞具有增殖能力強(qiáng)、殺瘤活性高、殺瘤譜廣及非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤等特點(diǎn)，能廣泛殺傷自體、異體以及耐藥腫瘤細(xì)胞的作用［2，3］。其效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中僅占1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)后可迅速增至1 000倍以上。

2 樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)

DC細(xì)胞是體內(nèi)最重要的、功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，腫瘤患者因免疫功能缺陷不能有效提呈腫瘤抗原，DC可以有效的誘導(dǎo)靜止T細(xì)胞的增殖和應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和輔助性T淋巴細(xì)胞的生成，是機(jī)體免疫應(yīng)答的啟動(dòng)者和參與者［4］。成熟的DC可通過(guò)MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子及表面標(biāo)志白細(xì)胞分化抗原CD1分子途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制［5］。

3 DC-CIK細(xì)胞的協(xié)同抗腫瘤作用

實(shí)驗(yàn)表明，DC-CIK共培養(yǎng)的抗腫瘤效應(yīng)明顯高于單純CIK細(xì)胞或DC細(xì)胞［6］。DC-CIK細(xì)胞的抗腫瘤機(jī)制:(1)CIK細(xì)胞在體內(nèi)受某些淋巴因子作用后，可以釋放大量具有細(xì)胞毒性的胞質(zhì)顆粒，直接破壞腫瘤細(xì)胞。(2)DC-CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-2等)，不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。(3)CIK細(xì)胞有抗凋亡基因表達(dá)的作用，CIK細(xì)胞表達(dá)FasL，通過(guò)與腫瘤細(xì)胞膜表達(dá)的Fas結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［7］，并且能對(duì)腫瘤細(xì)胞持久地發(fā)揮作用。

4 DC-CIK治療血液腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究

DC-CIK作為一種新的過(guò)繼免疫細(xì)胞療法可以修復(fù)宿主受損的免疫系統(tǒng)、提高患者自身抗腫瘤細(xì)胞能力，從而有效地清除微小殘留病(MRD)［8］，預(yù)防血液腫瘤復(fù)發(fā)。

4.1 DC-CIK在急性白血病(AL)中的研究 白血病干細(xì)胞(LSC)對(duì)傳統(tǒng)的放、化療均不敏感且存在多藥耐藥，成為白血病復(fù)發(fā)的主要根源。張陽(yáng)等［9］實(shí)驗(yàn)研究表明:DC-CIK可誘導(dǎo)急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株KG-1a細(xì)胞凋亡，并對(duì)其中LSC(CD34+CD38－CD123+)有殺傷作用，與CIK組、DC-CIK組比較，尤以抗原負(fù)載的DC-CIK組(Ag-DC-CIK)LSC比例降低顯著。在國(guó)外一個(gè)Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)中，5例化療后獲得完全緩解(CR)的急性髓系白血病(AML)患者接受抗原負(fù)載DC細(xì)胞輸注治療后4例觀察到明顯的抗白血病T細(xì)胞反應(yīng)。2例患者已維持CR超過(guò)12個(gè)月［10］。國(guó)內(nèi)學(xué)者觀察中藥配合DC-CIK治療20例CR期急性白血病患者，標(biāo)志基因轉(zhuǎn)陰、達(dá)分子生物學(xué)緩解4例，微小殘留白血病轉(zhuǎn)陰性者3例;治療后3年持續(xù)CR率為75%，中位CR期25個(gè)月［11］。輸注后除5例出現(xiàn)一過(guò)性發(fā)熱外無(wú)其他嚴(yán)重不良反應(yīng)。鄧琦等［12］臨床觀察34例CR的AL患者接受DC、CIK治療，治療結(jié)束后均處于血液學(xué)和遺傳學(xué)緩解狀態(tài)，T細(xì)胞亞群、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ 等細(xì)胞因子水平、微小殘留病灶檢測(cè)取得滿意結(jié)果，且DC、CIK治療同時(shí)可促進(jìn)化療后骨髓造血功能的恢復(fù)。周東風(fēng)等［13］觀察了47例CR的AL患兒接受DC-CIK治療61例次，44例患兒持續(xù)完全緩解(CCR)，CCR率達(dá)93.62%，治療前MRD陽(yáng)性的9例，8例治療后轉(zhuǎn)陰。23例次出現(xiàn)發(fā)熱，10例次出現(xiàn)皮疹，無(wú)其他不良反應(yīng)。劉清池等［14］將48例形態(tài)學(xué)達(dá)完全緩解、未達(dá)分子生物學(xué)完全緩解的AL患者分成單獨(dú)化療組及化療聯(lián)合DC-CIK組，研究結(jié)果顯示:聯(lián)合組微小殘留白血病清除率及3年以上CCR率明顯提高，CD4+/CD8+比值顯著上升，未見(jiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。

