肺癌患者血清中血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及與臨床分型和分期的關(guān)系

黃冬梅 鄒雪松 胡衛(wèi)盟 趙志國

腫瘤流行病學(xué)資料顯示，肺癌占惡性腫瘤死亡的第一位［1］。在臨床上多依靠影像學(xué)診斷和病理學(xué)，超過半數(shù)的患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就已經(jīng)是肺癌晚期。因此，肺癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵，而血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的檢測也許能作為肺癌早期診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)［2］。VEGF是一種選擇性促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，它能增加血管通透能力，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分裂，促進(jìn)血管新生，同時(shí)可引起細(xì)胞外基質(zhì)改變而有利于腫瘤細(xì)胞在合適的微環(huán)境下形成新的轉(zhuǎn)移灶舊［3，4］，是目前發(fā)現(xiàn)最重要的血管形成促進(jìn)劑之一，對腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有重要影響。研究證實(shí)，VEGF與肺癌的新生血管和淋巴管的生成以及腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)［5，6］。我們通過酶聯(lián)免疫學(xué)方法測定健康人群和肺癌患者血清VEGF的水平，旨在探討VEGF在肺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用和作為一種腫瘤標(biāo)志物的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 肺癌組:本實(shí)驗(yàn)研究對象，肺癌患者(肺癌組)，均為2009年9月至2013年5月在河北承德市中心醫(yī)院胸外科住院的經(jīng)病理證實(shí)為肺癌的患者，去除血管增生性疾病和合并其他癌癥的患者85例，男57例，女28例;年齡(55±11)歲;其中I～Ⅱ期14例，Ⅲ期30例，Ⅳ期41例;其中腺癌31例，鱗癌43例，大細(xì)胞癌6例，小細(xì)胞癌5例。

1.1.2 肺部良性疾病組:為同期本院住院的肺部良性疾病患者40例，其中男25例，女15例;年齡(59±10)歲;支氣管擴(kuò)張癥5例，肺結(jié)核10例，慢性阻塞性肺疾病5例，慢性支氣管炎5例，肺炎10例，肺膿腫5例;根據(jù)其臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查及醫(yī)學(xué)影像學(xué)等綜合檢查確診。

1.1.3 健康對照個(gè)體(健康組)，40例健康對照為本院健康體檢的人員，其中男27例，女13例;年齡(53±8)歲。

1.2 標(biāo)本的采集 符合入選標(biāo)準(zhǔn)的所有受檢者均采肘靜脈血4 ml，3 000 r/min離心15 min，分離血清，取上清液，分裝保存于-30℃冰箱待測。

1.3 VEGF的檢測 本實(shí)驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定。儀器為美國BioRad公司的BioRad450酶標(biāo)儀。試驗(yàn)過程:在20～25℃室溫下進(jìn)行。(1)取出試劑盒，放置30 min，使試劑平衡至室溫。(2)取出酶標(biāo)板，在空白對照孔內(nèi)加入100 μl的蒸餾水。(3)按照次序分別將不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液各100 μl加入微孔中。(4)將標(biāo)本血清各100 μl依次加入剩余微孔中。(5)在各微孔中加入50 μl的酶標(biāo)記溶液(不含空白對照孔)。(6)將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng)1 h(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)。(7)取出酶標(biāo)板，用洗板機(jī)清洗酶標(biāo)板5次，保持各孔有充足的水壓(濃縮洗液以1∶100的比例與蒸餾水稀釋)。(8)各孔加入顯色劑A、B液各50 μl，在20～25℃下避光反應(yīng)15 min，最后各孔加入50 μl終止液，終止反應(yīng)。(9)在30 min內(nèi)在波長450 nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值，計(jì)算VEGF的濃度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組VEGF水平比較 肺癌組與肺部良性疾病組、健康對照組比較，其VEGF血清水平均升高(P＜0.05)。見表1。

表1 肺癌組、肺部良性疾病組和健康對照組VEGF水平比較pg/ml，±s

表1 肺癌組、肺部良性疾病組和健康對照組VEGF水平比較pg/ml，±s

注:與肺癌組比較，*P＜0.05

組別VEGF肺癌組(n=58)312±109肺部良性疾病組(n=40)140±56*健康組(n=40)130±44*

2.2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關(guān)系 血清VEGF水平在鱗癌和腺癌患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。見表2。

表2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關(guān)系pg/ml，±s

表2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關(guān)系pg/ml，±s

VEGF鱗癌組(n=43)組別302±101腺癌組(n=31)326±115

2.3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關(guān)系

血清VEGF水平隨著臨床分期的遞增而顯著上升，其血清水平為Ⅳ期﹥Ⅲ期﹥I～Ⅱ期，3組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。見表3。

表3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關(guān)系pg/ml，±s

表3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關(guān)系pg/ml，±s

注:與Ⅰ ～Ⅱ期比較，*P＜0.05;與Ⅲ期比較，#P＜0.05

VEGFⅠ～Ⅱ期(n=14)組別180±86Ⅲ期(n=30)291±110*Ⅳ期(n=41)373±120*#

3 討論

雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)水平在不斷地發(fā)展和進(jìn)步，但是近年來肺癌的5年生存率并未有明顯的提高。腫瘤學(xué)近年來的重大進(jìn)展之一，就是確立了腫瘤血管生成(angiogensis)在腫瘤發(fā)展過程中的重要地位和抗血管生成治療腫瘤的意義，即腫瘤組織內(nèi)的微血管形態(tài)、分布、數(shù)量及血液循環(huán)等對于腫瘤的形成機(jī)制、治療和預(yù)后判定有著十分重要的意義。

惡性腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移都需要新生血管的生成，并且腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)血管生成的能力與其侵襲能力相關(guān)［7］。VEGF是重要的血管生成因子，是腫瘤血管新生的核心和關(guān)鍵因子。

VEGF是一種選擇性促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，它能夠增加血管通透能力，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分裂，促進(jìn)血管新生，同時(shí)可引起細(xì)胞外基質(zhì)改變而有利于腫瘤細(xì)胞在合適的微環(huán)境下形成新的轉(zhuǎn)移灶，是目前發(fā)現(xiàn)最重要的血管形成促進(jìn)劑之一，對腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移及預(yù)后有重要的影響［3，4］。

VEGF的表達(dá)主要出現(xiàn)在肺癌細(xì)胞胞漿內(nèi)，其表達(dá)水平與腫瘤組織的血管生成程度有關(guān)，并和腫瘤的惡性程度成顯著的正相關(guān)［8］。近年來的許多研究證實(shí)，VEGF與肺癌的新生血管和淋巴管的生成以及腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示肺癌患者血清VEGF的濃度較健康人顯著升高且血清VEGF水平隨著臨床分期的遞增而顯著上升，提示VEGF可能在肺癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，這與VEGF促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤的血管新生、促腫瘤生長的研究報(bào)道一致［9，10］。本研究同時(shí)還顯示VEGF血清水平為Ⅳ期﹥Ⅲ期﹥I～Ⅱ期，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示血清VEGF越高可能肺癌分期越晚，預(yù)后越差。這與既往研究證實(shí)的血清或血漿的VEGF水平升高與腫瘤已達(dá)晚期或不良預(yù)后呈正相關(guān)［6，11，12］一致。因此，本研究結(jié)果為明確血清中VEGF水平在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用以及作為肺癌的腫瘤標(biāo)志物的可行性提供了一定的依據(jù)。

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