4.2 DC-CIK在慢性粒細(xì)胞白血病(CML)中的研究王鴻鵠等［15］將CML患者外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的DC在體外用CML細(xì)胞凍融抗原(CLA)致敏，再與CML患者的 CIK細(xì)胞共同培養(yǎng)，應(yīng)用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法觀察其對(duì)自身CML細(xì)胞、K562細(xì)胞和人淋巴瘤Raji細(xì)胞的殺傷活性(CIK+CLA-DC組)，與未致敏的DC+CIK(CIK+DC組)，CIK組及CIK+CLA組進(jìn)行比較。結(jié)果表明:CIK+CLA-DC組殺傷活性最強(qiáng)。CIK+CLA-DC組對(duì)自身CML細(xì)胞的殺傷活性明顯高于對(duì)K562細(xì)胞和Raji細(xì)胞的殺傷活性。CLA抗原致敏DC介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用具有較強(qiáng)的特異性。

4.3 DC-CIK在造血干細(xì)胞移植(HSCT)后的研究Introna等［16］對(duì)接受異基因 HSCT后的患者(4例AML、3例霍奇金淋巴瘤、2 例 MDS、1 例 CML、1例ALL)輸注不同量的供者來(lái)源的CIK細(xì)胞，6例疾病進(jìn)展，3例完全緩解，1例部分緩解，1例病情穩(wěn)定，可見(jiàn)，異體CIK細(xì)胞應(yīng)用于臨床具有可行性。蘇毅等［17］觀察初治AML CR1期、接受自體HSCT聯(lián)合負(fù)載自體白血病抗原的DC-CIK細(xì)胞治療的患者32名，對(duì)照組:同期未采用DC-CIK細(xì)胞治療的AML CR1期移植患者21例，實(shí)驗(yàn)組患者CD3+CD8+和CD3+CD56+細(xì)胞比例較對(duì)照組均有所上調(diào)，分泌IFN-γ的水平較對(duì)照組明顯升高，除一過(guò)性發(fā)熱、寒顫外，無(wú)其他不良反應(yīng)。自體HSCT后經(jīng)DC-CIK細(xì)胞輸注，3年的總生存率為75.0%(24/32)，較同期未使用負(fù)載白血病抗原DCCIK細(xì)胞的自體HSCT患者的生存率47.6%明顯提高。龔奕等［18］采用自體外周血移植聯(lián)合自身白血病細(xì)胞凍融抗原負(fù)載的DC-CIK輸注治療50例AML，與既往只接受自體外周血移植但未輸注DC-CIK的52例患者進(jìn)行比較分析，除4例在輸注過(guò)程中出現(xiàn)一過(guò)性畏寒發(fā)熱反應(yīng)外其余均未出現(xiàn)不適反應(yīng)。隨訪6～24個(gè)月，輸注DC-CIK組患者總體生存率、無(wú)病生存率均高于同期未輸注DC-CIK組。薛重重等［19］應(yīng)用DCCIK細(xì)胞免疫治療自體HSCT后完全緩解血液腫瘤患者12例，7例仍完全緩解(CR)，中位CR期18(5～32)個(gè)月，2例為非常好的部分緩解(VGPR)或疾病穩(wěn)定(SD)，3例復(fù)發(fā)或疾病進(jìn)展，其中1例復(fù)發(fā)死亡。證明DC-CIK細(xì)胞治療有助于清除移植后微小殘留病和提高患者生存率。

4.4 DC-CIK在多發(fā)性骨髓瘤(MM)中的研究 Mar-ten等［20］觀察負(fù)載了腫瘤特異性抗原的DC-CIK細(xì)胞對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的殺傷能力大大增強(qiáng)。羅云等［21］用LDH釋放法檢測(cè):異基因CIK細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK細(xì)胞均對(duì)骨髓瘤U266細(xì)胞有殺傷活性，且在相同效靶比時(shí)后者比前者殺傷活性更強(qiáng)。Lin等［22］給予1例71歲伴有肺癌的MM患者CIK過(guò)繼治療，治療后患者免疫功能改善，生命質(zhì)量提高，MM和肺癌病灶長(zhǎng)期穩(wěn)定，體現(xiàn)了良好的療效。

4.5 DC-CIK在淋巴瘤中的研究 艾麗梅等［23］在DC-CIK抗淋巴瘤細(xì)胞免疫效應(yīng)研究中，分為DC、DCT、CIK和DC-CIK四組，DC-CIK組細(xì)胞因子IL-12、IL-17 和 IFN-γ 分泌量、CD8+、CD3+/CD56+細(xì)胞及對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞株Raji殺傷活性均較其他三組強(qiáng)，得出結(jié)論:DC-CIK細(xì)胞抗淋巴瘤免疫效應(yīng)與分泌大量的細(xì)胞因子和產(chǎn)生細(xì)胞毒性細(xì)胞有關(guān)。在臨床應(yīng)用中，Leemhuis等［24］對(duì)9例接受自體HSCT后復(fù)發(fā)的非霍奇金淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤患者進(jìn)行自體CIK細(xì)胞治療，結(jié)果顯示，2例病情穩(wěn)定，2例獲得部分緩解，也進(jìn)一步證實(shí)CIK細(xì)胞體外擴(kuò)增的可行性及輸注安全性。孫薏等［25］用負(fù)載自身腫瘤裂解物的DC-CIK治療9例復(fù)發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤患者，5例影像學(xué)復(fù)查顯示腫瘤較治療前明顯縮小，除一過(guò)性發(fā)熱、畏寒外未見(jiàn)其他不良反應(yīng)。9例患者隨訪時(shí)間6～18個(gè)月，中位隨訪時(shí)間11個(gè)月。

DC與CIK共培養(yǎng)后，提高了細(xì)胞的增殖速度、殺傷活性及特異性，DC-CIK在惡性血液病治療中具有廣泛的應(yīng)用前景，除發(fā)熱外無(wú)其它明顯毒副作用，但作為一種新的免疫治療手段，仍存在很多問(wèn)題需要更加深入的研究，如DC-CIK的最佳培養(yǎng)技術(shù)、應(yīng)用劑量、回輸途徑、免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo)、臨床療效評(píng)價(jià)指標(biāo)及聯(lián)合應(yīng)用最佳組合等尚待進(jìn)一步探討、規(guī)范和統(tǒng)一。

1 Schmidt-wolf IG，Negrin RS，Kiem HP，et al.Use of a SCI-D mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor activity.J EXP MED，1991，174:139-149.

2 Yamaguchi Y，Ohshita A，Kawabuchi Y，et al.Adoptive im-munotherapy of cancer using activated autologous lymphocytes current status and new strategies.Hum Cell，2003，16:183-189.

3 Marin V，Pizzitola I，Agostoni V，et al.Cytokine-induced killer cells for cell therapy of acute myeloid leukemia:Improvement of their immune activity by expression of CD33-specific chimeric receptors.Haematologica，2010，95:2144-2152.

4 Tuyaerts S，Van Meirvenne，Bonehill A，et al.Expression of human GITRL on myeloid dendritic cells enhances their immunosti-mulatory function but does not abrogate the suppressive effect of CD4+CD25+regulatory T cells.Journal of Leukocyte Biology，2007，82:93-105.

5 Scott M，Seissler J.Dendritic cell vaccination:new hope for the Treatment of metastasized endocrine malignancies.Trends Endocrinol Metab，2003，14:156-162.

6 De Maria A，Bozzano F，Cantoni C，et al.Revisiting hu-man natural killer cell subset function revealed cytolytic CD56(dim)CD16+NK cells as rapid producers of abundant IFN-gamma on activation.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108:728-732.

7 Kim HM，Kang JS，Lim J，et al.Antitum or activity of cytokine-induced killer cells in nude mouse xeno graft model.Arch Pharm Res，2009，32:781-787.

8 Wang QJ，Wang H，Pan K，et al.Comparative study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer(CIK)cells，dendritic cells-CIK(DC-CIK)，and semi-allogeneic DC-CIK.Chin J Cancer，2010，29:641-648.

9 張陽(yáng)，張連生，曾鵬云.DC-CIK對(duì)急性髓細(xì)胞白血病干細(xì)胞的殺傷作用.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2011，18:404-408.

10 Roddie H，Klammer M，Thomas C，et al.PhaseⅠ/Ⅱ study of vaccination with dendritic-like leukaemia cells for the immunotherapy of acute myeloid leukaemia.Br J Haematol，2006，133:152-157.

11 劉清池，吳維海，李剛榮，等.凌丹康復(fù)方配合DC-CIK治療白血病臨床觀察.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29:347-350.

12 鄧琦，白雪，李玉明.樹突狀細(xì)胞、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞用于急性白血病治療的研究.天津醫(yī)藥，2010，38:967-970.

13 周東風(fēng)，翟麗娜，潘峰，等.樹突狀細(xì)胞與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)繼免疫治療兒童急性白血病.實(shí)用兒科臨床雜志，2012，27:166-169.

14 劉清池，張慧敏，張玉娜，等.DC-CIK細(xì)胞清除微小殘留白血病的臨床研究.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2013，20:398-403.

15 王鴻鵠，徐開林，潘秀英，等.抗原沖擊致敏的樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的特異性體外抗慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞作用.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2003，11:278-281.

16 Introna M，Borleri G，Conti E et al.Repeated infusions of donor-derived cytokine-induced killer cells in patients relapsing after allogeneic stem cell transplantation:a phase I study.Haematologica，2007，92:952-959.

17 蘇毅，易海，范方教，等.荷載自體白血病抗原的DC-CIK細(xì)胞預(yù)防急性髓細(xì)胞性白血病自體造血干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)的臨床研究.中國(guó)輸血雜志，2010，23:1024-1028.

18 龔奕，陳幸華，張曦，等.DC-CIK細(xì)胞輸注治療急性髓細(xì)胞白血病50 例分析.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40:3039-3041.

19 薛重重，楊麗萍，徐新，等.血液腫瘤患者自體HSCT后DC/CIK免疫治療的療效觀察.中華全科醫(yī)學(xué)，2012，10:341-342.

20 Marten A，Renoth S，von Lilienfeld Toal M，et al.Enhanced lytic activity of cytokine-induced killer cells against multiple myeloma cells after coculture with idiotype-pulsed dendritic cells.Haematologica，2001，86:1029-1037.

21 羅云，白鳳霞，張萍，等.骨髓瘤細(xì)胞裂解物致敏的DC-CIK細(xì)胞抗骨髓瘤細(xì)胞作用.腫瘤免疫學(xué)，2012，28:986-988，991.

22 Lin J，Zhu HL，Lu XC，et al.Autologous cytokine-induced killer cells in the treatment of multiple myeloma concomitant with lung cancer and paraneoplaste dermatoses.Intern Med，2010，49:2341.

23 艾麗梅，毛淑丹，宋盈盈，等.DC-CIK細(xì)胞體外抗淋巴瘤細(xì)胞的免疫效應(yīng)研究.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2010，26:898-900.

24 Leemhuis T，Wells S，Scheffold C，et al.A phase I trial of autologous cytokine-induced killer cells for the treatment of relapsed Hodgkin disease and non-Hodgk in lympoma.Blood Marrow Transplant，2005，11:181-187.

25 孫薏，陳健，蔡鵬，等.用抗原特異性樹突狀細(xì)胞激活的淋巴細(xì)胞治療復(fù)發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2010，18:219-223.